一種羅丹明B快速檢測卡及其檢測方法技術(shù)

一種羅丹明B快速檢測卡及其檢測方法，屬于食品中違法添加的非食用物質(zhì)檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)羅丹明B快速檢測卡外殼內(nèi)有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜或乳膠顆粒膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗羅丹明B抗體的膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗羅丹明B抗體的乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測帶，一條為含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本發(fā)明專利技術(shù)優(yōu)點是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B含量。本發(fā)明專利技術(shù)羅丹明B快速檢測卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種羅丹明B快速檢測卡及其檢測方法，是一種檢測羅丹明B的檢測器具，屬于食品中違法添加非食用物質(zhì)檢測

技術(shù)介紹
羅丹明B又稱若丹明B、玫瑰紅、花粉紅等，英文名稱為Iihodamine B，是一種人工合成的工業(yè)染料，主要用于紡織品、皮革制品、木制品、有色玻璃等的染色，與蘇丹紅一樣對人體具有致癌作用，2008年被列入第一批食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)黑名單，但由于羅丹明B具有價格低廉、色澤紅艷、穩(wěn)定性強等特點，常被不法商販用作替代食品添加劑的著色劑，嚴(yán)重危害人們的飲食安全。目前，我國沒有檢驗食品中羅丹明B的國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，也沒有快速檢測與鑒定方法。為了滿足對污染物殘留監(jiān)控的需要，以及食品出口企業(yè)對外貿(mào)易的需要，亟需建立食品中羅丹明B的檢測方法。目前，檢測食品中違法添加的羅丹明B的主要方法有高效液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用等進行定性和定量的分析。這些方法對實驗儀器設(shè)備要求高，操作繁瑣，對操作人員的專業(yè)知識要求高，費時費力。因此建立一種準(zhǔn)確可靠又快速方便的檢測食品中違法添加的羅丹明B的分析方法是非常必要的。本專利技術(shù)擬專利技術(shù)一種基于小分子物質(zhì)羅丹明B偶聯(lián)蛋白質(zhì)后而具有抗原性的免疫學(xué)檢測方法，采取免疫學(xué)競爭法的原理，結(jié)合膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計的一種快速檢測試劑，可快速特異地檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B。根據(jù)檢測卡樣品檢測線和質(zhì)控線的有無顯色來判定果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B含量。反應(yīng)是利用羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性而建立的一種檢測方法，具有特異性強的優(yōu)點，可避免其它檢測方法的假陽性導(dǎo)致的誤檢問題。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設(shè)備，既可以在實驗室進行，也可在超市、家庭、車間等實地進行測定。由于樣本量需要少、簡便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，準(zhǔn)確率大。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種能檢測羅丹明B的檢測器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)的方法檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中羅丹明B的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測的操作繁瑣等缺點，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測方法。本專利技術(shù)的技術(shù)方案一種羅丹明B快速檢測卡，其為在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼表面有檢測窗孔3和加樣孔4 ；測試條2是由支承背板 5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜或乳膠顆粒膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9， 另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7 ；膠體金膜為含抗羅丹明B抗體的膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗羅丹明B抗體的乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含羅丹明 B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶11，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。采用上述羅丹明B快速檢測卡，檢測樣品為果醬、飲料、辣椒油、臘魚或臘肉等，處理方法如下取樣品lg，加入IOmL含體積分?jǐn)?shù)20%丙酮的正己烷，震搖lOmin，靜置或過濾使分離出上層清液，殘渣加入IOmL含體積分?jǐn)?shù)20%丙酮的正己烷重復(fù)提取一次，合并2次提取液，混勻，移取提取液于氮氣吹干儀上吹干，用0. OlM的PBS緩沖液重溶，用于檢測。當(dāng)檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣品中羅丹明B含量未超標(biāo)。當(dāng)檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中羅丹明B含量超標(biāo)。當(dāng)檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。本專利技術(shù)的有益效果本專利技術(shù)的優(yōu)點是能檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中含有的羅丹明B，易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。附圖說明圖1羅丹明B快速檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、 檢測窗孔，4、加樣孔。圖2測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測帶，11、 質(zhì)控帶。圖3羅丹明B快速檢測卡的檢測試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜， 7、膠體金膜或乳膠顆粒膜，8、樣品墊，9、吸水膜。具體實施例方式本專利技術(shù)結(jié)合具體實施例參見附圖進一步說明如下 實施例1一種羅丹明B快速檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm，厚 5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內(nèi)。測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測帶10，含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 —端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7，膠體金膜或乳膠顆粒膜7是含抗羅丹明B單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記物的玻璃纖維膜。膠體金膜或乳膠顆粒膜7厚 0. 5-0. 8mm,長 5mm，寬 4mm。樣品墊 8 厚 0. 5-0. 8mm,長 20mm，寬 4mm。吸水膜 9 厚 0. 5-0. 8mm, 長16-20mm，寬4mm。膠體金膜或乳膠顆粒膜7、樣品墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜搭接長度為l-2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。本專利技術(shù)羅丹明B檢測卡用于果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B的檢測。實施例2樣品的處理方法如下取樣品lg，加入IOmL含體積分?jǐn)?shù)20%丙酮的正己烷，震搖lOmin，靜置或過濾使分離出上層清液，殘渣加入IOmL含體積分?jǐn)?shù)20%丙酮的正己烷重復(fù)提取一次，合并2次提取液，混勻，移取提取液于氮氣吹干儀上吹干，用0. OlM的PBS緩沖液重溶，待用。使用羅丹明B快速檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔4中滴注入羅丹明B快速檢測卡的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜或乳膠顆粒膜7所含的抗羅丹明B單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜 6擴散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記的抗體，在測試帶上分別與含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢羅丹明B存在，當(dāng)樣品加入后即與抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會與檢測帶所含的羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)，從而不顯色。 主要反應(yīng)的結(jié)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
１．一種羅丹明Ｂ快速檢測卡，其特征在于：在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼（１）中設(shè)置測試條（２），檢測卡外殼表面有檢測窗孔（３）和加樣孔（４）；測試條（２）是由支承背板（５）上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊（８）、膠體金膜或乳膠顆粒膜（７）、硝酸纖維素膜（６）、和吸水膜（９）所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜（６），支承背板一端疊置粘貼吸水膜（９），另一端疊置粘貼樣品墊（８），吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜（７）；膠體金膜為含抗羅丹明Ｂ抗體的膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗羅丹明Ｂ抗體的乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是：含羅丹明Ｂ蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶（１０），含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶（１１），測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周堅，吳文曄，熊曉芳，
申請(專利權(quán))人：無錫安迪生物工程有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：32