本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)是一種提供同時(shí)檢測(cè)人體對(duì)多種過(guò)敏原產(chǎn)生特異性IgE和IgG4不同抗體的體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置，屬醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域。方法采用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)二種酶分別標(biāo)記二種不同抗人IgE和抗人IG4抗體，固相載體在同一種免疫反應(yīng)體系中與之作用結(jié)合。孵育洗滌后，再將固相載體等量分別放入比色反應(yīng)杯中，用HRP和ALP二種不同酶促化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)其發(fā)光強(qiáng)度。同時(shí)檢測(cè)受試者對(duì)多種過(guò)敏原產(chǎn)生特異性IgE和IgG4的抗體。其配套的裝置有免疫珠裝載結(jié)構(gòu)系統(tǒng)，清洗系統(tǒng)，移取免疫珠或微磁珠系統(tǒng)。達(dá)到控制免疫珠的加入量，移取免疫珠，定量加入和移取微磁珠顆粒等功能。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)是一種提供同時(shí)檢測(cè)人體對(duì)多種過(guò)敏原產(chǎn)生特異性IgE和IgG4不同抗體的體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置，方法和配套裝置可應(yīng)用于全自動(dòng)過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模、高通量、快速、準(zhǔn)確檢測(cè)患者血清中過(guò)敏原抗體，及時(shí)作出疾病診斷。屬醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
近年來(lái)過(guò)敏性疾病發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。每年有超過(guò)20%的人受過(guò)敏性疾病的困擾，據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)該病的發(fā)病率要高于發(fā)達(dá)國(guó)家。過(guò)敏性疾病早期診斷很重要，其最為關(guān)健的是找出引起個(gè)體過(guò)敏反應(yīng)的過(guò)敏原，采取有針對(duì)性的預(yù)防和治療。體外實(shí)驗(yàn)診斷過(guò)敏原是一種快速、經(jīng)濟(jì)而又準(zhǔn)確的方法。現(xiàn)已研制出許多過(guò)敏原檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)過(guò)敏原的半自動(dòng)和全自動(dòng)檢測(cè)儀器。目前，體外實(shí)驗(yàn)診斷過(guò)敏原的基本原理仍是基于抗原抗體反應(yīng)。 方法有酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法及免疫微陣列、蛋白質(zhì)芯片、生物傳感等?，F(xiàn)應(yīng)用最多的為酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法。體外實(shí)驗(yàn)診斷主要是檢測(cè)患者的特異性IgE抗體，其濃度升高提示有變態(tài)反應(yīng)過(guò)敏的存在。大量臨床研究證明，除IgE外，其它免疫球蛋白如化(；4也參于變態(tài)反應(yīng)，很多食物過(guò)敏患者特異性IgE檢測(cè)為陰性，而特異性Ig(i4檢測(cè)為陽(yáng)性。將特異性IgE和IgG4同時(shí)納入檢測(cè)范圍，可提高過(guò)敏性疾病的診斷?，F(xiàn)有的過(guò)敏原檢測(cè)方法， 不能同時(shí)檢測(cè)特異性IgE和Ig(i4。本專(zhuān)利技術(shù)提供的一種新的實(shí)驗(yàn)方法及其裝置，可同時(shí)檢測(cè) IgE和Ig(i4 二種抗體，將其在半自動(dòng)和全自動(dòng)過(guò)敏原檢測(cè)儀器中加以使用，可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)過(guò)敏原特異性抗體范圍廣，結(jié)果快速而又準(zhǔn)確。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1.檢測(cè)方法采用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP) 二種酶分別標(biāo)記二種不同抗人IgE和抗人IG4抗體。用生物素標(biāo)記過(guò)敏原類(lèi)抗原，親和素包被固相載體(可以是順性微磁珠、塑料球、塑料酶標(biāo)板等)，與被檢血清中特異性IgE、IG4抗體和生物素標(biāo)記的過(guò)敏原類(lèi)抗原結(jié)合。再和酶標(biāo)抗人IgE和抗人IG4抗體結(jié)合，固相載體親和素與過(guò)敏原類(lèi)抗原標(biāo)記上的生物素結(jié)合，形成多種免疫復(fù)合物，用雙份固相載體在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行孵育和免疫反應(yīng)。洗滌固相載體去掉未結(jié)合的免疫復(fù)合物，再分別加入HRP和ALP 二種不同酶促化學(xué)發(fā)光底物，檢測(cè)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。不同酶促化學(xué)發(fā)光底物對(duì)應(yīng)不同的標(biāo)記酶而形成發(fā)光物質(zhì)，對(duì)應(yīng)IgE和IG4抗體標(biāo)準(zhǔn)品濃度，由產(chǎn)生的發(fā)光強(qiáng)度判斷被檢者血清中特異性IgE和IG4抗體的濃度。2.檢測(cè)裝置免疫珠存儲(chǔ)倉(cāng)及裝載系統(tǒng)。固相載體用親和素包被塑料材料包夾的鐵粒塊制成的免疫珠，也可制成免疫順性微磁珠。免疫珠存儲(chǔ)倉(cāng)及裝載結(jié)構(gòu)可控制免疫珠的加入量，自動(dòng)開(kāi)啟和關(guān)閉如圖1所示。清洗系統(tǒng)，主要清洗掉反應(yīng)杯中未和固相載體包被的親和素結(jié)合的反應(yīng)物質(zhì)。此部分主要依靠磁鐵或電磁場(chǎng)將免疫珠移至管壁一側(cè)，在管外間隔產(chǎn)生磁場(chǎng)以便于設(shè)備進(jìn)入反應(yīng)杯底進(jìn)行加樣、混勻和清洗，其結(jié)構(gòu)如圖2所示。移取免3疫珠或微磁珠系統(tǒng)，免疫珠或微磁珠經(jīng)洗滌后，利用電磁學(xué)原理，吸取免疫珠，一個(gè)比色杯加一粒放入二個(gè)比色杯內(nèi)，結(jié)構(gòu)見(jiàn)示意圖3。免疫順性微磁珠采用管底部產(chǎn)生電磁場(chǎng)將微磁珠沉積于底部，用吸樣裝置定量加入微磁珠顆粒，經(jīng)攪拌棒混勻，反應(yīng)體系經(jīng)孵育洗滌后， 反應(yīng)管底部再產(chǎn)生電磁場(chǎng)，定量吸取原微磁珠總量三分之一分別放入二個(gè)比色杯內(nèi)，加入不同酶促化學(xué)發(fā)光底物，檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度。附圖說(shuō)明圖1塑料材料包夾的鐵粒塊制成的免疫珠存儲(chǔ)倉(cāng)及裝載系統(tǒng)示意圖。 圖2清洗系統(tǒng)示意圖。 圖3免疫珠移取示意圖。具體實(shí)施例方式制備親和素包被塑料材料包夾的鐵粒塊制成的免疫珠或順性微磁珠。用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗人IgE的多克隆或單克隆抗體，再用堿性磷酸酶標(biāo)記(ALP)抗人IgG4 的多克隆或單克隆抗體，用生物素標(biāo)記各種過(guò)敏原蛋白抗原。檢測(cè)時(shí)于反應(yīng)管內(nèi)加入患者檢測(cè)血清(特異性IgE和IG4)，生物素標(biāo)記的過(guò)敏原蛋白抗原，酶標(biāo)抗人IgE和IG4抗體， 再加入用親和素標(biāo)記的固相載體免疫珠二粒，37°C孵育30分鐘左右，洗滌去掉未結(jié)合的免疫復(fù)合物，吸取免疫珠，每杯一粒，于二個(gè)比色杯內(nèi)(順性微磁珠可取總量的三分之一，分別定量加入)再于比色杯內(nèi)分別加入HRP和ALP 二種不同酶促化學(xué)發(fā)光底物。測(cè)定各化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。計(jì)算特異性IgE和IG4抗體濃度。其標(biāo)準(zhǔn)曲線可用抗人IgE和IG4抗體包被固相載體，加入IgE和IG4抗體標(biāo)準(zhǔn)品，再加入酶標(biāo)抗人IgE和IG4抗體。用雙抗體夾心法檢測(cè)IgE和IG4抗體濃度所形成的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算特異性IgE和IG4抗體濃度。權(quán)利要求1.一種新的過(guò)敏原體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置是采用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP) 二種酶分別標(biāo)記二種不同抗人IgE和抗人IG4抗體，并用不同酶促化學(xué)發(fā)光底物，同時(shí)檢測(cè)受試者對(duì)多種過(guò)敏原產(chǎn)生特異性IgE和IgG4的抗體的一種實(shí)驗(yàn)方法以及與之配套的系列裝置。2.按照權(quán)利要求1所述，一種新的過(guò)敏原體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置其特點(diǎn)是二種不同抗人IgE和抗人IG4抗體可以用不同的酶標(biāo)記，也可用不同的發(fā)光物質(zhì)和不同的直接化學(xué)發(fā)光物質(zhì)以及酶、直接化學(xué)發(fā)光物分別標(biāo)記，可以不用底物也可用一種或二種不同底物。3.按照權(quán)利要求1所述，一種新的過(guò)敏原體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置其特點(diǎn)是免疫珠存儲(chǔ)倉(cāng)及裝載結(jié)構(gòu)可控制免疫珠的加入量，自動(dòng)開(kāi)啟和關(guān)閉功能。4.按照權(quán)利要求1所述，一種新的過(guò)敏原體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置其特點(diǎn)是同樣的固相載體在同一種免疫反應(yīng)體系中與之作用結(jié)合，孵育洗滌后，再將固相載體等量分別放入比色反應(yīng)杯中。5.按照權(quán)利要求1所述，一種新的過(guò)敏原體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置其特點(diǎn)是采用磁鐵或電磁場(chǎng)將免疫珠移至管壁一側(cè)，在管外間隔產(chǎn)生磁場(chǎng)以便于設(shè)備進(jìn)入反應(yīng)杯底進(jìn)行加樣、混勻和清洗。6.按照權(quán)利要求1所述，一種新的過(guò)敏原體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置其特點(diǎn)是采用管底部產(chǎn)生電磁場(chǎng)將免疫順性微磁珠沉積于底部，用吸樣裝置定量加入實(shí)驗(yàn)用微磁珠顆粒于反應(yīng)體系中，經(jīng)孵育免疫反應(yīng)和洗滌后，再于反應(yīng)管底部產(chǎn)生電磁場(chǎng)，將微磁珠沉于管底部，定量吸取分裝于比色杯內(nèi)。全文摘要本專(zhuān)利技術(shù)是一種提供同時(shí)檢測(cè)人體對(duì)多種過(guò)敏原產(chǎn)生特異性IgE和IgG4不同抗體的體外診斷實(shí)驗(yàn)方法及其裝置，屬醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域。方法采用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)二種酶分別標(biāo)記二種不同抗人IgE和抗人IG4抗體，固相載體在同一種免疫反應(yīng)體系中與之作用結(jié)合。孵育洗滌后，再將固相載體等量分別放入比色反應(yīng)杯中，用HRP和ALP二種不同酶促化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)其發(fā)光強(qiáng)度。同時(shí)檢測(cè)受試者對(duì)多種過(guò)敏原產(chǎn)生特異性IgE和IgG4的抗體。其配套的裝置有免疫珠裝載結(jié)構(gòu)系統(tǒng)，清洗系統(tǒng)，移取免疫珠或微磁珠系統(tǒng)。達(dá)到控制免疫珠的加入量，移取免疫珠，定量加入和移取微磁珠顆粒等功能。文檔編號(hào)G01N33/543GK102478571SQ20101055423公開(kāi)日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月23日專(zhuān)利技術(shù)者宋成橋, 徐新, 王禮文 申請(qǐng)人:南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王禮文，宋成橋，徐新，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
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