本發明專利技術涉及本發明專利技術涉及紫杉醇在制備治療非小細胞肺癌EGFR-TKI耐藥性藥物中的應用。肺癌居全球腫瘤發病和癌癥死亡率的第一位。吉非替尼和厄洛替尼在NSCLC中的療效經常受到獲得性耐藥的限制，而目前已知的獲得性耐藥的主要機制為第二代EGFRT790M突變和MET基因獲得性擴增。本發明專利技術表明，當出現EGFR-TKI獲得性耐藥后，紫杉醇可能逆轉其耐藥。也就是說對于那些已從厄洛替尼/吉非替尼治療中產生獲得獲得性耐藥性的非小細胞肺癌病人，經紫杉醇化療后，可以再次考慮使用厄洛替尼/吉非替尼治療，使得厄洛替尼/吉非替尼繼續發揮功能，同時紫杉醇也可以對腫瘤進行抑制，從而發揮回轉耐藥性和協同作用。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及紫杉醇在制備治療非小細胞肺癌EGFR-TKI耐藥性藥物中的應用。
技術介紹
目前在腫瘤藥物治療過程中獲得性耐藥性成為世界難題，同時也是治療腫瘤無效的原因。EGFR-TKI藥物(厄洛替尼或吉非替尼)是晚期非小細胞肺癌治療中非常重要的靶向藥物，但其獲得性耐藥的出現限制了臨床的應用，因此需要積極探索獲得性耐藥的形成機制。EGFR-TKI藥物獲得性耐藥的機制目前仍未完全明確。已有的研究顯示，EGFR-TKI獲得性耐藥的產生可能主要與以下兩種機制有關繼發性外顯子T790M突變和MET繼發性擴增。目前I790M突變耐藥研究已取得較好的結果，而對MET擴增所導致耐藥的研究仍在探索中。MET癌基因信號擴增可致PI3K/AKT信號持續激活，活化的AKT可磷酸化它的下游分子，從而促進細胞增殖、細胞運動和侵襲、抑制細胞凋亡和導致EGFR-TKI耐藥的產生。到目前為止，沒有特別有效的辦法解決EGFR-TKI獲得性耐藥性難題。本專利技術通過多年研究發現紫杉醇可以治療EGFR-TKI獲得性耐藥性發揮作用。
技術實現思路
專利技術目的 本專利技術提供了紫杉醇治療EGFR-TKI獲得性耐藥性方面提供新的治療方案或選擇，為將來治療提供新的思路和方法。 技術方案 紫杉醇在制備治療EGFR-TKI獲得性耐藥性藥物中的應用 有益效果 I、肺癌居全球腫瘤發病和癌癥死亡率的第一位。吉非替尼和厄洛替尼在NSCLC中的療效經常受到獲得性耐藥的限制，而目前已知的獲得性耐藥的主要機制為第二代EGFRT790M突變和MET基因獲得性擴增。本專利技術表明，當出現EGFR-TKI獲得性耐藥后，紫杉醇可能逆轉其耐藥。也就是說對于那些已從厄洛替尼/吉非替尼治療中產生獲得獲得性耐藥性的非小細胞肺癌病人，經紫杉醇化療后，可以再次考慮使用厄洛替尼/吉非替尼治療，使得厄洛替尼/吉非替尼繼續發揮功能，同時紫杉醇也可以對腫瘤進行抑制，從而發揮回轉耐藥性和協同作用。具體來說通過CCK-8和流式結果發現，紫杉醇可以抑制肺癌EGFR-TKI耐藥細胞株H1975、H820和A549增殖,并促進其凋亡。相關分析發現，腫瘤組織survivin表達與P-Akt表達成正相關。我們的Western blot結果提示紫杉醇作用后，H1975、PC-9和H820細胞MET、p-Akt, survivin蛋白的表達下調,而A549細胞未見三種蛋白表達,上述結果提示，H1975、PC-9和H820細胞凋亡與紫杉醇下調MET、p_Akt，survivin蛋白表達有關，A549細胞細胞耐藥有其他機制參與。我們用Real-time PCR的方法檢測了 4種肺癌細胞紫杉醇作用前后miR-1的表達，結果發現，紫杉醇作用后miR-1在H1975、PC-9和H820細胞中的表達均較前明顯升高，A549細胞中表達無明顯變化，提示EGFR-TKI獲得性耐藥細胞株出現凋亡與microRNA-1 (miR-1)表達上調有關。其中所述的microRNA-1 (miR-1)存在于大多數動物種系，特異性表達于心肌和骨骼肌細胞，通過作用于組蛋白去乙酰化酶4而促進成肌細胞分化，抑制細胞擴增。新近研究發現在支氣管上皮細胞中表達miR-1，在肺癌腫瘤組織及細胞中其表達較低，轉染miR-1后能夠逆轉肺癌細胞A549 and H1299的致瘤特性(包括生長、復制、遷移及腫瘤形成等)，伴隨誘導阿霉素對A549細胞誘發的凋亡；相反miR-1缺失會導致腫瘤細胞生長,提示miR-1在肺癌的發生、發展過程中發揮重要的抑癌基因的作用。 綜上所述，細胞實驗表明，紫杉醇對兩種對EGFR-TKI獲得性耐藥的肺癌細胞敏感，而對EGFR-TKI原發性耐藥的肺癌細胞無明顯作用，對臨床治療TKI耐藥的病人有指導意義，擴大了 EGFR-TKI的應用范圍。附圖說明圖I 為 IC50 濃度紫杉醇對H1975、PC-9、H820 和 A549 細胞MET、p_Akt, survivin蛋白表達的影響；圖2. H1975、PC-9、H820和A549細胞中miR-1在IC50濃度紫杉醇作用前后的變化。具體實施例方式以下結合實施例對本專利技術作進一步詳細描述。實施例I I.細胞培養H1975細胞為EGFR L858R-I790M突變型，對EGFR-TKI耐藥；H820細胞具有MET擴增，對EGFR-TKI耐藥；A549細胞表達野生型EGFR基因，EGFR-TKI耐藥；PC_9系EGFR-TKI高度敏感細胞，上述H1975、H820、PC-9細胞購自ATCC (美國)，A549細胞由本實驗室保存。細胞培養應用RPMI-1640培養基(內含10% FBS、谷氨酰胺和青鏈霉索)傳代培養細胞株H1975、H820、A549、PC-9。在37°C、含5% C02的孵箱中進行細胞培養，每I 2天更換培養液I次。該四種細胞為貼壁細胞，當細胞生長到融合度為90%左右時，使用胰酶消化，并用吸管反復吹打使其離開培養瓶底壁，然后離心收集。收集到的細胞一半用于提取RNA, —半用于提取蛋白。2、CCK-8法測細胞增殖抑制選擇對數生長期H1975、H820、A549和PC-9細胞，調整細胞數為2 X IO4個/mL接種于96孔培養板，每孔100 ill。24h后加入藥物(0，1，2，4，8，16，32nmol/L)。同時設陰性對照組(培養液中不加藥物)，空白對照組(加細胞不加培養液)。每組設5個復孔，在37°C、5% C02培養箱中培養48h。檢測時每孔加入CCK-8 10yl，溫育Ih后，于波長450nm酶標儀檢測吸光度(A)值。實驗重復3次并按下列公式計算腫瘤細胞抑制率，抑制率=(I-實驗孔平均OD值/對照孔平均OD值)X 100%。實驗結果紫杉醇對H1975、H820、A549和PC-9細胞的生長抑制作用 不同濃度紫杉醇作用于肺癌H1975、H820、A549和PC-9細胞48h后，細胞生長明顯抑制，呈現濃度依賴性，延長作用時間未見細胞生長抑制率有明顯提高。如表I所示。濃度(nM)__1_2_4_8_16_32_IC50_H1975_ 69. 44±3. 75 57. 11±3. 88 36. 12±2. 25 15. 69±1.37 10. 06±0. 902 4. 68±0. 40 3. 63±0. 559H820_ 89. 58±4. 29 84. 2±4. 88 62. 85±4. 49 18. 29±1.52 8. 81±0. 86 1.98±0. 18 5. 05±0. 217A549_ 72.89±3. 13 67. 6±4. 19 350. 74±3. 28 36. 37±2. 96 29. 75±2.89 14. 52±1.37 6. 124±0. 291PC-9_81.84±4. 74 78. 71±5. 06 61. 04±2. 94 30. 68±2. 45 14. 85±1.33 7. 01±0. 65 5. 786±0. 258 表I紫杉醇作用后的細胞生存率及IC50Fig I The effect of paclitaxel on proliferation of H1975， H820 ，A549 andPC-9 cells. H1975， 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭人花，束永前，金時代，王萱怡，
申請(專利權)人：江蘇省人民醫院，
類型：發明
國別省市：
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