本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，包括底襯，其上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)，還設(shè)置一固定有測試反應(yīng)啟動試劑和信號提供試劑的啟動區(qū)，加樣區(qū)和啟動區(qū)是以在通常狀態(tài)下保持非接觸、在測試狀態(tài)下可互相接觸的方式布設(shè)在測試試條上。測試方法是將待測樣品液添加到加樣區(qū)，加樣區(qū)上固定的物質(zhì)復(fù)溶到待測樣品液中，開始進(jìn)行去干擾反應(yīng)；再使啟動區(qū)與加樣區(qū)接觸，啟動區(qū)上固定的物質(zhì)復(fù)溶，開始進(jìn)行測試反應(yīng)，產(chǎn)物再進(jìn)行信號反應(yīng)，根據(jù)測得的信號值測算出待測生物酶的含量。本發(fā)明專利技術(shù)的檢測方法操作簡便、測試成本較低、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、檢測精度高，能夠具體用于谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的定量測試。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種干化學(xué)測試試條及測試方法，尤其涉及一種轉(zhuǎn)氨酶的干化學(xué)測試試條及檢測方法。
技術(shù)介紹
干化學(xué)測試中的干擾物很多，比如氧化還原反應(yīng)測定中的尿酸、抗壞血酸等的干擾，轉(zhuǎn)氨酶檢測中的丙酮酸干擾，尤其以轉(zhuǎn)氨酶中的丙酮酸干擾較為嚴(yán)重。轉(zhuǎn)氨酶的種類很多，其中以谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/AST)最為重要。谷丙轉(zhuǎn)氨酶又稱丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用；谷草轉(zhuǎn)氨酶又稱門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，是催化谷氨酸與草酰乙酸之間的轉(zhuǎn)氨作用。臨床上，全血、 血清、血漿、組織液中這兩種轉(zhuǎn)氨酶的測定，是心臟病、肌肉疾病、尤其是肝病診斷中非常重要的指標(biāo)。臨床上測定上述兩種轉(zhuǎn)氨酶的方法，主要是使用生化分析儀的液體試劑的方法， 此方法是利用乳酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶分別催化谷丙轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)物丙酮酸和谷草轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)物草酰乙酸脫氫，消耗煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，引起吸光值在340nm的變化。此變化率與谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有比例關(guān)系，從而得出酶活性。上文提到的反應(yīng)如下谷丙轉(zhuǎn)氨酶L一丙氨酸+ α一酮戊二酸棚龍_ >丙酮酸+ L—谷氨酸(1)丙酮酸+ NADH + H+兌麵· L一乳酸+ NAD+(2)谷草轉(zhuǎn)氨酶L一門冬氨酸+α—酮戊二酸谷I車專草酰乙酸+L—谷氨酸(3)草酰乙酸+NADH+ H+腹酶 L 一蘋果酸+NAD+(4)此方法耗時(shí)、操作復(fù)雜、需要比較大型的儀器；并且在該方法中，隨著反應(yīng)的進(jìn)行， NADH不斷消耗，340nm的吸光度不斷減少。因?yàn)閮x器等方面的原因，初始的NADH不能太高， 這使得該方法的測試范圍受到影響，在測試轉(zhuǎn)氨酶高值樣品時(shí)容易出現(xiàn)假陰性。干化學(xué)方法具有方便、靈活、污染小、操作簡便等特點(diǎn)。目前，干化學(xué)方法大致可以分為以下幾類以雅培為代表的電化學(xué)方法(如美國專利US6565738)。富士、柯達(dá)、強(qiáng)生為代表的多層膜片法(如美國專利US4897347、US5508173、US5462858)。以羅氏為代表的橫向流動干化學(xué)法(如美國專利US4591553、US5508173、US466502;3)。然而，前述方法都存在部分缺陷，比如雅培電化學(xué)法測試谷丙轉(zhuǎn)氨酶，采用谷氨酸氧化酶法氧化反應(yīng)(1)產(chǎn)生谷氨酸，但是存在內(nèi)源性的丙氨酸干擾(比內(nèi)源性的丙酮酸更為常見)，影響測試結(jié)果。而富士為代表的多層膜片法、羅氏為代表的干化學(xué)方法，均采用偶聯(lián)丙酮酸氧化酶法。采用偶聯(lián)丙酮酸氧化酶方法的反應(yīng)過程如下谷丙轉(zhuǎn)氨酶，在反應(yīng)(1)后偶聯(lián)丙酮酸+ PO43- +O2 + H2O _同_七鸕乙酰磷酸+ H2O2 +CO2 (5)H2O2+還原態(tài)顯色劑魏側(cè)_ 氧化態(tài)顯色劑+H2O(6)谷草轉(zhuǎn)氨酶，在反應(yīng)(3)后偶聯(lián)草酰乙酸■姆I臓丙酮酸+CO2(7)丙酮酸 + PO43- +O2 + H2O _同_七-乙酰磷酸 + H2O2 +CO2 (5)H2O2+還原態(tài)顯色劑魏側(cè)_ 氧化態(tài)顯色劑+H2O(6)根據(jù)專利US4665023，其試條的結(jié)構(gòu)如圖1所示，血液樣品加在擴(kuò)散層1上，經(jīng)過濾血膜3濾血后，血漿流到流動墊5上。加樣后lmin，下壓透明的保護(hù)層9，試劑層6和酶結(jié)合墊4與流動墊相接觸。固定在試劑層6上的顯色劑、酶底物和固定在酶結(jié)合墊4上的丙酮酸氧化酶、過氧化物酶復(fù)溶到樣品中，從而產(chǎn)生可檢測的顏色信號。從測試原理中可以清晰地看出，該方法存在內(nèi)源性丙酮酸的干擾。提供顏色信號的丙酮酸，既有酶催化產(chǎn)生的，也有樣品中本身存在的內(nèi)源性丙酮酸。而采用速率法(即測試顯色的變化率)，去除內(nèi)源性干擾需要比較復(fù)雜的光學(xué)儀器，常常采用積分球等光學(xué)器件，并且轉(zhuǎn)氨酶的正常值一般很低，谷丙轉(zhuǎn)氨酶為5U/L 40U/L，谷草轉(zhuǎn)氨酶為8U/L 40U/L，而丙酮酸的正常參考值相對較高，為65 μ mol/L (相當(dāng)于65U/L轉(zhuǎn)氨酶在Imin產(chǎn)生的丙酮酸)，在較短的干化學(xué)測試時(shí)間Omin ;3min)內(nèi)，顯色劑顯色的變化率也會在一定程度上受內(nèi)源性丙酮酸的影響，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種測量結(jié)果準(zhǔn)確、制備簡單、測試成本低、檢測操作方便的去除干擾的干化學(xué)定量測試試條及特別針對谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的定量測試試條，還提供一種操作簡便、測試成本較低、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、檢測精度高的用該谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的定量測試試條定量檢測血液中谷丙或谷草轉(zhuǎn)氨酶的方法。為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提出的技術(shù)方案為一種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條，所述測試試條包括底襯，所述底襯上設(shè)置一固定有去干擾試劑的加樣區(qū)，所述底襯上還設(shè)置一固定有信號提供試劑和測試反應(yīng)啟動試劑的啟動區(qū)，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)是以在通常狀態(tài)下保持非接觸、在測試狀態(tài)下可互相接觸的方式布設(shè)在所述測試試條上。所述的去干擾試劑主要是指能夠去除待測樣品中內(nèi)源性干擾物質(zhì)的反應(yīng)試劑，所述信號提供試劑是指能夠基于內(nèi)源性干擾物質(zhì)的反應(yīng)進(jìn)而提供背景信號的相應(yīng)試劑，所述的測試反應(yīng)啟動試劑則優(yōu)選包括有能夠啟動分析物反應(yīng)的反應(yīng)試劑、信號產(chǎn)生試劑以及分析反應(yīng)需要的一些生物酶試劑等。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第一種改進(jìn)，所述加樣區(qū)直接固定在所述底襯上，所述啟動區(qū)通過一粘結(jié)件連接在所述底襯上，該粘結(jié)件具有足夠的高度使所述啟動區(qū)的大部分區(qū)域懸置于所述加樣區(qū)上方。在該優(yōu)選的技術(shù)方案中，由于啟動區(qū)懸置于加樣區(qū)上方，因此在通常情況下，加樣區(qū)和啟動區(qū)是以非接觸的狀態(tài)存在；在用該測試試條進(jìn)行檢測時(shí)，只需將啟動區(qū)向下按壓，便可使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸，以啟動相應(yīng)的檢測反應(yīng)。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第二種改進(jìn)，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)被一分隔層隔開，該分隔層設(shè)置為可抽離式的連接方式，以使得該分隔層抽離出測試試條后所述加樣區(qū)和啟動區(qū)能保持接觸。在該優(yōu)選的技術(shù)方案中，由于啟動區(qū)和加樣區(qū)分設(shè)于分隔層的正反面上，因此在通常情況下，加樣區(qū)和啟動區(qū)之間通過分隔層隔離并以非接觸的狀態(tài)存在；在用該測試試條進(jìn)行檢測時(shí)，只需將該分隔層單獨(dú)抽離出測試試條，便可使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸，以啟動相應(yīng)的檢測反應(yīng)。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第三種改進(jìn)，所述加樣區(qū)可直接固定在所述底襯上，所述啟動區(qū)則通過一鉸接件鉸接于所述底襯的一端，所述鉸接件的轉(zhuǎn)軸軸向與水平面平行或垂直，以使得啟動區(qū)通過旋轉(zhuǎn)后能與所述的加樣區(qū)保持接觸。當(dāng)轉(zhuǎn)軸軸向與水平面平行時(shí)，所述啟動區(qū)是通過在豎直平面內(nèi)的翻轉(zhuǎn)實(shí)現(xiàn)與加樣區(qū)由非接觸到接觸；當(dāng)轉(zhuǎn)軸軸向與水平面垂直時(shí)，所述啟動區(qū)是通過在水平面內(nèi)的旋轉(zhuǎn)實(shí)現(xiàn)與加樣區(qū)由非接觸到接觸，此時(shí)鉸接件的高度應(yīng)當(dāng)適當(dāng)，以便于啟動區(qū)在旋轉(zhuǎn)平移后能夠剛好接觸到加樣區(qū)。作為對上述去除干擾的干化學(xué)定量測試試條的第四種改進(jìn)，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)分別固定在所述底襯同一面的不同區(qū)域(相互保持一定距離)，所述加樣區(qū)和啟動區(qū)中間的底襯上設(shè)有一折痕線，以使得所述底襯沿折痕線彎折后能使啟動區(qū)與加樣區(qū)保持接觸。上述的各種去除干擾的干化學(xué)定量測試試條中，啟動區(qū)可以設(shè)置一試劑層，其作用是啟動轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)，優(yōu)選的材料為聚碳酸酯或尼龍，也可以將試劑層上物質(zhì)直接固定在纖維材料中作為試劑層，此時(shí)可根據(jù)需要在試劑層上增設(shè)一層透明的保護(hù)層，所述保護(hù)層優(yōu)選用透明的聚碳酸酯或聚氯乙烯材料制作。上述的各種去除干擾的干化學(xué)定量測本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：吉翔，謝光，李宗祥，車宏莉，
申請(專利權(quán))人：長沙三諾生物傳感技術(shù)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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