提供了具有延長的體內半衰期，在Ｆｃ區中具有一處或多處氨基酸修飾的變異免疫球蛋白，及使用它們的方法。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
一般地，本專利技術涉及分子生物學領域。更具體地，本專利技術涉及具有改變的生物學特性的IgG免疫球蛋白變體及使用它們的方法。
技術介紹
多年來，免疫球蛋白作為治療劑的使用顯著增多。人們對構成免疫系統的一個重要部分的免疫球蛋白(Ig)分子極感興趣，因為它們(1)與一個多種多樣的配體家族反應， (2)擁有不同效應器功能及(3)具有極大的生物學重要性。今天，基于抗體的藥物的用途包括治療癌癥、自身免疫性疾病以及多種系統性和傳染性疾病。還有，免疫球蛋白作為體內診斷工具，例如在診斷成像規程中是有用的。IgG是人類和其它哺乳類中最普遍的免疫球蛋白類別，而且在多種類型的免疫療法和診斷規程中使用。人IgGl是為了治療最常用的抗體。當前，臨床試驗中的許多抗體針對腫瘤相關抗原。特別地，抗VEGF中和性抗體顯示出遏制裸鼠中多種人腫瘤細胞系的生長(Kim et al. Nature 362:841-844(1993) ；Warren et al. J. Clin. Invest. 95 1789-1797(1995) ； Borgstrom et al. Cancer Res. 56 :4032-4039 (1996) ；Melnyk et al. Cancer Res. 56 :921-9 (1996))，及還抑制缺血性視網膜病癥模型中的眼內血管發生 (Adamis et al. Arch. Ophthalmol. 114 :66-71 (1996))。確實，一種人源化抗 VEGF 抗體， 貝伐單抗(AVASTIN ,Genentech,South San Francisco,CA)是第一種被美國 FDA批準的，設計用于抑制血管發生的療法。盡管有潛力，免疫球蛋白免疫療法的問題之一是免疫球蛋白在循環中的持久性。 免疫球蛋白清除速率直接影響免疫球蛋白的量和給藥頻率(frequency of dosage) 0升高的劑量和給藥頻率可在患者中引起不良作用，而且還提高醫療費用。經由嚙齒類中涉及被動免疫經胎盤或卵黃囊或經初乳自母親轉移至胎兒/新生兒(IgG經胞轉的母體胎兒轉移)的研究，闡明了循環中IgG異化的機制(Brambell， Lancet, ii :1087-1093,1966；Rodewald, J.Cell Biol. ,71 :666-670,1976 ；Morris et al. , In Antigen Absorption by the Gut, pp.3-22,1978, University Park Press, B altimore Jones et al.，J. Clin. Invest. ,51 :2916-2927,1972)。新生JL Fc 受體(FcRn) 在哺乳類中IgG的胞轉和穩態中發揮重要作用。Fcfoi在結構上與主要組織相容性復合物 (MHC)I類分子同源，而且由跨膜α鏈和β2_微球蛋白(β2πι)組成。先前敲除小鼠中的研究例示了 IgG在Fcfoi或β an缺陷小鼠中的血清半衰期大大縮短(Roopenian et al., J Immunol 170 (7),3528-3533, 2003 ；Israel et al. , Immunology 89 (4),573-578,1996),證明了 Fcfoi在調節循環IgG水平中的保護性作用。小鼠IgG的Fc區中的多項位點特異性誘變實驗導致了涉及IgG和Fcfoi之間相互作用的某些關鍵氨基酸殘基的鑒定(Kim et al.，Eur. J. Immunol. ,24 :2429-2434,1994 ；Medesan et al.，Eur. J. Immunol. ,26 :2533, 1996 ；Medesan et al.，J. Immunol.，158 :2211_2217，1997)。另外，多份出版物記載了通過引入或修飾IgG的Fcfoi結合區來獲得半衰期改變的生理學活性分子的方法(W0 97/43316 ； 美國專禾U No. 5，869，046 ；美國專利 No. 5，747，035 ；W096/32478 ；W02006053301 ；美國專利 No. 7，083，784 ；美國專利 No. 7，371，826)。在分子水平，FcRn在CH2-CH3域區中結合IgG的Fc部分。Fc-Fcfoi相互作用是高度PH依賴性的；IgG在pH 6以高親和力結合Fcfoi，但是隨著pH上升至7. 4，結合親和力大大下降。此PH依賴性相互作用負責保護IgG免于降解。具體地，被胞飲的IgG在酸性內體中被Fcfoi捕捉，再循環回到細胞表面，然后釋放回到處于生理血清pH 7. 4的循環中(Ober et al. Proc Natl Acad Sci U S AlOl (30), 11076-11081,2004 ；Ober et al. J Immunol 172(4),2021-2029, 2004 ；Prabhat et al. Proc Natl Acad Sci U S A 104(14)， 5889-5894, 2007) 0未被Fcfoi結合的IgG被靶定至溶酶體并被降解。因為Fcfoi在調節 IgG穩態中是重要的，所以經由蛋白質工程來調控Fc與Fcfoi之間的相互作用是用于改進治療性抗體的藥動學的一種方法(Shields et al. J Biol Chem 276 (9)，6591-6604， 2001 ；Dall' Acqua et al. Nat Biotechnol 15(7),637-640,1997 ；Dall' Acqua et al., JImmunol 169 (9),5171-5180, 2002 ；Hinton et al. J Biol Chem 279 (8)，6213-6216， 2004 ；Hinton et al. J Immunol 176(1), 346-356, 2006 ；Datta-Mannan et al. Drug Metab Dispos 35 (1),86-94,2007 ；Datta-Mannan et al. J Biol Chem 282(3),1709-1717, 2007)。多項小鼠、恒河猴和獼猴中的研究證明了提高IgGWpH 6結合親和力可延長半衰期(Dall' Acqua et al. Nat Biotechnol 15(7),637-640,1997 ；Dall' Acqua et al.，J Immunol 169(9), 5171-5180, 2002 ；Hinton et al.J Biol Chem 279 (8)，6213-6216，2004 ； Hinton et al. J Immunol 176 (1)，346-356，2006)。此外，其它研究還證明了在 pH 7. 4 的 Fcfoi結合親和力是IgG藥動學的另一項決定子。具體地，在pH 7. 4對小鼠Fcfoi的結合親和力升高的某些變體在小鼠中展現升高的清除(即縮短的半衰期)(Dall' Acqua et al.， J Immunol 169 (9)，5171-5180，2002)。不過，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．一種變體ＩｇＧ，其包含如下的人ＩｇＧ Ｆｃ區，相對于野生型人ＩｇＧ Ｆｃ區包含依照Ｋａｂａｔ中的ＥＵ索引編號的氨基酸殘基２５１、２５２、３０７、３０８、３７８、４２８、４３０、４３４、和４３６中兩處或更多處的兩個或更多個氨基酸替代，其中所述變體ＩｇＧ具有與具有野生型人ＩｇＧ Ｆｃ區的ＩｇＧ的半衰期相比延長的半衰期，且其中至少兩處所述氨基酸替代是氨基酸殘基２５１、２５２、３０７、３０８、３７８、４２８、４３０、４３４、或４３６處的，而且氨基酸殘基２５１處的氨基酸替代是用天冬氨酸或谷氨酸摘要）進行的替代，氨基酸殘基２５２處的氨基酸替代是用酪氨酸進行的替代，氨基酸殘基３０７處的氨基酸替代是用谷氨酰胺進行的替代，氨基酸殘基３０８處的氨基酸替代是用脯氨酸進行的替代，氨基酸殘基３７８處的氨基酸替代是用纈氨酸進行的替代，氨基酸殘基４２８處的氨基酸替代是用亮氨酸進行的替代，氨基酸殘基４３０處的氨基酸替代是用丙氨酸或賴氨酸進行的替代，氨基酸殘基４３４處的氨基酸替代是用丙氨酸、絲氨酸或酪氨酸進行的替代，而氨基酸殘基４３６處的氨基酸替代是用異亮氨酸進行的替代。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：莉薩·A達米科，
申請(專利權)人：霍夫曼拉羅奇有限公司，
類型：發明
國別省市：CH
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