本發明專利技術涉及體外診斷結直腸癌的方法，特征在于使用針對ＰＤＩ表位的至少一種抗ＰＤＩ單克隆抗體確定取自懷疑患有結直腸癌的患者的生物樣品中蛋白質二硫化物異構酶腫瘤標記物的存在，所述ＰＤＩ表位選自ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２和在ＰＤＩ的三維結構中與之接近的芳族氨基酸、以及ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３所示的表位。所述方法可用于對結直腸癌進行早期診斷、篩查、治療隨診和預后，以及與結直腸癌相關的復發診斷。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】本專利技術涉及癌學領域。更特別地，本專利技術的主題是體外診斷人類患者中結直腸癌 的方法，通過確定取自這個患者的生物樣品中蛋白質二硫化物異構酶的存在進行診斷，所 述方法可以用于結直腸癌相關的早期診斷、篩查、治療隨診和預后以及用于復發診斷。結直腸癌(CRC)是主要的公眾健康問題。在1996年估計全世界有875，000例新 發病例^考慮到男女兩種性別，這是在西方國家最常見的癌癥，其通常被分類為是由于癌 癥所致死亡的前3名最常見疾病。所有階段都考慮在內，5年存活率在60%的范圍。唯有早期診斷可以幫助治療。然而目前還沒有早期血清學篩查檢測或者特異性診 斷檢測。目前在歐洲進行的結直腸癌篩查是用兩種不同方法進行首先，使用亞臨 床(paraclinical)檢測，其包括查找糞便中血液的存在(便潛血檢測，F0BT，例如以 Hemoccult⑩名稱銷售)。這種技術已經證實其臨床有效性。當在年齡為50-74歲的個體 中每兩年使用時，其可以使結直腸癌所致死亡率降低15-20% 2。為此，需要一半以上的人 群定期進行篩查以及對陽性檢測結果的個體進行結腸鏡檢，任選隨后進行適當治療。然而，這種篩查技術具有某些不利之處·這種檢測的主要缺點是其靈敏性一般，特別是對于腺瘤(癌前異常病變)，如果 其較大，通常導致1/10病例發生癌癥。·這種檢測也不是非常特異性的。糞便中出現血液也許與非腫瘤病變相關潰瘍 性結腸炎、痔瘡、瘺管等。在這種情況中，必須進行結腸鏡檢查，其缺點在后文描述。·最后，Hemoccult檢測難以解釋，其必須在專業中心由專業人士解讀。也已經描述了特異于人血紅蛋白的免疫學檢測(Feca EIA . ,Heme Select; 等)。與Hemoccult. 相比其可能取得進展，但其基本上還存在相同的問題。因此，由 Enterix公司銷售的hSure 可以檢測87%的患有CRC的患者以及47%的具有癌前息肉 的那些患者。這是在糞便中檢測人血紅蛋白的一種檢測方法，更特別是檢測這個分子的球 蛋白部分。另一種篩查方法是在50歲以后系統進行結腸鏡檢，這樣在理論上可以降低結直 腸癌所致死亡率。然而，在健康個體中使用內窺鏡篩查以降低死亡率的這種檢驗的可接受 性太低(在設立這種篩查策略的歐洲國家的結腸鏡檢查的依從水平為大約2%)。不僅存 在一定的結腸穿孔和出血的危險(0. 1%。)和死亡危險(1/10000)，而且對于公共衛生事業 是非常昂貴的。此外，結腸鏡檢查需要非常限制性的提前結腸準備，這在很大程度上造成依 從性不佳。很久以來關于結直腸癌已經描述了可以通過免疫測定法測定的腫瘤標記物。這些 標記物特別是癌胚抗原(CEA)和CA19-9。使用CEA用于隨診。其不可以用于篩查或者早期診斷結直腸癌，因為其靈敏性和 特異性不足。這是因為這種標記物也由其它類型癌癥表達，在良性病變中也表達。盡管如 此，通過將CEA與另一腫瘤標記物如CA19-9或者CA72-4組合可以增加靈敏性而不喪失特 異性。導致CA19-9發生生理變異的因素較罕見，但是其它良性病變(肝膽病變、胰腺病 變)或者惡性病變可誘導CA19-9增加。單獨的這種標記物因此對于診斷也是無意義的。盡 管如此，因為其血清濃度與腫瘤的大小和轉移癌的存在相關，因此其可用于治療隨診或者 早期證實復發。此外，已經提出一些可商購的檢測方法，如> Colopath /ColorectAlertMD，由Ambrilia銷售，這是針對CRC的一種快速且相對非侵入性篩查檢測。Colopath 檢測具有結直腸病變的個體直腸粘液中縮醛磷脂(復 合脂質，是磷脂的一部分)，而ColorectAlert 檢測T-抗原，這是在直腸粘液中的一種復合 糖。Colopath /ColorectAlert 檢測包括將直腸粘液用于試紙條，基于khiff反應獲得 陽性或者陰性結果。Ambrilia研究了 1787名個體，證實Colopath /ColorectAlert 檢 測出M%的早期結直腸癌病例以及49%的所有階段病例。> COLARIS,由Myriad Genetics銷售，這是檢測血液中MLHl和MSH2基因突變的 一種檢測方法，用以篩查遺傳性非息肉型結腸癌(HNPCC綜合征)。這個檢測的結果在3周 內獲得。Myriad使用目前可用的最靈敏及最具有特異性的測序技術。這種檢測方法很昂貴。>Di -70 ，由AMDL銷售，這是篩杳不同類型癌癥(肺癌、結腸癌、乳腺癌、肝癌、 胃癌等)的一種檢測方法。因此其對于CRC是非特異性的。所述檢測方法的原理基于雙夾 心ELISA技術(測定DR-70抗原)。通過酶反應揭示(抗體與生物素或者與鏈霉抗生物素 蛋白結合)。顯色反應表示存在癌癥。蛋白質二硫化物異構酶標記物(Swiss Prot No. P07237,也稱作EC5. 3. 4. 1，PDI， 脯氨酰4-羥化酶亞基β，細胞甲狀腺激素結合蛋白，PDI Al或者是一種多功能蛋白 質，其催化分子內二硫鍵的形成、破壞和重排。在細胞表面，其發揮還原酶作用并裂解附著 于細胞的蛋白質的二硫鍵。在細胞內部，其是位于內質網腔內的可溶的分子，在此其形成并 重排新合成的蛋白質的二硫鍵。其包含具有特征性CX)(C基序的硫氧還蛋白(thioredoxin) 類型的2個催化結構域。在高濃度，PDI作為伴侶蛋白，其抑制不正確折疊的蛋白質的聚集。 在低濃度，其具有拮抗作用并促進所述聚集。PDI還形成不同酶的結構亞基，如脯氨酰羥化 酶，其催化前膠原pro α鏈的脯氨酸殘基的羥化。已經發現PDI在癌細胞表面特別富集3。 Tomonaga等4在結腸癌病例中觀測到翻譯后修飾。Stierum等5示出Caco-2結腸癌細胞系 的分化伴隨PDI的細胞濃度增加。在專利申請EP17M586中，PDI被描述為作為某些癌癥 的診斷標記物，如結腸癌。然而，僅舉例說明了前列腺癌，由此目前為止還沒有使用PDI作 為標記物診斷結直腸癌的靈敏性和特異性診斷方法。最后，專利申請AT 500 719A示出與 PDI A3不同，PDI不是結腸癌的標記物。本申請人現在令人驚奇地證實結腸腫瘤不僅特異性分泌PDI，而且特別從癌組織 中釋放，正如后文更詳細證實的那樣，對其實施本專利技術方法的生物樣品中的PDI濃度與在 健康個體中確定的參考值相比是增加的，且使用特殊的抗-PDI單克隆抗體可以提供診斷 結直腸癌的、靈敏且特異性的方法。因此，本專利技術的第一個主題是體外診斷結直腸癌的方法，特征在于使用針對PDI 表位的至少一種抗-PDI單克隆抗體確定取自懷疑患有結直腸癌的患者的生物樣品、優選 遠離腫瘤的生物樣品中蛋白質二硫化物異構酶的存在，所述表位選自序列SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2和在PDI的三維結構中與之接近的芳族氨基酸、以及SEQ ID No. 3所示的表 位。本專利技術還涉及這種方法在結直腸癌的早期診斷、篩查、治療隨診和預后以及在結 直腸癌復發診斷中的應用。本專利技術的方法因此可以通過一種簡便檢測方法特異性和早期診斷結直腸癌，所述 檢測方法包括在取自患者的生物樣品、優選遠離可能的腫瘤的生物樣品中搜索PDI的存在。確定可能遠離或者未遠離腫瘤的生物樣品中PDI的存在可以推斷查找的病變本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種體外診斷結直腸癌的方法，特征在于使用針對蛋白質二硫化物異構酶（ＰＤＩ）表位的至少一種抗ＰＤＩ單克隆抗體確定取自懷疑患有結直腸癌的患者的生物樣品中ＰＤＩ標記物的存在，所述ＰＤＩ表位選自ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２和在ＰＤＩ的三維結構中與之接近的芳族氨基酸、以及ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３所示的表位。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：Y·阿塔曼厄納爾，
申請(專利權)人：生物梅里埃公司，
類型：發明
國別省市：FR
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