對β-淀粉樣肽的初原纖維形式特異性的人源化抗體制造技術

本申請涉及對β-淀粉樣肽的初原纖維形式特異性的人源化抗體及所述抗體在阿耳茨海默氏病領域中的用途。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】本專利技術涉及對β-淀粉樣肽的初原纖維形式特異性的人源化抗體。本專利技術還涉及這些抗體的治療性、診斷性和/或預防性用途，特別地與神經變性性病癥和/或與淀粉樣斑沉積有關的疾病，且值得注意地阿耳茨海默氏病(Alzheimer’s?disease)的誘導和進展有關。阿耳茨海默氏病(AD)是一種影響高比例的老年群體的進行性神經變性性疾病。此疾病以記憶喪失和認知功能下降為臨床特征，而以腦中存在胞內神經原纖維沉積物和形成淀粉樣斑的β-淀粉樣肽(A-β)的胞外沉積物為神經病理學特征。(Yanker等Nature?Med.第2卷第8期(1996))。在這些體征外，存在著許多其它異常的變化，包括免疫和炎性系統的惡化及線粒體功能的惡化，這可以導致氧化應激的升高、凋亡機制的活化，且最終導致細胞死亡。淀粉樣斑主要由具有40或42個殘基的A-β肽構成，所述A-β肽是在β-淀粉樣肽前體(APP)蛋白的蛋白水解過程期間生成的。A-β肽的胞外沉積物代表AD的所有形式，包括家族性形式(FAD)的不變早期特征性特征。FAD出現得相對較早(在40和60歲之間)，并且是由于具有6種單一或雙重錯義突變的5％FAD病例(大于20種家族)中的APP基因；具有迄今鑒定的超過80種不同突變的50至70％FAD病例(大于200種家族)中的早老蛋白1(PS?1)基因；和具有8種家族中所描述的2種錯義突變的較少FAD病例中的早老蛋白2(PS?2)基因的突變所致。已經顯示了這三種基因的突變誘導對APP蛋白酶解的變化，這導致A-β的過度生成，而且導致與AD的偶發形式的病理學和癥狀相似的病理學和癥狀的早期出現。淀粉樣斑的神經元毒性可能在于通過可溶性A-β肽以原纖維形式聚集而形成的高分子量原纖維，所述原纖維形式最初是可溶性的(又稱作初原纖維形式)，然后轉化成摻入淀粉樣斑中的不溶性形式。實際上，在體外顯示了，可溶性A-β肽逐漸聚集成高分子量(大于200kDa)，但仍可溶的原纖維形式(即，其可以用識別肽/蛋白質的β-片層三級結構的藥劑諸如剛果紅或硫黃素S來標記)。因為此形式是可溶的，它經常稱作初原纖維形式，而原纖維源自甚至更大的聚集，導致溶解性損失。一般認為初原纖維過渡形式是淀粉樣纖維的前體，并且可能負責阿耳茨海默氏病和與蛋白質聚集有關的其它疾病中的細胞功能障礙和神經元損失。已經顯示了，與也廣泛存在于不受影響的患者中的A-β肽的彌散性沉積物形成對比，衰老淀粉樣斑(即聚集的，又稱作成熟斑)與阿耳茨海默氏患者的認知狀態關聯。(Duyckaerts等，Neurobiol.Aging?1997；18：33-42及Jellinger等，1998；54：77-95)。特別地，通過靶向這些衰老淀粉樣斑，因此有可能更特異性且有效地治療阿耳茨海默氏病。已經嘗試了許多治療以阻止A-β肽的形成，例如APP的蛋白水解過程的抑制劑。已經測試了免疫治療性策略諸如施用抗A-β抗體(以減少淀粉樣沉積物)或者用A-β肽抗原免疫接種(以促進體液應答)以降低斑的大小和密度。例如，已經描述了針對阿耳茨海默氏病的治療方法(US?7?179?463)，其包括施用針對在編碼A-β肽的區域中呈現北極型突變(Arctic?mutation)的初原纖維的抗體。實際上尚未描述抗體的例子。此外，尚未實施抗體對肽的親和力作為這些肽的分子量的函數的比較。其它專利(US?6?761?888和US?6?750?324)已經提及識別沿著肽A-β42的氨基酸序列的各個表位的抗體。已經提交了關注對初原纖維特異性的抗體的國際申請(WO2007/108756)，但是所描述的抗體識別高分子量A-β肽和中等重量寡聚物兩者。此外，沒有提及相對于抗體對彌散斑的親和力其對成熟斑的親和力。盡管關注阿耳茨海默氏病的知識目前有進展，仍需要以最大程度限制副作用的治療和/或預防此病理學的組合物和方法。諸如本申請中所描述的、人源化的且對A-β肽的初原纖維形式特異性的抗體旨在解決此問題。容許識別衰老淀粉樣斑而非彌散斑，依照本專利技術的抗體比識別A-β的所有形式的抗體(其會主要附著彌散性沉積物或附著單體或低分子量A-β肽的可溶性形式)有效得多地識別病理性斑。此外，僅識別A-β肽的初原纖維形式，而非與阿耳茨海默氏病無關的其它蛋白質的初原纖維形式的實情避免可降低對疾病有效的抗體濃度的無用結合。已經人源化的鼠抗體遍及本申請會稱作抗體13C3。表2中顯示了可以編碼或構成依照本專利技術的人源化抗體的序列。本專利技術涉及特異性結合A-β肽的初原纖維形式，即高分子量肽的人源化抗體。在一個更有利的實施方案中，抗體結合具有大于200、300、400或500kDa的分子量的A-β肽。依照一個實施方案，依照本專利技術的抗體結合聚集成老年斑的A-β肽，而不結合A-β肽的彌散性沉積物。在一個有利的實施方案中，依照本專利技術的抗體特異性結合A-β肽的初原纖維形式，但不結合淀粉樣結構的其它蛋白質(例如，IAPP、胰島淀粉樣多肽)。本專利技術還涉及具有降低的效應器功能的人源化抗體，使得有可能限制不利效應，諸如微出血(microhaemorrhage)和血管性水腫(vasogenic?oedema)的形成。在一個有利的實施方案中，依照本專利技術的抗體不再擁有效應器功能。在一個甚至更有利的實施方案中，抗體是免疫球蛋白G4，其Fc域已經經歷降低半分子(half-molecule)生成的突變。在一個甚至更有利的實施方案中，抗體是免疫球蛋白G4，其Fc域已經經歷降低效應器活性的突變。本專利技術涉及一種人源化抗體，其包含至少一種由與序列SEQ?ID?NO：9、11、13、15、17和19之一具有相同序列的核苷酸序列，或由與這些序列分別相差1、2、3、4或5個核苷酸的序列編碼的CDR。本專利技術還涉及一種人源化抗體，其包含至少一種與序列SEQ?ID?NO：10、12、14、16、18和20之一具有相同序列的CDR。在另一個實施方案中，依照本專利技術的抗體包含至少一種其序列相對于序列SEQ?ID?NO：10、12、14、16、18、20和32之一相差1至2個氨基酸的CDR，只要所述抗體維持其結合特異性。在一個有利的實施方案中，抗體包含由核苷酸序列SEQ?ID?NO：9、11、13、15、17和19，或由與這些序列分別相差1、2、3、4或5個核苷酸的序列編碼的CDR。在另一個有利的實施方案中，抗體包含序列SEQ?ID?NO：10、12、14、16、18和本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2009.05.12 FR 09531331.對A-β肽的初原纖維形式特異性的人源化抗體。
2.依照權利要求1的抗體，其特征在于它結合老年斑中聚集的所述A-β肽，
而不結合A-β肽的彌散性沉積物。
3.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含至少一種由與序
列SEQ?ID?NO：9、11、13、15、17和19之一具有相同序列的核苷酸序列，
或由與這些序列分別相差1、2、3、4或5個核苷酸的序列編碼的CDR。
4.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含至少一種與序列
SEQ?ID?NO：10、12、14、16、18和20之一具有相同序列的CDR。
5.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含至少一種其序列
相對于序列SEQ?ID?NO：10、12、14、16、18和20之一相差1至2個氨基
酸的CDR，只要所述抗體維持其結合特異性。
6.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含由核苷酸序列
SEQ?ID?NO：9、11、13、15、17和19，或由與這些序列分別相差1、2、
3、4或5個核苷酸的序列編碼的CDR。
7.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含序列SEQ?ID?NO：
10、12、14、16、18和20的CDR。
8.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含由核苷酸序列
SEQ?ID?NO：9、11、13、31、17和19，或由與這些序列分別相差1、2、
3、4或5個核苷酸的序列編碼的CDR。
9.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含序列SEQ?ID?NO：
10、12、14、32、18和20的CDR。
10.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含由核苷酸序列
SEQ?ID?NO：9、11、29、31、17和19，或由與這些序列分別相差1、2、
3、4或5個核苷酸的序列編碼的CDR。
11.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它包含序列SEQ?ID?NO：
10、12、30、32、18和20的CDR。
12.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于其重鏈的可變部分由與
序列SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO?27之一具有至少80％同一性的序列編
碼。
13.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于其重鏈的可變部分包含
與序列SEQ?ID?NO：6和SEQ?ID?NO?28之一具有至少80％同一性的序列。
14.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于其輕鏈的可變部分由與
序列SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO?23之一具有至少80％同一性的序列編
碼。
15.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于其輕鏈的可變部分包含
與序列SEQ?ID?NO：8和SEQ?ID?NO?24之一具有至少80％同一性的序列。
16.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它含有包含由核苷酸序
列SEQ?ID?NO?5和SEQ?ID?NO?27之一編碼的可變部分的重鏈。
17.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它含有包含多肽序列
SEQ?ID?NO?6或SEQ?ID?NO?28的可變部分的重鏈。
18.依照前述權利要求中任一項的抗體，其特征在于它含有包含由核苷酸序
列SEQ?ID?NO?7和S...

【專利技術屬性】
技術研發人員：N鮑林，F布蘭奇，B卡梅倫，M杜切斯恩，V米科爾，S奈米，L普拉迪爾，Y史，
申請(專利權)人：賽諾菲，
類型：發明
國別省市：