有核紅細胞模擬粒子，血液質控物及其制備方法和用途技術

本發明專利技術一方面提供了一種有核紅細胞模擬粒子，該粒子為結合了熒光染色抑制劑的白細胞，該抑制劑與細胞內的細胞核或核酸穩定結合，從而降低該粒子在檢測時與熒光染料的結合能力。本發明專利技術另一方面提供了一種有核紅細胞模擬粒子的制備方法，所述方法步驟包括以下步驟：(a)獲得洗滌純化后的白細胞；(b)將白細胞懸浮于含有熒光染色抑制劑的細胞處理液中，所述抑制劑與細胞內的細胞核或核酸穩定結合；(c)對所得產物進行洗滌。本發明專利技術還提供一種含有有核紅細胞模擬粒子的血液質控物。本發明專利技術還提供了有核紅細胞模擬粒子及其血液質控物在血液細胞分析儀質控中的用途。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及血液分析質控物。具體地講，本專利技術涉及有核紅細胞模擬粒子，包含所 述有核紅細胞模擬粒子的血液質控物，以及它們的制備方法，和所述有核紅細胞模擬粒子 和質控物在以熒光-散射光法為檢測原理的血液細胞分析儀質量控制上的用途。
技術介紹
人類正常成熟紅細胞不含有細胞核。但在特殊情況，包括某些病理情況下，人類外 周血中會出現有核紅細胞(nucleated red bloodcell, NRBC，也稱為erythroblast)，即一 種幼稚的紅細胞。對有核紅細胞的檢測可以為某些疾病的診斷提供依據。部分高端血液細 胞分析儀配備有核紅細胞檢測功能，其檢測原理包括阻抗法、熒光-散射法等。對配備有核紅細胞檢測功能的血液細胞分析儀進行質量控制，需要使用含有有核 紅細胞模擬粒子的質控物。在有核紅細胞模擬粒子的制備方面，已有一些公開的技術方案。美國專利US7176031和US696^17公開了使用人工合成粒子模擬人有核紅細胞的 方法。這種方法的缺陷在于合成粒子的生產工藝復雜，成本較高。美國專利US73M767公 開了使用普通哺乳動物紅細胞(不含細胞核)制備有核紅細胞模擬粒子的方法。這種方法 制備的模擬粒子與人有核紅細胞的細胞核大小接近，適用于采用阻抗法檢測有核紅細胞的 血液細胞分析儀。但這種模擬粒子不含細胞核，不適于模擬人有核紅細胞被特定熒光染料 染色后的熒光特性。美國專利US7195919公開的技術方案通過在紅細胞表面連接生物大分 子(如核酸、肽鏈等)，使其能夠模擬人有核紅細胞的熒光特性。這種方法的不足之處在 于工藝復雜，且作為原料的生物大分子成本較高。美國專利US6723563和US6653137提出用鳥類(如火雞或雞)、爬行類(如短吻 鱷)或魚類(如鮭魚)的紅細胞為原料制備有核紅細胞模擬粒子。美國專利US6406915、 US6403377、US6399388、US6221668和US6200500公開了使用火雞紅細胞制備有核紅細胞模 擬粒子的方法。美國專利US6448085公開了使用雞紅細胞制備有核紅細胞模擬粒子的方 法。美國專利US6187590和US5858790公開了使用火雞、雞和鮭鱒類魚的紅細胞制備有核 紅細胞模擬粒子的方法。美國專利US7285417、US7135341和US7198953公開了使用短吻 鱷紅細胞制備有核紅細胞模擬粒子的方法。這些技術方案的共同點是使用帶有細胞核的 動物紅細胞，包括鳥類、爬行類和魚類的紅細胞模擬人有核紅細胞。這種方法的不足之處在 于，絕大多數鳥類、爬行類和魚類的紅細胞呈橢圓形，與近圓形的人類有核紅細胞形態差異 較大。因此在某些情況下，這些動物有核紅細胞并不能很好的模擬人有核紅細胞的特征。例 如，運用流式細胞術對細胞進行檢測時，橢圓形細胞通過流動室方向不一致，因而產生大小 差異很大的前向散射光信號，而圓形或近圓形細胞則不會出現這種狀況。因此，本領域需要采用簡單、經濟的方法獲得的更好模擬效果的有核紅細胞模擬 粒子，特別是適用于熒光-散射光法為檢測原理的細胞血液分析儀質量控制的有核紅細胞 模擬粒子。
技術實現思路
本專利技術一方面提供了一種有核紅細胞模擬粒子，所述粒子為結合了熒光染色抑制 劑的白細胞或白細胞亞群，所述抑制劑與細胞的細胞核或核酸穩定結合，降低所述粒子在 檢測時與熒光染料的結合能力。所述熒光染色抑制劑選自非熒光的染料，熒光量子產率比檢測用熒光染料的熒光量子產率低的熒光染料，熒光光譜與檢測用熒光染料的熒光光譜差別大的熒光染料，和能與核苷結合的化合物。本專利技術另一方面提供了一種血液質控物，所述質控物包含本專利技術所提供的有核紅 細胞模擬粒子。本專利技術又一方面提供了一種有核紅細胞模擬粒子的制備方法，所述方法包括，富集含有白細胞的血液中的白細胞或白細胞亞群，將得到的白細胞或白細胞亞群懸浮于含有熒光染色抑制劑的細胞處理液中，所述 抑制劑與細胞的細胞核或核酸穩定結合，對所得產物進行洗滌。所述熒光染色抑制劑選自非熒光染料、熒光量子產率比檢測用熒光染料的熒光量 子產率低的熒光染料、熒光光譜與檢測用熒光染料的熒光光譜差別大的熒光染料和能與核 苷結合的化合物。本專利技術還一方面提供了一種血液質控物的制備方法，將本專利技術所提供的有核紅細 胞模擬粒子與其他血液細胞模擬物，如白細胞、紅細胞、血小板等的一種或幾種混合與細胞 保存液中。本專利技術再一方面涉及有核紅細胞模擬粒子和質控物在血液細胞分析儀質量控制 中的應用。還涉及了本專利技術所提供的熒光染色抑制劑在制備有核紅細胞模擬粒子中的應用。本專利技術所公開的方法采用白細胞或白細胞亞群經熒光染色抑制劑處理后模擬有 核紅細胞，更好地模擬人有核紅細胞的特征，且不必使用核酸或類似生物多聚物，步驟簡 單，成本低廉，可方便地實現血液質控物的工業化生產。附圖說明圖1是含有有核紅細胞的臨床血樣的散點圖(僅提供有核紅細胞通道)，圖中橫軸 表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖2是實施例1中未經染色的白細胞散點圖(僅提供有核紅細胞通道)，A為白細 胞區域。圖中橫軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖3是實施例1中經甲苯胺藍0染色的白細胞散點圖(僅提供有核紅細胞通道)， A為白細胞區域，B為有核紅細胞區域。圖中橫軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光 強度。圖4是實施例2中未經染色的粒細胞散點圖(僅提供有核紅細胞通道)。圖中橫 軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖5是實施例2經瑞氏染色的粒細胞散點圖(僅提供有核紅細胞通道)。圖中橫 軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖6的是實施例2中未經染色的粒細胞和經瑞氏染色的粒細胞混合物的散點圖 (僅提供有核紅細胞通道)。圖中橫軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖7是實施例3中經中性紅染色的粒細胞散點圖(僅提供有核紅細胞通道)。圖 中橫軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖8是實施例3中未經染色的粒細胞和經中性紅染色的粒細胞混合物的散點圖 (僅提供有核紅細胞通道)，圖中橫軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。圖9是實施例4中未經染色的粒細胞和經吖啶橙染色的粒細胞混合物的散點圖 (僅提供有核紅細胞通道)，圖中橫軸表示側向熒光強度，縱軸表示前向散射光強度。具體實施例方式本專利技術的其它方面和優點在閱讀以下描述和具體實施方案后將變得顯而易見。有核紅細胞樽擬粒子本專利技術一個實施方案提供了 一種有核紅細胞模擬粒子。所述有核紅細胞模擬粒子 為結合了熒光染色抑制劑的白細胞或白細胞亞群，細胞的細胞核或核酸與所述抑制劑穩定 結合，降低所述粒子在檢測時與熒光染料的結合能力；所述抑制劑選自非熒光的染料、比檢 測用熒光染料的熒光量子產率低的熒光染料、與檢測用熒光染料的熒光光譜差別大的熒光 染料和能與核苷結合的化合物。所述有核紅細胞模擬粒子適用于熒光-散射光法檢測有核 紅細胞的血液細胞分析儀。一般來說，熒光-散射光法檢測有核紅細胞的步驟包括用一定的溶血劑和檢測 用熒光染料處理血液，使紅細胞溶解，而白細胞和有核紅細胞與檢測用熒光染料結合，被染 色。用流式細胞術對染色后的細胞進行檢測，根據熒光強度和散射光強度信號，可以將有核 紅細胞同白細胞區分開，實現對有核紅細胞的計數。例如，申請號為20081021^67. 2的中 國發本文檔來自技高網...

【技術保護點】
１．一種有核紅細胞模擬粒子，其特征在于：所述粒子為結合了熒光染色抑制劑的白細胞或白細胞亞群，所述抑制劑與細胞的細胞核或核酸穩定結合，降低所述粒子在檢測時與熒光染料的結合能力。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧橙，徐祖越，劉鶴，
申請(專利權)人：深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司，
類型：發明
國別省市：94