本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種含exendin-4的緩釋微球，該緩釋微球經(jīng)乳化交聯(lián)技術(shù)而得到，為W/O/W的結(jié)構(gòu)，其中內(nèi)水相包含主藥exendin-4，中油相包含聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)，外水相包含聚乙烯醇(PVA)。所獲得的微球表面光滑，粒徑在40～100μm之間；微球載藥量在0.4-0.8％之間。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及由該緩釋微球制得的注射劑。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及該緩釋微球的制備方法。該緩釋微球具有載藥量高，包封率高，釋放速率穩(wěn)定，持續(xù)釋放時間長(4周以上)以及可生物降解等優(yōu)點，這樣可以明顯減少給藥次數(shù)，避免用藥前后的手術(shù)植入和取出，從而利于臨床應(yīng)用，大大提高了患者的依從性，從而達到長效抗糖尿病的治療作用。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體而言，本專利技術(shù)涉及包含促胰島素分泌素 (Exendin-4)的長效緩釋微球，以及該緩釋微球的制備方法和由該緩釋微球制得的注射劑。
技術(shù)介紹
據(jù)流行病學(xué)調(diào)查估計目前全球糖尿病患者總數(shù)已逾1. 2億，其中90%左右為II型糖尿病，而此數(shù)字還將不斷上漲，估計到2025年，世界范圍將有3億人患上糖尿病。由此可見，治療糖尿病藥物的市場不僅巨大而且仍有極大的開發(fā)空間。促胰島素分泌素(Exendin-4)是從大毒蜥口腔分泌物中分離出來的一種39個氨基酸的多肽，其氨基酸序列與類胰高血糖素肽(glucagon-like peptide,GLP-1)有53%的同源性，并在多種動物模型中表現(xiàn)出了與GLP-I類似的抗糖尿病作用。但與GLP-I不同， exendin-4進入體內(nèi)后不受二肽酶分解的影響，因此半衰期比GLP-I明顯延長(Mciire E 等· Pharmacology&Therapeutics 2007(113)546-593)。Exendin-4 通過刺激胰島 β 細胞的增殖與分化，降低胃排空的速率，促進飽食感等機制達到降低、控制血糖的作用，在治療2 型糖尿病方面具有廣闊的前景。目前國外開發(fā)的類似藥物是美國Amylin公司和Lilly公司合作開發(fā)的 Exenatide (合成促胰島素分泌素)。促胰島素分泌素還可以利用基因工程方法制備(例如，參見ZL 200410052039. 4)通過人工合成exendin-4的DNA序列，然后將序列插入到表達質(zhì)粒pET3h(+)，再轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5ci構(gòu)建而成。這樣制得的產(chǎn)品存放在低溫下、1 8°C )是穩(wěn)定的。與現(xiàn)有的降糖藥相比，exendin-4最大的優(yōu)勢在于其獨特的作用機制，它可以在高血糖時刺激胰島素的分泌，而低血糖時不刺激胰島素的分泌，這樣就有效防止了低血糖的發(fā)生，大大提高了用藥的安全性，減少了胰島素的用量，有效改善了患者的生活質(zhì)量及用藥危險性。Exendin-4的氨基酸序列為His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met GluGlu Glu Ala Val Arg Leu Phe lie Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro SerSer Gly Ala Pro Pro Pro Ser簡寫為HGEGTFTSDLSKQMEEEAVR LFIEffLKNGGPSSGAPPPS藥物控制釋放體系是指將藥物制成一定的劑型，控制藥物在人體內(nèi)的釋放度，使藥物按照設(shè)計的劑量、在要求的時間范圍內(nèi)以一定的速度在體內(nèi)緩慢釋放，以達到治療疾病的目的。這種藥物釋放系統(tǒng)包括可注射的油、乳液、懸浮液、脂質(zhì)體、微粒(微囊或微球)、 植入或凝膠系統(tǒng)等(Baker R W 等.Plenmu, NewYork, 1974，15-71)。近年來生物可降解的高分子材料廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)多肽類藥物長效緩釋微球的制備，以生物可降解材料作載體的緩釋微球注射制劑，順應(yīng)了制劑學(xué)向長效、高效、低毒發(fā)展的方向，已成為三十年來藥劑學(xué)研究的一個熱點。緩釋微球注射制劑具有以下優(yōu)點①與普通注射劑相比，長效注射微球顯著延長給藥間隔，大大提高了病人用藥的依從性；②可以持續(xù)維持最低有效濃度，因而可以減少總的給藥劑量，減輕某些副作用。如亮丙瑞林微球的給藥劑量可減少至每日給藥劑量的1/4 1/8 ；③生物可降解微球注射劑不需手術(shù)植入， 僅肌肉注射，釋藥后載體可生物降解，其降解物被機體吸收，克服了以往植入劑使用上的不便，為患者提供了一種很好的給藥方式。聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)是由丙交酯(LA)和乙交酯(GA)兩種單體在催化劑的作用下聚合而成的高分子共聚物。PLGA具有良好的生物相容性和生物降解性，在生物體內(nèi)可以降解成乳酸、水和二氧化碳(Anderson JM Shive MS. Adv Drug Deliv Revl997, 28(1) :5- )，參與體內(nèi)的新陳代謝，在體內(nèi)不會引起任何毒性反應(yīng)，可廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)組織工程(Okada, H. Adv. Drug Deliver. Rev. 1997，28，43)，如藥物控制釋放體系、生物體吸收縫合材料、骨科固定及組織修復(fù)材料等。該材料已被美國FDA批準為藥用高分子輔料使用。如iTakeda公司的亮丙瑞林微球Lupron Depot, Debiopharm公司的曲普瑞林微球 Trelstar D印ot和Novartis公司的奧曲肽微球Sandostatin D印ot等。將藥物經(jīng)PLGA包埋，制成緩釋微球，可以提高藥物的生物利用率，減少給藥次數(shù)和藥量，減輕患者的痛苦，最大限度減少藥物對全身特別是肝、腎的毒副作用。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種exendin-4緩釋微球。本專利技術(shù)的目的還在于提供一種由所述exendin-4緩釋微球制得的注射劑。本專利技術(shù)的目的還在于提供一種exendin-4緩釋微球的制備方法。為了實現(xiàn)本專利技術(shù)的目的，本專利技術(shù)提供一種exendin-4緩釋微球，包含(1)內(nèi)水相，該內(nèi)水相包含exendin-4 ；(2)包封所述內(nèi)水相的中油相，該中油相包含聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)；以及(3)包封所述中油相的外水相，該外水相包含聚乙烯醇(PVA)；其中所述 exendin-4、PLGA、PVA 的重量配比為(22-44) (1000-20000) (2000-30000)。優(yōu)選地，PJf 述exendin-4, PLGA, PVA的重量配比為 33 (1800-17200) (2500-20000)。優(yōu)選地，所述exendin-4緩釋微球的粒徑為40 100 μ m。優(yōu)選地，所述中油相中PLGA的分子量為5000 100000，其中聚乳酸與聚羥基乙酸的質(zhì)量百分比為25 75 85 15 ；更優(yōu)選地，所述PLGA的分子量為6000，其中聚乳酸與聚羥基乙酸的質(zhì)量百分比為40 60 60 40。優(yōu)選地，exendin-4為通過基因重組或人工合成的方法制備的。本專利技術(shù)還提供一種注射劑，其是將本專利技術(shù)所述的exendin-4緩釋微球，通過本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員已知的注射劑制備方法制得的。本專利技術(shù)還提供一種exendin-4緩釋微球的制備方法，該方法包括下列步驟1)將exendin-4溶解或混懸于pH為5至7的緩沖水溶液中，制得內(nèi)水相溶液；2)將PLGA溶解于有機溶劑中，制得中油相溶液；3)將PVA溶解于pH為5至7的緩沖水溶液中，制得外水相溶液；4)制備初乳(一次乳化)將步驟1)中的內(nèi)水相溶液加入到步驟2)中的中油相溶液中，進行乳化，制得初乳；5)制備復(fù)乳(二次乳化)將步驟4)制得的初乳在攪拌條件下加入到步驟3)中的外水相溶液中，進行第二次乳化，制得復(fù)乳；6)溶劑揮發(fā)使有機溶劑揮發(fā)，得到本專利技術(shù)硬化exendin-4緩釋微球。制得的微球采用離心法收集，用注射用水洗滌微球，然后用少量水懸浮后凍干，于干燥器中保存。微球長期不用時，需放置于4°C保存。優(yōu)選地，在制備內(nèi)水相溶液的所述步驟1)中，還加入下列物質(zhì)中的一種或多種 0. 5% 10% (g/ml)的甘氨酸、0. 10% (g/ml)的聚乙烯醇、0. 10% (g/ml)的海藻糖、本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：韓為躍，付四海，王為，張仁懷，何凱，楊立明，陽勇，葉學(xué)君，汪猜，
申請(專利權(quán))人：東莞太力生物工程有限公司，
類型：發(fā)明
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