SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑、其制備方法及用途技術

本發明專利技術屬于本發明專利技術屬于生物醫藥領域，涉及一種SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑、其制備方法及用途。具體而言，SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑的制備方法，包括下述步驟：1)制備SapC和磷脂的共同溶液：所述共同溶液含有水和有機溶劑，其中所述有機溶劑選自1-丙醇、2-丙醇、甲醇、叔丁醇、和乙氰中的一種或多種；2)真空冷凍干燥：將步驟2)中得到的共同溶液進行真空冷凍干燥，得到SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑。本發明專利技術還涉及一種SapC-磷脂納米囊泡注射液制劑。本發明專利技術的SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑無需高溫滅菌，并且粒徑均勻、穩定性好。

【技術實現步驟摘要】
SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑、其制備方法及用途
本專利技術屬于生物醫藥領域，涉及一種蛋白藥物制劑，具體地，涉及一種SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑、其制備方法及用途。本專利技術還涉及一種SapC-磷脂納米囊泡注射液制劑。
技術介紹
鞘脂激活蛋白C(SaposinC，簡稱為SapC)是鞘脂激活蛋白家族里的成員之一，在控制溶酶體鞘脂及鞘糖脂代謝方面具有重要功能(參見Grabowski，G.A.，Gatt，S.，andHorowitz，M.(1990)Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.25，385-414；Furst，W.，andSandhoff，K.，(1992)Biochim.Biophys.Acta1126，1-16；Kishimoto，Y.，Kiraiwa，M.，andO’Brien，J.S.(1992)J.Lipid.Res.33，1255-1267)。進一步的研究發現，SapC是一種生物膜融合蛋白，對病理性細胞的細胞膜外層暴露的陰離子磷脂具有特殊的選擇性和親和性，在此蛋白的膜融合作用下促進了SapC對病理性細胞靶向性攻擊并進一步誘導細胞調亡，因此能夠抑制多種腫瘤細胞，例如神經母細胞腫瘤[1-12]，胰腺癌[1-3、5-6、9、11、15]、腦癌[1-3、12-14、16-20]、肺癌[1-3]、肝癌[1-3]、乳腺癌[1-3、12、19-20]、前列腺癌[1-3]、或白血病[1-3、9、11、12]等腫瘤的細胞的生長。當SapC與一種不飽和陰離子磷脂結合反應時，蛋白質自然鑲嵌于磷脂膜以形成納米單室囊泡。脂質囊泡是由同心脂質雙分子層組成的微觀囊泡，本專利技術中是指由兩性脂質排列成以球體雙分子層形式排列組成的小囊泡。在結構上，脂質體的大小形狀變化不一，從長管狀到球體狀，其尺度范圍則更在數百埃米到1毫米之間。撇開外觀而言，雙分子層膜一般是由封閉的同心薄層和一個可分開彼此薄層的疏水層組成的。囊泡的大小，通常直徑在約20至30000nm之間。通過選擇適當大小的應用于遞送治療藥物的脂質體，或通過與蛋白質共價或非共價結合，可特異性地遞送脂質體至某一靶組織，比如增殖的細胞群，腫瘤組織，炎癥組織、感染組織以及神經系統。一般情況下，經機械應力作用下的磷脂混合物可形成脂質囊泡。例如，目前應用于制備脂質體的方法有許多。這些包括，如它們包括溶劑透析，高壓，擠壓(凍融或無凍融)，逆相蒸發，簡易凍融，超聲處理，螯合透析，均質化處理，溶劑灌注，微乳化技術，自發形成，溶劑蒸發，高壓細胞破碎技術，控制洗滌劑透析等等(參見Maddenetal.，ChemistryandPhysicsofLipids，1990.Liposomesmayalsobeformedbyvariousprocesseswhichrequireshakingorvortexing)。公開號為CN1735424A的中國專利申請公開了一種SapC與二油基磷脂酰絲氨酸(DOPS)組成的蛋白脂質復合納米體(簡稱為SapC-DOPS納米囊泡)。SapC-DOPS納米囊泡是一種具有靶向性和廣譜性的抗癌藥物，可對諸如：胰腺癌、腦癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、腦癌、乳腺癌、前列腺癌、白血病、結腸癌、神經母細胞腫瘤等多種癌癥進行有效治療。另外，可特異性地靶向治療炎癥組織以及感染組織，并有助于機體免疫功能。同時，大量的動物毒理試驗表明，SapC-DOPS納米囊泡對正常細胞和組織沒有顯示任何急性或慢性的毒性反應。與目前國內外常用的化療藥物相比，SapC-DOPS納米囊泡最大的優勢在于安全性和靶向性。但是，上述專利中的SapC-DOPS納米囊泡存在以下不足：1)大規模化滅菌的困難。需要高溫滅菌，對設備的要求高。2)脂質囊泡制備在雙分子層膜的大小和數量上經常呈現非常不均勻分布，不利于大規模生產。3)穩定性的問題。懸液中的脂質囊泡在貯存，加熱以及加有不同添加劑的情況下發生聚集、融合、沉降、以及滲漏等問題。為了克服穩定性問題，脂質囊泡經常用水溶液凍干處理。但是此凍干法成本高，耗時長，并且在這樣的情況下，脂質囊泡大小差異會增大，其內包的活性藥物成分可能會外露。因此，亟需制備SapC和磷脂復合物的凍干制劑，其滅菌容易、粒徑均一、有利于大規模生產、并且穩定性良好。但是，SapC是水溶性蛋白，一般用水溶液來制備凍干制劑。而磷脂是脂溶性的，一般可溶于有機溶劑中，不溶于水溶液。所以，并不容易制備SapC和磷脂復合物的凍干制劑，要克服的困難很多，例如：發現可以兼融的溶液/溶劑系統，可以使SapC和磷脂共同溶解；找到溶液/溶劑系統中合適的比例，在此比例下的溶液/溶劑系統可以用于常規的凍干操作；制備后的SapC和磷脂復合物的凍干制劑保持生物活性和物理特性。
技術實現思路
為了解決上述問題，本專利技術人經過大量的實驗和創造性的勞動，發現了一種溶劑體系，專利技術人驚奇地發現，利用此溶劑體系可以制得SapC和磷脂的共同溶液，并且合適比例的溶液/溶劑系統適用于凍干操作；制得的SapC和磷脂復合物的凍干制劑保持生物活性和物理特性。由此提供了下述專利技術：本專利技術的一個方面涉及一種SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑的制備方法，包括下述步驟：1)制備SapC和磷脂的共同溶液：所述共同溶液含有SapC、磷脂、水和有機溶劑，其中所述有機溶劑選自1-丙醇、2-丙醇、甲醇、叔丁醇、和乙氰中的一種或多種；2)真空冷凍干燥：將步驟2)中得到的共同溶液進行真空冷凍干燥，得到SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑。術語“共同溶液”含有SapC、磷脂、水和有機溶劑，其中所述有機溶劑選自1-丙醇、2-丙醇、甲醇、叔丁醇、和乙氰中的一種或多種，并且SapC、磷脂、水和有機溶劑是互溶的，并且所述共同溶液不分相。SapC的氨基酸序列如下：SDVYCEVCEFLVKEVTKLIDNNKTEKEILDAFDKMCSKLPKSLSEECQEVVDTYGSSILSILLEEVSPELVCSMLHLCSG(SEQIDNO：1)根據本專利技術的任一項所述的制備方法，其中，所述磷脂選自帶負電荷的磷脂，例如二油酰磷脂酰絲氨酸(DOPS)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二油酰磷脂酰肌醇(DOPI)、和二油酰磷脂酸(DOPA)中的一種或多種。根據本專利技術的任一項所述的制備方法，其中，步驟1)中水和有機溶劑的體積比水：有機溶劑為9.5∶0.5至0.5∶9.5；具體地，為9∶1至2∶8；更具體地，為9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、或2∶8。根據本專利技術的任一項所述的制備方法，其中，步驟1)中的所述共同溶液中，SapC的濃度為0.002-100mg/ml，磷脂的濃度為0.001-50mg/ml；具體地，SapC的濃度為0.1-10mg/ml，磷脂的濃度為0.05-5mg/ml；更具體地，SapC的濃度為0.5-5mg/ml，磷脂的濃度為0.1-2.5mg/ml。根據本專利技術任一項上述的制備方法，在一個實施方案中，步驟1)中的所述共同溶液通過將SapC和磷脂加入到含有水和有機溶劑的混合溶液中得到。根據本專利技術任一項上述的制備方法，在一個實施方案中，步驟1)中的所述共同溶液通過下述步驟得到：A.制備SapC水溶液；B.制備磷脂有機溶液：其中所用有機溶劑為選自1-丙醇、2-丙醇、甲本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑的制備方法，包括下述步驟：1)制備SapC和磷脂的共同溶液：所述共同溶液含有SapC、磷脂、水和有機溶劑，其中所述有機溶劑為叔丁醇；2)真空冷凍干燥：將步驟1)中得到的共同溶液進行真空冷凍干燥，得到SapC-磷脂納米囊泡凍干制劑；所述磷脂為二油酰磷脂酰絲氨酸、二油酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰肌醇和二油酰磷脂酸中的一種或多種；其中，步驟1)中水和有機溶劑的體積比水：有機溶劑為9：1至2：8；步驟1)中的所述共同溶液中，SapC的濃度為0.1－10mg/ml，磷脂的濃度為0.05－5mg/ml。2.根據權利要求1所述的制備方法，其中，步驟1)中水和有機溶劑的體積比水：有機溶劑為9：1、8：2、7：3、6：4、5：5、4：6、3：7或2：8。3.根據權利要求1所述的制備方法，其中，步驟1)中的所述共同溶液中，SapC的濃度為0.5－5mg/ml，磷脂的濃度為0.1－2.5mg/ml。4.根據權利要求1所述的制備方法，其中，步驟1)中的所述共同溶液通過將SapC和磷脂加入到含有水和有機溶劑的混合溶液中得到。5.根據權利要求1所述的制備方法，其中，步驟1)中的所述共同溶液通過下述步驟得到：A.制備SapC水溶液；B.制備磷脂有機溶液：其中，所用有機溶劑為叔丁醇；C.混合：將步驟A中制備的SapC水溶液和步驟B中制備的磷脂有機溶液相混合，得到SapC和磷脂的共同溶液。6.根據權利要求5所述的制備方法，其中，步驟A中制得的SapC水溶液中SapC的濃度為0.1－10mg/ml，步驟B中制得的磷脂有機溶液中磷脂的濃度為0.05－5mg/ml。7.根據權利要求5所述的制備方法，其中，步驟A中制得的SapC水溶液中SapC的濃度為0.5－5mg/ml，步驟B中制得的磷脂有機溶液中磷脂的濃度為0.25－2.5mg/ml。8.根據權利要求5所述的制備方法，其中，步驟A中的所述SapC水溶液含有選自磷酸鹽、乳酸鹽和醋酸鹽中的一種或多種，并且所述SapC水溶液的pH為4－9。9.根據權利要求5所述的制備方法，其中，將所述SapC水溶液進行除菌。10.根據權利要求5所述的制備方法，其中，所述SapC水溶液還含有藥學上可接受的輔料。11.根據權利要求8至10中任一項所述的制備方法，其中，SapC水溶液的pH為6.5－7.5。12.根據權利要求10所述的制備方法，其中，所述輔料為二糖。13.根據權利要求10所述的制備方法，其中，所述輔料為選自海藻糖、蔗糖、麥芽糖、蜜二糖、半乳糖、葡萄糖、果糖和乳糖中的一種或多種。14.根據權利要求1所述的制備方法...

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：常州長吉生物技術開發有限公司，
類型：發明
國別省市：