本發明專利技術涉及一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界R134a前處理方法。解決了傳統方法費時費力，有機溶劑用量大，對環境有污染，不利于操作人員的健康等問題。其特征在于：取水產品肌肉組織置于研缽中，加入石英砂研磨，然后加入玻璃纖維，混勻后裝入萃取釜中，最后加入3.5mL共溶劑甲醇到萃取釜中。先通入R134a靜態萃取20分鐘，然后以4～12克/分鐘流速通入R134a進行動態萃取，在溫度保持25～50℃、壓力2～15MPa條件下萃取40～60分鐘，用甲醇作為收集液，然后用SPE固相萃取小柱純化，最后過0.45μm有機濾膜，待HPLC分析。該方法具有操作簡單、易于自動控制等特點，不需大量的有機溶劑，R134a可回收利用，有廣泛的應用價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界流體前處理方法，特別是涉及一種亞臨界萃取作為水產品中性激素前處理的方法。
技術介紹
性激素具有強的蛋白質同化作用，能促進畜禽生長，提高飼料轉化率，達到大幅度提高動物養殖經濟效益的目的，但其在動物性食品中的殘留可能會危及消費者的健康，具有潛在的致癌性，所以被大部分國家禁止用于促進動物生長，并不得在食品中檢出。然而由于經濟利益，很多非法的漁民會在水產品養殖的過程中在飼料中添加一些性激素，以使水產品達到快速生長的目的。動物組織中性激素殘留分析的樣品前處理方法大多仍采用液-液萃取，固相萃取，超臨界CO2萃取等。液-液萃取和固相萃取費時費力，有機溶劑用量大，對環境有污染， 不利于操作人員的健康。超臨界(X)2萃取雖然具有效率高、選擇性好、綠色環保等一系列顯著的優點，但同時也存在著操作壓力高、設備造價大、不易推廣應用等缺點。近幾年新出現的亞臨界流體萃取技術，可以在比較低的壓力下實現比較好的萃取效果，克服了超臨界CO2 萃取存在的一些缺點，因而受到了越來越多的重視。由于1，1，1，2_ 四氟乙烷(RlMa)具有臨界條件(Tc = 101. 1 °C，Pc = 4. 06MPa)易于達到、低毒、惰性、不易燃以及不破壞臭氧層(ODP = O)等特點，所以成為亞臨界流體的首選。但是，目前國際上對亞臨界萃取技術的研究仍主要集中在有關成分的萃取方面， 根據文獻檢索，到目前為止尚無采用亞臨界作為性激素殘留分析樣品前處理方法研究的公開報道。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理方法。性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理技術的原理是利用亞臨界的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和溫度對亞臨界流體溶解力的影響而進行的。在亞臨界狀態下將亞臨界液體與魚肉肌肉組織接觸，使其有選擇性地把性激素萃取出來。本專利技術的技術解決方案包括以下步驟取水產品肌肉組織置于研缽中，加入2 5倍量的石英砂00-60目)研磨，然后加1 3倍量的玻璃纖維，混勻、使水產品肌肉組織充分分散，裝入萃取釜中。萃取釜底部加一點脫脂棉，防止樣品堵塞管道。最后加入3.5mL 共溶劑甲醇到萃取釜中，萃取釜頂部也裝入少量脫脂棉防止樣品吹出來堵塞管道。先通入 R134a靜態萃取20分鐘，然后以4 12克/分鐘流速通入進行動態萃取，在溫度保持25 50°C、壓力2 15MPa條件下萃取40 60分鐘，進行分離，用甲醇作為收集液。甲醇收集液旋轉蒸發至干，用淋洗液溶解，然后用SPE柱凈化。最后過0.45 μ m有機濾膜，待HPLC分析。本專利技術的積極效果在于#13 作為亞臨界萃取劑，無毒、副作用及有機物殘留。 性激素在亞臨界R134a流體中的溶解度大，萃取效率高。相比傳統的萃取方法，亞臨界萃取操作時間短，有機溶劑用量少，而且可以在比較低的壓力下實現比較好的萃取效果，適用于大規模推廣應用。采用本專利技術工藝性激素的提取率在70%以上。具體實施例方式下列實施例旨在進一步舉例描述本專利技術，而不是以任何方式限制本專利技術，在不背離本專利技術的精神和原則的前提下，對本專利技術所作的本領域普通技術人員容易實現的任何改動或改變都將落入本專利技術的待批權利要求范圍內。實施例1用添加有甲基睪酮的飼料喂養羅非魚一個月，隨機撈取一條，取5g羅非魚肌肉組織置于研缽中，加入15g的石英砂00-60目)研磨，然后加5g的玻璃纖維，混勻、使魚肉充分分散，裝入萃取釜中。萃取釜底部加一點脫脂棉，防止樣品堵塞管道。最后加入3.5mL 共溶劑甲醇到萃取釜中，萃取釜頂部也裝入少量脫脂棉防止樣品吹出來堵塞管道。通入 R134a，在溫度31°C、壓力5MPa條件下靜態萃取20分鐘，然后以10克/分鐘流速動態萃取40分鐘，用甲醇作為收集液。甲醇收集液旋轉蒸發至干，用50 %的甲醇水溶液溶解，搖勻，經已調節好的Cw固相萃取小柱吸附，以2mL超純水沖洗，用2mL甲醇洗脫后收集，過 0. 45 μ m有機濾膜，待HPLC分析。色譜條件檢測器紫外-二極管陣列檢測器(檢測波長M5nm)；色譜柱 XDB-C18 (4. 6mmx250mm, 5 μ m)；流動相甲醇-水(V V = 70 30)，流速 0. 8mL/min ；柱溫25°C ；進樣量20 μ L0檢測含量為魚肉中甲基睪酮的殘留量為0. 135 μ g/g。實施例2從青島南山水產品市場隨機購買10種水產品，包括鯉魚、草魚、鰱魚、鳙魚、鯽魚、 大黃魚、鱸魚、對蝦、刀額新對蝦和日本對蝦。分別取IOg樣品肌肉組織置于研缽中，加入 30g的石英砂00-60目)研磨，然后加IOg的玻璃纖維，混勻，使肌肉組織充分分散，裝入萃取釜中。萃取釜底部加一點脫脂棉，防止樣品堵塞管道。最后加入3. 5mL共溶劑甲醇到萃取釜中，萃取釜頂部也裝入少量脫脂棉防止樣品吹出來堵塞管道。通入R134a，在溫度31°C、 壓力5MPa條件下靜態萃取20分鐘，然后以10克/分鐘流速動態萃取40分鐘，用甲醇作為收集液。甲醇收集液旋轉蒸發至干，用50%的甲醇水溶液溶解，搖勻，經已調節好的C18固相萃取小柱吸附，以2mL超純水沖洗，用2mL甲醇洗脫后收集，過0. 45 μ m有機濾膜，待HPLC 分析。色譜條件檢測器紫外-二極管陣列檢測器(檢測波長M5nm)；色譜柱 XDB-C18 (4. 6mmx250mm, 5 μ m)；流動相甲醇-水(V V = 70 30)，流速 0. 8mL/min ；柱溫25°C ；進樣量20yL。檢測結果為鯉魚、草魚、鰱魚、鳙魚、大黃魚、鱸魚、對蝦、刀額新對蝦和日本對蝦中均未檢測到甲基睪酮，只有鯽魚肌肉組織中檢測到甲基睪酮，鯽魚肌肉組織中甲基睪酮的殘留量為0. 082 μ g/g.權利要求1.一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理方法，其特征在于包括以下步驟取魚肌肉組織置于研缽中，加入石英砂研磨，然后加入玻璃纖維，混勻后裝入萃取釜中，最后加入3. 5mL共溶劑甲醇到萃取釜中。通入Rl:34a，在溫度25 50°C、壓力2 15MPa 條件下靜態萃取20分鐘，然后以4 12g/分鐘流速動態萃取40 60分鐘，用甲醇作為收集液。甲醇收集液旋轉蒸發至干，用淋洗液溶解，然后用SPE柱凈化。最后過0.45μπι有機濾膜，待HPLC分析。2.根據權利要求1所述的一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理方法，其特征在于性激素包括丙酸睪酮、甲基睪酮、己烯雌酚、雌二醇、雌三醇、睪酮、孕酮、醋酸甲羥孕酮。3.根據權利要求1所述的一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理方法，其特征在于魚肌肉為新鮮魚肉，不經干燥處理。4.根據權利要求1所述的一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理方法，其特征在于石英砂的加入量為魚肉質量的2 5倍，石英砂的粒徑為40-60目。5.根據權利要求1所述的一種水產品性激素殘留分析樣品的亞臨界前處理方法，其特征在于玻璃纖維的加入量為魚肉質量的1 3倍。全文摘要本專利技術涉及。解決了傳統方法費時費力，有機溶劑用量大，對環境有污染，不利于操作人員的健康等問題。其特征在于取水產品肌肉組織置于研缽中，加入石英砂研磨，然后加入玻璃纖維，混勻后裝入萃取釜中，最后加入3.5mL共溶劑甲醇到萃取釜中。先通入R134a靜態萃取20分本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：韓玉謙，馬勤川，江潔，薛勇，薛長湖，
申請(專利權)人：中國海洋大學，
類型：發明
國別省市：
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