【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】專利技術描述在植物和其他真核生物中有許多因素影響基因表達。最近，發現18-26個核苷酸的小RNA是真核基因表達的重要抑制物。已知的小調控RNA分為2個基本的種類：短干擾RNA(siRNA)和微小RNA(microRNA)。微小RNA作為進化上保守的、基于RNA的基因表達調控物出現在動物和植物中。微小RNA(約18-25nt)由從非蛋白質編碼基因轉錄而來的具有莖環結構的較大前體，微小RNA前體產生。在植物或其部分中miRNA前體經加工釋放出這些18至25個核苷酸的具有確定的和可預測的序列的微小RNA。微小RNA途徑在植物和動物界截然不同。如在Kutter和Svoboda(2008)中指出的，在微小RNA前體的加工以及生物活性中有差異。在植物中，微小RNA特別地由DCL1，HYL1和SE在細胞核中產生，并釋放和輸出甲基化的微小RNA：微小RNA雙鏈體分子至細胞質，在細胞質中當微小RNA與AGO和靶轉錄物相互作用后，所述轉錄物發生序列特異性降解。在動物中，不同的蛋白質組涉及miRNA前體的加工，這發生在細胞核和細胞質中并釋放非甲基化的微小RNA：微小RNA雙鏈體。在動物細胞的細胞質中，當微小RNA與AGO蛋白和靶轉錄物相互作用后，靶基因轉錄物的翻譯被抑制。一些微小RNA與ta-siRNA的加工有關，后者包含相區，相區包含與靶基因同源的約21bp的短片段。在植物細胞中當ta-siRNA被加工后以序列可預測的小雙鏈RNA片段的...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2009.04.21 US 61/171,1011.與相應的野生型或其部分相比，在植物或其部分中提高靶基因表達
的方法，其包括將在相應的野生型或其部分中不存在的重組核酸分子引入
所述植物或其部分，其中所述重組核酸分子的至少一部分與在所述植物或
其部分中調控靶基因表達的調控元件的至少一部分互補。
2.根據權利要求1的方法，其中所述重組核酸分子是miRNA前體、微
小RNA(microRNA)、ta-siRNA前體、ta-siRNA或短發夾RNA。
3.根據權利要求1或2的方法，其中當重組核酸在植物細胞中被加工
后產生甲基化的RNA分子。
4.如在權利要求1-3中任一項中所述的方法，其中與調控靶基因表達
的區域的至少一部分互補的所述重組核酸分子與所述啟動子相距轉錄起始
位點100bp或更少的部分互補，優選地其與所述啟動子的轉錄起始位點互
補。
5.如在權利要求1至3中任一項中所述的方法，其中與調控靶基因表
達的調控元件的至少一部分互補的所述重組核酸分子與所述調控元件的下
述部分互補，所述部分包含所述調控元件的調控盒的至少一部分或與這樣
的調控元件相距不超過100bp。
6.權利要求1-5的方法，其包括以下步驟
a)產生一種或多種與靶基因的調控元件互補的miRNA前體、微小RNA、
ta-siRNA前體、ta-siRNA或短發夾RNA，
b)在體內或體外檢測所述一種或多種miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA
前體、ta-siRNA或短發夾RNA提高其靶基因表達的性能，
c)鑒定miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體、ta-siRNA或短發夾
RNA是否提高靶基因表達，和
d)將所述一種或多種miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體、ta-siRNA
或短發夾RNA引入植物。
7.根據權利要求6的方法，其中通過將提高靶基因表達的miRNA前體、
微小RNA、ta-siRNA前體、ta-siRNA或短發夾RNA克隆進包含植物特異性
調控元件的植物轉化載體，使用所述載體轉化植物或其部分，和回收包含
所述載體或所述載體的部分的轉基因植物將提高靶基因表達的所述miRNA
前體、微小RNA、ta-siRNA前體、ta-siRNA或短發夾RNA引入所述植物。
8.在植物或其部分中提高靶基因表達的方法，其包括將包含經修飾的
miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA引入所述植物或其部分，
其中所述序列相對野生型miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA
序列經修飾，這是通過用與調控靶基因表達的調控元件互補的且對于所述
天然miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA而言是異源的序列
至少替換與其相應的同源靶序列互補的所述天然miRNA前體、微小RNA、
ta-siRNA前體或ta-siRNA的一個區域。
9.在植物或其部分中鑒定活化微小RNA或ta-siRNA的方法，其包括
以下步驟
a)在所述植物或其部分中鑒定微小RNA或ta-siRNA，所述微小RNA
與相應植物中的調控元件同源或所述ta-siRNA包含與相應植物中的調控
元件同源的相區，
b)從所述植物或其部分克隆所述微小RNA或ta-siRNA，
c)在植物中過表達所述微小RNA或ta-siRNA，和
d)在所述轉基因植物和相應的野生型植物中比較基因表達。
10.替換植物特異性調控元件的調控特異性的方法，通過在所述植物
特異性調控元件中修飾miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA
靶向區，所述miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA賦予由所
述調控元件控制的基因表達的活化。
11.替換植物特異性調控元件的調控特異性的方法，通過在所述植物
特異性調控元件中引入與miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA
同源的區域，所述miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或ta-siRNA賦予
由所述調控元件控制的基因表達的提高。
12.如權利要求11中定義的替換植物特異性調控元件的調控特異性的
方法，其中所述區域替換了與內源miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體
或ta-siRNA同源的區域。
13.如權利要求12中定義的替換植物特異性調控元件的調控特異性的
方法，其中所述區域與內源miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體或
ta-siRNA同源。
14.如權利要求12中定義的替換植物特異性調控元件的調控特異性的
方法，其中所述區域與重組miRNA前體、微小RNA、ta-siRNA前體、ta-siRNA
或短發夾RNA同源。
15.如權利要求10-14中定義的替換植物特異性調控元件的調控特異
性的方法，其中在體內修飾所述植物特異性調控元件。
16.如權...
【專利技術屬性】
技術研發人員：V·J·卡多薩，P·任，L·W·塔爾頓，
申請(專利權)人：巴斯夫植物科學有限公司，
類型：發明
國別省市：
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