本發明專利技術公開了一種用氣相色譜-氮化學發光檢測法測定烤煙中的八種生物堿的方法，包括以下步驟：樣品前處理：煙葉粉末加入離心管中，加入NaOH溶液，渦旋振蕩后加入體積比為3:1的二氯甲烷/甲醇提取溶劑，振蕩提取，離心，取下層有機相清液用針式過濾器過濾后直接進樣分析；分析儀器采用氣相色譜-氮化學發光檢測器對樣品中的尼古丁、去甲基煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2,3-聯吡啶和可替寧八種生物堿進行分析，可以一次性分析烤煙中的八種生物堿，靈敏度高，選擇性好，重復性和準確性都到了較大的提高，且適合于大批量樣品的檢測分析。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于煙草中生物堿的檢測領域，具體涉及一種。
技術介紹
吸煙已經成為危害公眾健康最大的因素之一，文獻報道，吸煙能潛在增加肺癌的發生率及死亡率。已經被證實，中國大概有一億吸煙人口(0- 歲)死亡，如果現在中國的吸煙狀況持續下去，到2050年死亡人數將會達到每年3百萬。煙草生物堿已經被廣泛認為與煙草的品質密切相關，且也是高致癌物質-特有亞硝胺的前體物質。煙草及煙氣中含有大量相似結構的生物堿，常見的有尼古丁，去甲基煙堿，假木賊堿，新煙草堿，二烯煙堿，麥斯明，2，3-聯吡啶，可替寧等八種生物堿。因此，發展一種簡單可靠的分析方法對檢測煙草生物堿具有重要的意義。在過去的20年中，由于氣相色譜的高分離能力及氮化學發光檢測器的高選擇性， NCD已經成為了 GC和全二維氣相色譜(GCXGC)重要的檢測器之一。NCD —般的檢測原理為從色譜柱流出的含氮化合物，在富氧狀態下生成一氧化氮后，由真空泵將其送入到有過量臭氧的化學反應池內，臭氧與一氧化氮反應生成二氧化氮，二氧化氮衰減，在1200 nm處發出近紅外光，用光電倍增管檢測化學反應產生的光的強度，從而得到含氮化合物的信號。由于各種痕量含氮化合物需要高選擇性的GC檢測器，GC-NCD和GCXGC-NCD已經被廣泛應用于石油，食品及飲料等行業。NCD具有很多其它檢測器不具有的優點，如它對含氮化合物產生線性等摩爾響應，此外，它與其它化學發光檢測器不同，它在無光的背景下產生光子進行檢測，不受到其它光源的干擾，使其具有對含氮化合物很高的靈敏度。由于它的高專一性，在檢測煙草生物堿時，無需目標分析物與其它的物質之間完全色譜分離也能很好的進行定量。為了定量檢測煙草中的生物堿，GC, LC和HPCE都被廣泛的應用。常見的方法有 GC-FID,GC-NCD, GC-MS, HPLC-UV, CZE或MEKC-UV。但是，大多數方法都具有靈敏度和選擇性不高的缺點。本專利技術針對現有分析技術中存在的不足進行改進，專門設計了一種氣相色譜-氮化學發光檢測法(GC-NCD)測定烤煙中八種生物堿，能對煙草中尼古丁、去甲基煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2，3-聯吡啶和可替寧八種生物堿進行同時測定。該方法比現有的方法靈敏度更高，準確性更好，分析速度快。
技術實現思路
本專利技術的要解決的技術問題是克服現有技術存在靈敏度和選擇性不高的缺點，本專利技術提供一種靈敏度更高，準確性更好，分析速度快，并且能同時分析煙草中尼古丁、去甲基煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2，3-聯吡啶和可替寧八種生物堿。本專利技術的目的是通過以下技術方案來實現，其特征在于包括以下步驟(1)樣品前處理將煙葉粉末加入離心管中，加入NaOH溶液，渦旋振蕩后加入體積比為 3:1的二氯甲烷/甲醇提取溶劑，振蕩提取，離心，取下層有機相清液用針式過濾器過濾后直接進樣分析；(2)分析儀器采用氣相色譜-氮化學發光檢測器對樣品中的尼古丁、去甲基煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2，3-聯吡啶和可替寧八種生物堿進行分析。所述的一種， 氮化學發光檢測器的等離子炬的裂解溫度為95(Γ ，氧氣流量為10 mL/min，氫氣流量為4 mL/min。所述的一種，所述的針式過濾器孔徑為0. 45 μ m。所述的一種，氣相色譜分析條件色譜柱為DB-17毛細管柱，He為載氣，流量為1 mL/min，進樣量2 L，進樣口溫度250 ？ C，分流進樣，分流比為10:1，初始溫度為110 ^保持1 min，以4 C /min 升至18(Γ 保持1 min，再以20 C /min升至250 rpC保持1 min，共運行沈min，檢測器的數據采集頻率為25 Hz0所述的一種，內標化合物選擇喹啉標準品。所述的一種，采用輔助定性柱HP-5柱與定量柱DB-17柱進行雙柱定性。本專利技術達到的有益效果本專利技術與其他分析煙草中的生物堿方法相比，主要是利用了氮化學發光檢測器對煙草中含氮化合物具有高靈敏度和高選擇性的原理，一次性分析烤煙中的8種主要生物堿，包括煙堿、降煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2， 3’_聯吡啶和可替寧，且該檢測器對烤煙中含量較大的尼古丁無需進行特殊處理，不會產生平頭峰，可進行同時檢測分析，而在其他檢測方法中，一般都需要對煙堿進行單獨測定。該方法對于分析烤煙中的八種主要生物堿，具有靈敏度高，選擇性好，重復性和準確性都得到了很大的提高，可對烤煙中八中生物堿進行同時檢測，且適合于大批量樣品的檢測分析。通過工作曲線與最低檢測限的測定，相關系數R2均在0. 999以上，表明煙草中的8 種生物堿在含量范圍內，NCD檢測器響應與相應8種化合物的濃度呈良好的線性關系。針對目前煙草中主要生物堿的測定方法，通過與現行公開專利技術專利 (CN102004132A)—一種煙草及煙草制品中生物堿的測定方法相比，本專利技術的方法表現出較低的檢測限，如下表1。權利要求1.一種，其特征在于包括以下步驟(1)樣品前處理將煙葉粉末加入離心管中，加入NaOH溶液，渦旋振蕩后加入體積比為 3:1的二氯甲烷/甲醇提取溶劑，振蕩提取，離心，取下層有機相清液用針式過濾器過濾后直接進樣分析；(2)分析儀器采用氣相色譜-氮化學發光檢測器對樣品中的尼古丁、去甲基煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2，3-聯吡啶和可替寧八種生物堿進行分析。2.根據權利要求1所述的一種，其特征在于氮化學發光檢測器的等離子炬的裂解溫度為95(Γ ，氧氣流量為10 mL/min,氧氣流量為4 mL/min。3.根據權利要求1所述的一種，其特征在于所述的針式過濾器孔徑為0. 45 μ m。4 根據權利要求1所述的一種，其特征在于氣相色譜分析條件色譜柱為DB-17毛細管柱，He為載氣，流量為1 mL/min，進樣量2 L，進樣口溫度250 ？ C，分流進樣，分流比為10 1，初始溫度為110 ？ C 保持 1 Hiir^WfipC /min 升至 1807 保持 1 min，再以 20 C /min 升至 250 rpC保持 1 min， 共運行沈min，檢測器的數據采集頻率為25 Hz05 根據權利要求4所述的一種，其特征在于內標化合物選擇喹啉標準品。6.根據權利要求4所述的一種，其特征在于采用輔助定性柱HP-5柱與定量柱DB-17柱進行雙柱定性。全文摘要本專利技術公開了一種，包括以下步驟樣品前處理煙葉粉末加入離心管中，加入NaOH溶液，渦旋振蕩后加入體積比為3:1的二氯甲烷/甲醇提取溶劑，振蕩提取，離心，取下層有機相清液用針式過濾器過濾后直接進樣分析；分析儀器采用氣相色譜-氮化學發光檢測器對樣品中的尼古丁、去甲基煙堿、假木賊堿、新煙草堿、二烯煙堿、麥斯明、2,3-聯吡啶和可替寧八種生物堿進行分析，可以一次性分析烤煙中的八種生物堿，靈敏度高，選擇性好，重復性和準確性都到了較大的提高，且適合于大批量樣品的檢測分析。文檔編號G01N30/06GK102565231SQ20121000483公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月9日 優先權日2012年1月9日專利技術者向章敏, 周淑平, 張婕, 耿召良, 蔡凱 申請人:貴州省煙草科學研究所本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：向章敏，蔡凱，耿召良，周淑平，張婕，
申請(專利權)人：貴州省煙草科學研究所，
類型：發明
國別省市：
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