本發明專利技術提供了一種用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的方法及其使用的試劑所組成的試劑盒，其中，該方法所使用的試劑特別包括，選自以下物質中的一種和幾種的穩定劑：乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉(AES)、1，2-環己二醇縮水甘油、二乙烯三胺五乙酸鈉和六聚甘油二油酸酯；以及選自以下物質中的一種和幾種的高分子加速劑：脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羥丙基甲基纖維素、羥甲基纖維素鈉和聚丙烯酸鈉。本發明專利技術提供的方法可以批量檢測分析，對高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力強。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種測定載脂蛋白A2的方法及所述方法使用的試劑盒，具體地本專利技術涉及一種用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的方法及所述方法使用的試劑盒。
技術介紹
載脂蛋白A II (ApoA II)是高密度脂蛋白(HDL)中第二種含量多的載脂蛋白。ApoA II由兩條多肽鏈的77個氨基酸殘基組成，在不加還原劑的十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中測出其分子量是17000D，在人血漿中以二聚體形式存在。ApoA II的單體分子量為8700D。人ApoA II蛋白C端氨基酸殘基為谷氨酸，N端為吡咯烷酮酸，缺乏組氨酸，精氨酸及色氨酸。ApoA II有多態性存在，最主要的多態型等電點為4. 9，而含量較少的多態型的等電點為5. 17,4. 68,4. 42和4. 20。ApoA II的生理功能之一是維持HDL結構，ApoA II肽段12-31和肽段50-77具有與磷脂的結合能力，經二級結構分析認為，殘基17-30和51-62形成的雙性螺旋結構是人 ApoA II與脂質結合的分子基礎，也可能參與HDL受體的識別，在HDL的代謝中具有重要作用；其二是激活肝脂酶，用以水解乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯 (TG)和磷脂(PL)。體外實驗表明，它可能具有抑制卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶(LCAT)和肝磷脂的作用。測定人血漿中ApoA II的含量對研究HDL代謝，探討動脈粥樣硬化、冠心病的發病機理及臨床診斷有重要意義。流行病學及臨床研究表明，ApoA II含量與冠心病呈負相關，與心肌梗塞呈高度負相關。測定血漿ApoA II, ApoA I及Ap0BlOO含量，可替代血脂的測定作為冠心病診斷的參考指標。目前一般采用酶聯免疫法測定血清脂蛋白Apoa II。酶聯免疫法的原理是將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；洗滌除去未結合的抗體及雜質。加待測樣品，使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓樣品中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與樣品中待測物質的量正相關。加底物，夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量?，F有的測定血清脂蛋白Apoa II的方法存在著操作繁瑣，設備要求高，樣品預處理復雜，不能直接在全自動生化分析儀上進行批量檢測分析，對高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力差的缺點。
技術實現思路
本專利技術的一個目的是克服現有的測定載脂蛋白A2的方法操作繁瑣，設備要求高， 樣品預處理復雜，不能直接在全自動生化分析儀上進行批量檢測分析，對高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力差的缺點，提供一種操作以及預處理過程簡單、能直接在全自動生化分析儀上批量檢測分析，且對高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力強的用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的方法?，F有技術沒有使用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的先例，本專利技術的專利技術人付出了大量地創造性勞動，大膽地采用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的方法，并且摸索出了該方法實現測量的條件和使用的試劑所組成的試劑盒。本專利技術提供了一種用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的方法，其包括向待測樣品中加入反應劑，解除樣本中抗原周圍的電子層和水化層，使抗原位點充分暴露；向待測樣品中加入抗ApoA II抗體溶液，形成不溶性的抗原-抗體復合物；測定所述不溶性抗原-抗體復合物的吸光度值，與已知ApoA II抗原濃度的校準液的吸光度值比較；通過以下公式計算出樣本中ApoA II的含量Mu _X ( SApoA II 含量(g/L ) = ^As (g/L)式中ΔΑιι為以空白管吸光度為對照的待測樣品的吸光度值AAs為以空白管吸光度為對照的校準品的吸光度值Cs為校準品中ApoA II的濃度；其中，所述反應劑包括防腐劑0. 2-1. 5g/L、穩定劑0. 5_3g/L、電解質0. l_6g/L、 表面活性劑l-10g/L，高分子加速劑2-5g/L和反應促進劑0. 1-0. 5g/L，其余是10-200mmol/ L的緩沖液；所述抗ApoA II抗體溶液包括抗ApoA II抗體5_60g/L、抗氧化劑0. 01-0. 8g/L、 穩定劑l_30g/L，防腐劑0. 01-5g/L、電解質0. l_6g/L、高分子加速劑2_5g/L和表面活性劑 0. l-10g/L，其余是 10-200mmol/L 的緩沖液；其中，所述穩定劑選自以下物質中的一種和幾種乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉 (AES)、1，2_環己二醇縮水甘油、二乙烯三胺五乙酸鈉和六聚甘油二油酸酯；所述的高分子加速劑選自以下物質中的一種和幾種脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羥丙基甲基纖維素、羥甲基纖維素鈉和聚丙烯酸鈉。本專利技術還提供了上述方法使用的試劑所形成的試劑盒。本專利技術所述的方法由于使用了特定的穩定劑和高分子加速劑，使利用免疫透射比濁法測定載脂蛋白Α2成為可能，并且本專利技術的方法操作以及預處理過程簡單、能直接在全自動生化分析儀上批量檢測分析，且對高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力強。具體實施方式本專利技術提供了一種用免疫透射比濁法測定載脂蛋白Α2的方法，其包括向待測樣品中加入反應劑，解除樣本中抗原周圍的電子層和水化層，使抗原位點充分暴露；向待測樣品中加入抗ApoA II抗體溶液，形成不溶性的抗原-抗體復合物；測定所述不溶性抗原-抗體復合物的吸光度值，與已知ApoA II抗原濃度的校準液的吸光度值比較；通過以下公式計算出樣本中ApoA II的含量權利要求1.一種用免疫透射比濁法測定載脂蛋白A2的方法，其特征在于，該方法包括向待測樣品中加入反應劑，解除樣本中抗原周圍的電子層和水化層，使抗原位點充分暴露；向待測樣品中加入抗ApoA II抗體溶液，形成不溶性的抗原-抗體復合物； 測定所述不溶性抗原-抗體復合物的吸光度值，與已知ApoA II抗原濃度的校準液的吸光度值比較；通過以下公式計算出樣本中ApoA II的含量Mu _X ( SApoA II 含量(g/L ) = Ms (g/L)式中Δ Au為以空白管吸光度為對照的待測樣品的吸光度值 AAs為以空白管吸光度為對照的校準品的吸光度值 Cs為校準品中ApoA II的濃度；其中，所述反應劑包括防腐劑0. 2-1. 5g/L、穩定劑0. 5-3g/L、電解質0. l_6g/L、表面活性劑l-10g/L，高分子加速劑2-5g/L和反應促進劑0. 1-0. 5g/L，其余是10-200mmol/L的緩沖液；所述抗ApoA II抗體溶液包括抗ApoA II抗體5_60g/L、抗氧化劑0. 01-0. 8g/L、穩定劑l-30g/L，防腐劑0. 01-5g/L、電解質0. l_6g/L、高分子加速劑2_5g/L和表面活性劑 0. l-10g/L，其余是 10-200mmol/L 的緩沖液；其中，所述穩定劑選自以下物質中的一種和幾種乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、1，2_環己二醇縮水甘油、二乙烯三胺五乙酸鈉和六聚甘油二油酸酯； 所述的高分子加速劑選自以下物質中的一種和本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：北京利德曼生化股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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