本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種輔助鑒定番茄黃化曲葉病毒抗性植株的特異引物對及其應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)提供的特異引物對由序列表的序列1所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成。本發(fā)明專利技術(shù)提供的特異引物對，具有特異性好、靈敏度高的優(yōu)點，可以從分子水平準(zhǔn)確、快速、高效地檢測植株中是否為番茄抗黃化曲葉病毒抗病品種，是否攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a。本發(fā)明專利技術(shù)的引物對可以方便地應(yīng)用到番茄雜交種種子純度鑒定以及番茄雜交種品種真實性鑒定；可以方便地應(yīng)用到抗病毒育種材料的鑒定篩選以及抗病毒品新品種的培育。這項技術(shù)將為TYLCV的綜合防控和北京及全國的蔬菜安全可持續(xù)生產(chǎn)提供強(qiáng)有力的科技支撐。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種輔助鑒定番茄黃化曲葉病毒抗性植株的特異引物對及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
番爺(Solanum Iycopersicum)是一種重要的世界性蔬菜作物,在我國設(shè)施蔬菜生產(chǎn)中占有重要位置。以北京為例，番茄、黃瓜、甜辣椒和茄子4種果類蔬菜的設(shè)施生產(chǎn)面積25萬余畝，其中番茄12. 8萬余畝。因此，番茄的安全生產(chǎn)對于北京“菜籃子”工程起到舉足輕重的作用。病毒病是番爺生產(chǎn)中最常見且發(fā)病最普遍的病害之一,其中番爺黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)嚴(yán)重地威脅著番爺?shù)陌踩a(chǎn)。番爺黃化曲葉病毒屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomoviruses),是一種雙生DNA病毒，通過“超級害蟲煙粉虱傳播，具有突發(fā)性和難以控制的特點。番茄黃化曲葉病毒可以侵染茄科、豆科等多種植物，主要危害番茄、辣椒、茄子、甘藍(lán)和黃瓜等蔬菜以及煙草等經(jīng)濟(jì)作物，特別是在番茄上危害更重，受害植物的癥狀(發(fā)病表征)表現(xiàn)如下生長緩慢，植株明顯矮化；頂部葉片皺縮、葉周邊向上卷曲，葉片變厚變小，葉片區(qū)域性黃化；坐果少，果實硬小，不能正常轉(zhuǎn)色，喪失商品性；危害嚴(yán)重時不能開花坐果，造成絕產(chǎn)。番茄黃化曲葉病毒是近幾年新傳入我國的有害生物。1964年最早在以色列發(fā)生，之后迅速擴(kuò)散到中東、地中海沿岸、東亞、南亞、非洲、歐洲、美國、中美洲、澳大利亞等眾多國家和地區(qū)。2002年傳入我國南方省份。2005年秋在廣西番茄主產(chǎn)區(qū)百色市田陽鎮(zhèn)大面積爆發(fā)，同年傳入江浙一帶。2007年傳入河南和山東。2008年該病在全國多個省市發(fā)展蔓延。2009年該病在河北局部地區(qū)和山東壽光大爆發(fā)，發(fā)生面積10多萬畝，番茄損失8萬多畝。2009年夏秋季，在北京郊區(qū)縣陸續(xù)發(fā)生，北京地區(qū)主栽的粉色大果番茄品種大多對該病毒敏感，該病害遍及通州、大興、順義、平谷、密云、延慶、昌平、房山、懷柔、豐臺、朝陽、海淀等區(qū)縣，發(fā)病棚室一般病株率5-10%，重病棚室病株率20%左右，個別棚室發(fā)病率達(dá)90%以上，造成嚴(yán)重減產(chǎn)或絕收，且病情發(fā)展迅速呈蔓延趨勢。從世界各國番茄黃化曲葉病毒危害及防控的經(jīng)驗來看，利用番茄植物自身的抗性基因，培育并推廣抗病毒新品種是最經(jīng)濟(jì)有效防控番茄黃化曲葉病毒的根本途徑。如何針對性地快速準(zhǔn)確地鑒定并利用番茄自身抗性基因培育抗病毒新品種，以及快速準(zhǔn)確便捷地鑒定番茄抗病毒新品種的真實性和雜交種純度，這是番茄安全生產(chǎn)的迫切需求。在當(dāng)前的研究中，從番茄種質(zhì)資源中已經(jīng)鑒定到6個番茄黃化曲葉病毒抗性相關(guān)基因，依次命名為番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty I (又稱Ty I基因)、番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty2 (又稱Ty2基因)、番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3 (又稱Ty3基因)、番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a (又稱Ty3a基因)、番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty4(又稱Ty4基因)和番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty5(又稱Ty5基因)，上述6個基因依次定位在番茄第6號染色體、第11號染色體、第6號染色體、第6號染色體、第3號染色體和第4號染色體上，其中Tyl基因、Ty2基因和Ty3a基因已應(yīng)用于當(dāng)前的抗病品種的培育中。目前根據(jù)材料的抗性表現(xiàn)，Ty3a基因?qū)τ谠摬《揪哂懈呖剐裕瞧渚唧w序列未知。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種輔助鑒定番茄黃化曲葉病毒抗性植株的特異引物對及其應(yīng)用。本專利技術(shù)提供了序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的特異引物對。所述特異弓I物對可用于輔助鑒定番茄對番茄黃化曲葉病毒的抗性。本專利技術(shù)還保護(hù)一種輔助鑒定番茄對番茄黃化曲葉病毒抗性的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中具有454bp的特異性條帶、待測番茄為候選的番茄黃化曲葉病毒抗病番茄，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中不具有454bp的特異性條帶、待測番茄為候選的番茄黃化曲葉病毒感病番茄。所述待測番茄為番茄材料M82或其子代、番茄材料Gcl71或其子代、蘇粉13號或其子代或羅曼娜2號或其子代。所述待測番茄具體可為番茄材料M82、番茄材料Gcl71、或番茄材料M82和番茄材料Gcl71的子代。所述特異弓I物對可用于篩選番茄黃化曲葉病毒抗病番茄。本專利技術(shù)還保護(hù)一種篩選番茄黃化曲葉病毒抗病番茄的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中具有454bp的特異性條帶,待測番爺為候選的番爺黃化曲葉病毒抗病番爺。所述待測番茄為番茄材料M82或其子代、番茄材料Gcl71或其子代、蘇粉13號或其子代或羅曼娜2號或其子代。所述待測番茄具體可為番茄材料M82、番茄材料Gcl71、或番茄材料M82和番茄材料Gcl71的子代。所述特異引物對可用于輔助鑒定番茄是否攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a。本專利技術(shù)還保護(hù)一種輔助鑒定番茄是否攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中具有454bp的特異性條帶、待測番茄疑似攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中不具有454bp的特異性條帶、待測番茄疑似不攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a。所述待測番茄為番茄材料M82或其子代、番茄材料Gcl71或其子代、蘇粉13號或其子代或羅曼娜2號或其子代。所述待測番茄具體可為番茄材料M82、番茄材料Gcl71、或番茄材料M82和番茄材料Gcl71的子代。所述特異引物對可用于篩選攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a的番茄。本專利技術(shù)還保護(hù)一種篩選番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a的番茄的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中具有454bp的特異性條帶、待測番茄為候選的攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a的番茄。所述待測番茄為番茄材料M82或其子代、番茄材料Gcl71或其子代、蘇粉13號或其子代或羅曼娜2號或其子代。所述待測番茄具體可為番茄材料M82、番茄材料Gcl71、或番茄材料M82和番茄 材料Gcl71的子代。所述特異引物對可用于制備試劑盒；所述試劑盒的功能為如下(a)、(b)、(C)、(d)、(e)、(f)或(g) (a)輔助鑒定番茄對番茄黃化曲葉病毒的抗性；(b)篩選番茄黃化曲葉病毒抗病番茄；(C)輔助鑒定番茄是否攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a ； (d)篩選攜帶番爺抗黃化曲葉病毒基因Ty3a的番爺；(e)輔助鑒定番爺黃化曲葉病毒抗病番爺?shù)碾s交種種子的純度；(f)輔助鑒定番茄黃化曲葉病毒抗病番茄的雜交種的品種真實性；(g)番茄黃化曲葉病毒抗病番爺育種。所述番茄為番茄材料M82或其子代、番茄材料Gcl71或其子代、蘇粉13號或其子代或羅曼娜2號或其子代。所述待測番茄具體可為番茄材料M82、番茄材料Gcl71、或番茄材料M82和番茄材料Gcl71的子代。本專利技術(shù)提供的特異引物對，具有特異性好、靈敏度高的優(yōu)點，可以從分子水平準(zhǔn)確、快速、高效地檢測植株是否為番茄抗黃化曲葉病毒抗病品種，是否攜帶Ty3a基因。本專利技術(shù)的引物對可以方便地應(yīng)用到番茄雜交種種子純度鑒定以及番茄雜交種品種真實性鑒定，可以方便地應(yīng)用到抗番本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
【技術(shù)特征摘要】
1.序列表的序列I所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的特異引物對。2.權(quán)利要求I所述特異引物對在輔助鑒定番茄對番茄黃化曲葉病毒的抗性中的應(yīng)用。3.一種輔助鑒定番茄對番茄黃化曲葉病毒抗性的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求I所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中具有454bp的特異性條帶、待測番茄為候選的番茄黃化曲葉病毒抗病番茄，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中不具有454bp的特異性條帶、待測番茄為候選的番茄黃化曲葉病毒感病番茄。4.權(quán)利要求I所述特異引物對在篩選番茄黃化曲葉病毒抗病番茄中的應(yīng)用。5.一種篩選番茄黃化曲葉病毒抗病番茄的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求I所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中具有454bp的特異性條帶，待測番茄為候選的番茄黃化曲葉病毒抗病番茄。6.權(quán)利要求I所述特異引物對在輔助鑒定番茄是否攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a中的應(yīng)用。7.一種輔助鑒定番茄是否攜帶番茄抗黃化曲葉病毒基因Ty3a的方法，包括如下步驟以待測番茄的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求I所述特異引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李常保，李傳友，趙統(tǒng)敏，耿麗華，
申請(專利權(quán))人：北京市農(nóng)林科學(xué)院，中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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