雙特異性EGFR/IGFIR結(jié)合分子制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及供診斷、研究和治療應(yīng)用中使用的雙特異性分子，其包含EGFR結(jié)合域和獨(dú)特的IGFIR結(jié)合域。本發(fā)明專利技術(shù)進(jìn)一步涉及包含此類蛋白質(zhì)的細(xì)胞、編碼此類蛋白質(zhì)或其片段的多核苷酸、和包含編碼該新蛋白質(zhì)的多核苷酸的載體。例示性雙特異性分子包括基于第十纖連蛋白III型域的抗體樣蛋白質(zhì)二聚體。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】雙特異性EGFR/IGFIR結(jié)合分子序列表本申請(qǐng)含有已經(jīng)經(jīng)由EFS網(wǎng)絡(luò)提交的序列表，并且在此通過提及而將其完整收錄。2009年11月23日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝命名為C0TH52W0. txt，并且大小為552，529字節(jié)。相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2008年11月24日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/200，164 ；2008年 11月26日提交的61/200，282 ；2009年4月17日提交的61/212，966 ；2009年5月14日提交的61/178，279 ；和2009年7月21日提交的61/227，330的權(quán)益，在此通過提及而將所述申請(qǐng)完整收錄。介紹本專利技術(shù)涉及供診斷、研究和治療應(yīng)用中使用的EGFR結(jié)合域和包含EGFR結(jié)合域和獨(dú)特的IGFIR結(jié)合域的雙特異性分子。本專利技術(shù)進(jìn)一步涉及包含此類蛋白質(zhì)的細(xì)胞、編碼此類蛋白質(zhì)或其片段的多核苷酸、和包含編碼該新蛋白質(zhì)的多核苷酸的載體。例示性EGFR結(jié)合域和雙特異性分子包括基于第十纖連蛋白III型域的抗體樣蛋白質(zhì)二聚體。
技術(shù)介紹
受體酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)的活化對(duì)癌癥形成至關(guān)重要(參見例如Grimberg A. Cancer Biol Ther. 20032(6) :630_5 及 Mendelsohn J.J Clin Oncol. 200321 (14) 2787-99)。受體酪氨酸激酶具有保守域結(jié)構(gòu)，包括胞外域、跨膜域和胞內(nèi)酪氨酸激酶域。胞外域能結(jié)合配體，諸如多肽生長(zhǎng)因子或細(xì)胞膜結(jié)合分子。通常，配體結(jié)合或配體結(jié)合誘導(dǎo)的受體酪氨酸激酶二聚化活化受體的胞內(nèi)催化性酪氨酸激酶域和隨后的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。受體酪氨酸激酶的例子包括但不限于ERBB受體(例如EGFR、ERBB2、ERBB3、 ERBB4)、產(chǎn)促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞(EPH)受體、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)受體(例如 FGFRU FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR5)、血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)受體(例如 PDGFR-A、 PDGFR-B)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)受體(例如 VEGFR1/FLT1、VEGFR2/FLK1、VEGF3)、具有免疫球蛋白樣和EGF樣域的酪氨酸激酶(TIE)受體、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)受體(例如 INS-R、IGFIR、IR-R)、盤狀域(Discoidin Domain, DD)受體、c_Met (MET)的受體、rec印teur d’ origine nantais (RON)(又稱為巨噬細(xì)胞刺激1受體)、Flt3fins相關(guān)酪氨酸激酶 3 (Flt3)、集落刺激因子1 (CSFl)受體、粘附相關(guān)激酶受體(例如Axl)、c-kit (KIT)的受體和胰島素受體相關(guān)(IRR)受體。對(duì)受體酪氨酸激酶的抑制已經(jīng)作為用于某些人惡性腫瘤的有效治療策略引起了人們的注意(綜述可參見 Roussidis AE, In Vivo. 200216(6) :459_69)。雖然靶向性單一療法最初可以有效治療癌癥，但是往往隨后出現(xiàn)治療抗性， 這可能是由于其它信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的上調(diào)所致(參見例如Nahta R等，Breast Cancer Res. 20068(6) :215 及 Horn L 等，Clin Lung Cancer. 20078 :S68_73)。因而，需要開發(fā)改良的癌癥治療劑。專利技術(shù)概述在一個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝司哂行滦蛄械腅GFR結(jié)合性第十纖連蛋白III型域 (1QFn3)。還提供了具有共有序列的EGFR結(jié)合性u(píng)iFr^tj此類EGFR結(jié)合性wFM可以是單體，或者可以包含在融合蛋白內(nèi)作為其一部分。在另一個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝私Y(jié)合EGFR和IGFIR的雙特異性分子，在本文中稱之為“E/I結(jié)合物”。本專利技術(shù)涵蓋的E/I結(jié)合物包括配體結(jié)合支架蛋白(例如淀粉酶抑肽 (tendamistat)、Affibody、纖連蛋白 III 型域、Anticalin、四連蛋白(tetranectin)、和錨蛋白)的二聚體和雙特異性抗體。在構(gòu)建為單條多肽鏈時(shí)，可以以任何取向構(gòu)建E/I結(jié)合物，例如從N端至C端采取E-I排布或I-E排布。在一個(gè)方面，提供了抗體樣蛋白質(zhì)二聚體，其包含與IGFIR結(jié)合性kiFM共價(jià)或非共價(jià)連接的EGFR結(jié)合性10Fn3。10Fn3以小于500nM的Kd結(jié)合其靶物(EGFR或IGFIR)。每個(gè)單獨(dú)的uiFr^獨(dú)立具有與SEQ ID NO :32至少70、80、85、90、95、98、或100%相同的氨基酸序列，其中η是1-20的整數(shù)，ο是1-20的整數(shù)，而ρ是1_40的整數(shù)。在一些實(shí)施方案中， η是8-12的整數(shù)，ο是4-8的整數(shù)，而ρ是4_28的整數(shù)。在一些實(shí)施方案中，η是10，ο是 6，而ρ是12。在一些實(shí)施方案中，抗體樣蛋白質(zhì)二聚體包含經(jīng)由多肽接頭或聚乙二醇模塊與 EGFR結(jié)合性kiFM共價(jià)連接的IGFIR結(jié)合性kiFM15在一些實(shí)施方案中，抗體樣蛋白質(zhì)二聚體包含與 SEQ ID NO :20-31、53-58、87-92、98-105、118-133、149-154、164-169、179-184、 192-197,205-210和211-216中任一項(xiàng)至少80、90、95、或100%相同的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，Ε/Ι結(jié)合物包含具有 SEQ ID NO :20-31、53-58、87-92、98_105、 118-133、149-154、164-169、179-184、192-197、205-210 和 211-216 中任一項(xiàng)的氨基酸序列，其中(i)EGFR結(jié)合性1QFn3和/或IGF-IR結(jié)合性1QFn3包含相對(duì)于SEQ ID N0:1的相應(yīng)支架氨基酸具有0至20、0至15、0至10、0至8、0至6、0至5、0至4、0至3、0至2、或0至 1處替代、保守替代、缺失或添加的kiFM支架，和/或(ii)EGFR結(jié)合性kiFM相對(duì)于SEQ ID NO :5-8、52、66-68、106-108、112-114、140-142、155-157、170-172、182、185-187、198-200、 或219-327中任一項(xiàng)的相應(yīng)環(huán)序列具有0至15、0至10、0至8、0至6、0至5、0至4、0至3、 0至2、或0至1處替代、保守替代、缺失或添加，和/或IGF-IR結(jié)合性kiFM相對(duì)于SEQ ID NO 3的相應(yīng)環(huán)序列具有0至15、0至10、0至8、0至6、0至5、0至4、0至3、0至2、或0至 1處替代、保守替代、缺失或添加。在一個(gè)方面，提供了藥學(xué)可接受組合物，其包含如本文中所描述的抗體樣蛋白質(zhì)二聚體和藥學(xué)可接受載體，其中所述組合物基本上沒有熱原。在又一個(gè)方面，提供了用于在受試者中治療過度增殖性病癥諸如癌癥的方法，包括對(duì)有所需要的受試者施用治療有效量的包含如本文中所描述的抗體樣蛋白質(zhì)二聚體的藥學(xué)可接受組合物。在另一個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝司幋a如本文中所描述的抗體樣蛋白質(zhì)二聚體的核酸。還提供了包含編碼如本文中所描述的抗體樣二聚體的核酸的載體。合適的載體包括例如表達(dá)載體。還提供了含有核酸、載體或表達(dá)載體的宿主細(xì)胞，所述核酸、載體或表達(dá)載體包含編碼如本文中所描述的抗體樣蛋白質(zhì)二聚體的核酸。合適的宿主細(xì)胞包括原核和真核宿主細(xì)胞。例示性原核細(xì)胞是細(xì)菌細(xì)胞，諸如大腸桿菌本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：斯圖爾特伊曼紐爾，琳達(dá)恩格爾，雷坎普豪森，馬丁C賴特，金格C拉克斯特勞，馬科戈塔蒂斯，瓊卡博尼，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：百時(shí)美施貴寶公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：