本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的生產(chǎn)方法，屬于動(dòng)保行業(yè)獸醫(yī)獸藥領(lǐng)域，本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種用于豬圓環(huán)病的臨時(shí)預(yù)防和免疫失敗后緊急治療的藥物同時(shí)提高機(jī)體自身免疫水平，用于豬圓環(huán)病的臨時(shí)預(yù)防和緊急治療。本方法利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)特性，通過(guò)沉降法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過(guò)程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性，所生產(chǎn)的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)；再配伍中藥提取物制成復(fù)合物，兼具有綜合提高機(jī)體基礎(chǔ)免疫水平的作用，便于對(duì)豬圓環(huán)病的治療與控制。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及屬于動(dòng)保行業(yè)獸醫(yī)獸藥領(lǐng)域，所提供卵黃抗體及其復(fù)合物可用于豬圓環(huán)病的臨時(shí)預(yù)防和免疫失敗后的緊急治療。
技術(shù)介紹
圓環(huán)病毒最早發(fā)現(xiàn)于1974年德國(guó)學(xué)者Tischer等的科研工作；后來(lái)的試驗(yàn)證實(shí)，來(lái)源于豬腎組織的該種病毒基因組由單股環(huán)狀的DNA組成，由此得名為豬圓環(huán)病毒 (porcine circovirus, PCV) 0按照國(guó)際病毒分類委員會(huì)第六次學(xué)術(shù)報(bào)告新增病毒科的結(jié)論，PCV在分類上屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬,是已知的最小的動(dòng)物病毒之一。該科病毒科內(nèi)尚無(wú)具體的分屬標(biāo)準(zhǔn)，共同特征為病毒粒子無(wú)囊膜，基因組由一條單股、環(huán)狀的DNA鏈組成。被列入該科的動(dòng)物病毒有豬圓環(huán)病毒、雞傳染性貧血病病毒，鸚鵡喙羽病病毒、鴿圓環(huán)病毒、金絲雀圓環(huán)病毒和人的TT病毒(一種肝炎病毒)等。目前的研究認(rèn)為豬圓環(huán)病毒粒子直徑14 17nm，呈20面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，無(wú)囊膜，含有共價(jià)閉合的單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA，基因組大小約為I. 76kb。PCV對(duì)外界理化因子的抵抗力相當(dāng)強(qiáng)，即便在PH3的酸性環(huán)境及72°C的高溫環(huán)境中也能存活一段時(shí)間，氯仿作用不失活，無(wú)血凝活性。現(xiàn)已知PCV有兩個(gè)血清型，即PCVl和PCV2。PCVl基本上無(wú)致病性；PCV2被認(rèn)為是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的主要病原，此外還有皮炎/腎病綜合征、繁殖障礙、呼吸道病復(fù)合癥、先天性震顫及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種臨床疾病類型。不同年齡的豬對(duì)PCV2均具有較強(qiáng)的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，傳染途徑為口腔和呼吸道。目前的研究表明，PCV2主要在機(jī)體的單核/巨噬細(xì)胞中復(fù)制，少數(shù)可在腎小球、支氣管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中增殖。一方面，PCV2與其它病毒，如豬繁殖與呼吸道綜合征病毒和PPV同時(shí)接種試驗(yàn)豬時(shí)，這些病毒可以刺激和活化免疫系統(tǒng)，從而促進(jìn)感染豬體內(nèi)PCV2的增殖。因此，免疫系統(tǒng)的激活可能是PMWS的觸發(fā)因素。另一方面， PCV2感染也使機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重的淋巴組織病變，包括淋巴細(xì)胞的缺失及淋巴組織免疫細(xì)胞亞群的變化，這就使機(jī)體的免疫力下降，從而對(duì)其它病原不能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，也是該病發(fā)生的重要機(jī)理。因此，豬感染PCV后免疫刺激與免疫抑制同時(shí)存在，這給疾病防御帶來(lái)很大困難。在獸醫(yī)臨床上，具有抗病毒作用的化學(xué)藥物已被禁用；傳統(tǒng)中藥制劑主要通過(guò)提高機(jī)體自身免疫水平來(lái)實(shí)現(xiàn)降低發(fā)病率，雖有一定作用但存在效果不穩(wěn)定的問(wèn)題；而疫苗免疫甚至不足10%，形成PCV感染普遍存在的局面，造成的經(jīng)濟(jì)損失幾乎是毀滅性的。因此，急需一種可用于豬圓環(huán)病的臨時(shí)預(yù)防和免疫失敗后緊急治療的藥物
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供了一種用于豬圓環(huán)病的臨時(shí)預(yù)防和免疫失敗后緊急治療的藥物— 抗豬圓環(huán)病卵黃抗體及其復(fù)合物，能與圓環(huán)病毒發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng)，同時(shí)提高機(jī)體自身免疫水平，用于豬圓環(huán)病的臨時(shí)預(yù)防和緊急治療。，其生產(chǎn)過(guò)程如下(1)、購(gòu)買(mǎi)豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株)存儲(chǔ)于4 8°C備用；(2)、購(gòu)買(mǎi)道地藥材板藍(lán)根、黃芪、白術(shù)、甘草，按一定比例配伍后加水煎煮，取其濃縮液干燥粉碎后作為中藥提取物密封備用；(3)、購(gòu)買(mǎi)經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；(4)、于70日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各2頭份；(5)、于77日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各5頭份；(6)、于90日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各10頭份；(7)、于210日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各15頭份；(8)、收集150 360日齡的雞蛋保存在4°C環(huán)境備用；(9)、在超凈臺(tái)上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時(shí)，用過(guò)濾氣泵回收上清液；(10)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過(guò)O.45微米和O. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；(11)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉；(12)、將卵黃抗體干粉和中藥提取物按照1:5 50的比例混合均勻得到黃抗體復(fù)合物。本專利技術(shù)所提供的卵黃抗體及其復(fù)合物，可經(jīng)過(guò)添加適當(dāng)輔料和適當(dāng)工藝制成粉劑、顆粒劑、片劑、溶液劑、注射液、注射用凍干粉等臨床適用劑型。本專利技術(shù)所述卵黃抗體及其復(fù)合物使用方法及使用量是按全價(jià)飼料重量的O. 5 I.0%混合以后使用，或者按照I :10 1000的比例兌水飲用，或者按照每公斤體重100 500mg的劑量進(jìn)行肌肉或皮下注射。本方法利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)特性，通過(guò)沉降法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過(guò)程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性，所生產(chǎn)的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)；再配伍中藥提取物制成復(fù)合物，兼具有綜合提高機(jī)體基礎(chǔ)免疫水平的作用，便于對(duì)豬圓環(huán)病的治療與控制。卵黃抗體作為緊急治療性藥物的來(lái)源之一，來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉、技術(shù)成熟度好的特點(diǎn)，適合作深度開(kāi)發(fā)。具體實(shí)施例方式舉例說(shuō)明本專利技術(shù)的生產(chǎn)過(guò)程如下(I)、購(gòu)買(mǎi)豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株)存儲(chǔ)于4 8°C備用；(2)、購(gòu)買(mǎi)道地藥材板藍(lán)根、黃芪、白術(shù)、甘草，按一定比例配伍后加水煎煮，取其濃縮液干燥粉碎后作為中藥提取物密封備用；(3)、購(gòu)買(mǎi)經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；(4)、于70日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各2頭份；(5)、于77日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各5頭份；(6)、于90日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各10頭份；(7)、于210日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各15頭份；(8)、收集150 360日齡的雞蛋保存在4°C環(huán)境備用；(9)、在超凈臺(tái)上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時(shí)，用過(guò)濾氣泵回收上清液；(10)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過(guò)O.45微米和O. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；(11)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉；(12)、將卵黃抗體干粉和中藥提取物按照1:5 50的比例混合均勻得到黃抗體復(fù)合物。本專利技術(shù)的的應(yīng)用例；1:將卵黃抗體與中藥(板藍(lán)根黃芪白術(shù)甘草=3:3:2:1)提取物按照I: 10的比例混合成卵黃抗體復(fù)合物備用；2:將卵黃抗體復(fù)合物與水按1:200的比例配成無(wú)菌溶液備用；3:將卵黃抗體與PEG-200、PVP-K30、水配成O. 2%的注射液備用；4:將卵黃抗體與可溶性淀粉、明膠、乳糖混合后凍干，制成IOOmg/支的注射用凍干粉針劑備用；以上實(shí)施例僅為了對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步的說(shuō)明，而本專利技術(shù)的范圍不受所舉實(shí)施例的局限。部分試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告豬圓環(huán)病本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王慶福，劉易通，李振天，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣東紫金正天藥業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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