食品中36種人工合成色素高通量快速篩查方法技術

本發明專利技術公開了一種食品中36種人工合成色素高通量快速篩查方法，是基于液相色譜/飛行時間質譜建立的食品中36種人工合成色素高通量快速篩查方法，可同時定性、定量與確證。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于分析化學領域，具體涉及一種。
技術介紹
人工合成色素廣泛應用于食品工業，但這些化合物可能對人體產生的危害也逐漸為人重視。各國法規對允許添加的人工合成色素品種與添加量有不同規定。同一種人工合成色素有可能在一個國家被允許使用，而在另一國家禁用。因此，建立普適的篩查方法十分必要。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種，是基于液相色譜/飛行時間質譜建立的，可同時定性、定量與確證。為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案是基于液相色譜/飛行時間質譜建立的。色素標準品亮黑、檸檬黃、喹啉黃、胭脂紅、酸性紫7、莧菜紅、酸性紅2G、酸性黃 17、日落黃、誘惑紅、堅牢黃、結晶麗春紅6R、偶氮玉紅、麗春紅SX、萘酚藍黑、間苯二酚黃、 靛藍、酸性紅沈、酸性紅4、麗春紅3R、酸性紅52、萘酚黃色-S、熒光素鈉、毛料綠色S、專利藍五、堅牢綠FCF、亮藍FCF、亮綠SF、酸性綠3、赤蘚紅、熒光桃紅、孟加拉玫瑰紅、新紅、曙紅 Y、橙色I和橙色II ；所述的方法的具體步驟如下1)篩查定性采用四通道錐孔電壓掃描，調用已建立的質譜篩查數據庫以分子式匹配模式自動檢索，質量允許誤差設置IOppm ；2)確證對篩查發現的可疑化合物采用保留時間結合源內裂解進一步確證；3)定量對于確證為違禁染料的化合物定量。根據化合物不同，分別采用優化的錐孔電壓，基體工作曲線外標法定量；超過線性范圍的樣品，需要稀釋。本專利技術的顯著優點在于基于液相色譜/飛行時間質譜建立的，可同時定性、定量與確證。附圖說明圖1為36種化合物的化學結構式。圖2為篩查出樣品中含有孟加拉紅的流程圖。圖2-1為所建立的質譜篩查數據庫截圖；圖2-2是檢出孟加拉玫瑰紅；圖2-3是所篩查的孟加拉紅質譜圖；圖2-4是篩查結果。圖3為糖果中檢出的熒光桃紅，圖3-1為熒光桃紅標準品碎片離子質譜圖，圖3-2為糖果樣品中所含熒光桃紅的碎片離子質譜圖。圖4是可疑紅菇樣品總離子流色譜圖與質譜確證圖。圖4-1為紅菇樣品總離子流色譜圖(上)與標準品色譜圖(下)；圖4-2為可疑物的質譜圖；圖4-3為酸性紅標準品質譜圖。具體實施例方式試劑和材料色素標準品亮黑、檸檬黃、喹啉黃、胭脂紅、酸性紫7、莧菜紅、酸性紅2G、酸性黃17、日落黃、誘惑紅、堅牢黃、結晶麗春紅6R、偶氮玉紅、麗春紅SX、萘酚藍黑、間苯二酚黃、靛藍、 酸性紅沈、酸性紅4、麗春紅3R、酸性紅52、萘酚黃色-S、熒光素鈉、毛料綠色S、專利藍五、 堅牢綠FCF、亮藍FCF、亮綠SF、酸性綠3、赤蘚紅、熒光桃紅、孟加拉玫瑰紅、新紅、曙紅Y、橙色I和橙色II (表1);甲醇、乙腈、氨水、聚酰銨粉；G3玻璃沙芯漏斗，配帶通氣支口的150mL 磨口錐形瓶；Supleco SAX SPE 柱，500mg/3mL ； Waters Oasis MAX SPE 柱，60mg/3mL。1.2 儀器Agilent 1240超高壓液相色譜儀器，配有二極管陣列檢測器(DAD)與Agilent 6224 飛行時間質譜儀(TOF-MS)；旋轉蒸發儀；漩渦振蕩器；離心機；固相萃取裝置。1.3實驗條件色譜條件色譜柱安捷倫SB-C18柱，50\4.6111111，1.811111;流動相六5%甲醇(含 5mmol/L乙酸銨)，B 95%甲醇(含5mmol/L乙酸銨)；梯度洗脫，95% A，保持a^n，5mln內變化至50%，3mln變化至10 %，保持5mln，5mln內恢復至95%，梯度周期后維持5mln，流速 0. 2 mL/mln。采用DAD檢測時，檢測波長為多波長通道設置，分別為254、510、480、400、580、 630 nm ；進樣量 2 μ L。質譜條件質譜掃描范圍100-1700 m/z ；掃描模式高分辨模式；脫溶劑氣及霧化氣氮氣；脫溶劑氣流量11 mL/mh，脫溶劑氣溫度360°C ；霧化壓力50psl ；毛細管電壓3500 V； 分液電壓(skimmer) :65 V。定性掃描時，同時設置四電位錐孔電壓為90、120、160、180V ； 定量時，采用優化的錐孔電壓(表1)。采集數據過程同時采用第二根霧化噴針實時加入質量參比溶液校正質量校正軸，輔助校正溶液噴霧壓力5 psi。三點質量校正，質量校正物質分別為 TFA anion (C2O2F3^ 112. 985587)、Purine (C5H5N3,119. 036320)和 Formate adduct (C19H19O8N3P3F24，966. 000725)；樣品進樣 2 μ L。樣品前處理不凝膠的糖類等可溶樣品稱取樣品10. OOg(或者采用溶解樣品，取適當體積比例)，加入約30m 50mL 70°C熱水溶解，難溶的可以加熱煮沸15mln，冷卻后根據溶液的色澤深淺， 選擇是否適當稀釋體積(稀釋的樣品要重新折算稱樣量)，取全部或者部分經過稀釋的溶液，加入2g 80目細度的聚酰胺粉，玻璃攪拌吸收色素，然后過G3玻璃沙芯漏斗，帶通氣支口的150mL磨口錐形瓶收集過層析柱液，用樣品全部過濾后，用pH = 6 7的去離子水洗滌20-30mL，再以體積比為50%的甲醇50mL淋洗，抽真空1 2mln，將聚酰胺粉內吸收水分盡可能抽干然后，最后用含體積比為10%氨水的甲醇60mL，分2 3次洗脫聚酰胺粉上吸附的色素，洗脫至沙芯漏斗上的聚酰胺粉顆粒無色，往洗脫液中加入5mL冰醋酸中和氨水，然后55 60°C水浴旋轉濃縮至溶液體積少于5mL，加去離子水定容至5mL，過水性濾膜上機。含可溶性凝膠的糖果樣品稱取樣品10. 00g，加熱溶解后直接加入聚酰胺粉，乘熱過G3沙芯漏斗，以下同上述糖類樣品的前處理。如果發現樣品所含凝膠遇冷凝固，導致堵塞沙芯，使得樣液過漏斗速率慢甚至無法通過沙芯的情況出現，則換用以下處理方式稱取樣品后，加去離子水，加熱溶解，加入聚酰銨粉后，溶液轉移到50mL離心管內，漩渦振蕩 ImIn,低速3500rpm，5mln離心，棄去上層無色溶液，然后先后用去離子水、50%甲醇洗滌下層聚酰胺粉層，漩渦lm^i，棄去上層，最后采用含10%氨水的甲醇溶液脫色下層2次，漩渦振蕩，然后離心，合并兩次上層帶色溶液，加入冰醋酸中和后，以下處理同上。含有不可溶固相物的樣品如蜜餞，醬菜等，稱取樣品10. 00g，加熱溶解色素后， 過濾，取濾液加入聚酰胺粉，以下處理同上。液體樣品稱取10. OOg樣品，含氣飲料、酒類樣品先加熱除去氣泡，而后加入聚酰胺粉，以下處理同上。試驗方法篩查采用四通道錐孔電壓掃描，調用已建立的質譜篩查數據庫以分子式匹配模式自動檢索，質量允許誤差設置IOppm ；確證對篩查發現的可疑化合物采用保留時間結合源內裂解進一步確證； 定量基體工作曲線外標法定量。超過線性范圍的樣品，需稀釋。結果2. 1化合物的分子結構信息化合物的分子結構信息見表1。表1 36種化合物的信息權利要求1.，其特征在于采用基于液相色譜/ 飛行時間質譜建立的食品中亮黑、檸檬黃、喹啉黃、胭脂紅、酸性紫7、莧菜紅、酸性紅2G、酸性黃17、日落黃、誘惑紅、堅牢黃、結晶麗春紅6R、偶氮玉紅、麗春紅SX、萘酚藍黑、間苯二酚黃、靛藍、酸性紅沈、酸性紅4、麗春紅3R、酸性紅52、萘酚黃色-S、熒光素鈉、毛料綠色S、專利藍五、堅牢綠FCF、亮藍FC本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊方，錢疆，陳健，陳馳，張玉燕，陳章捷，
申請(專利權)人：福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，
類型：發明
國別省市：