5-FU的檢測方法技術

本發明專利技術提供了用于檢驗分析5-FU的方法、組合物、設備及試劑盒。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術一般涉及診斷試驗，特別是在患者樣品中對于試驗的組合物和診斷方法。
技術介紹
5-氟尿嘧啶(5-FU)是在癌癥治療中最重要的化療藥物之一。通常用于直腸癌，胃癌，乳腺癌和胰腺癌的各種化療方案。例如，5-FU単獨或者聯合療法比如FOLFOX和FOFIRI是在轉移性直腸癌中的標準ー線療法。但是，5-FU常常伴隨嚴重的副作用包括骨髄抑制，粘膜炎，皮炎，腹瀉，心臟毒性甚至死亡。這些副作用至少在某種90程度上是由現有的對單個患者的劑量測定方法導致的?，F行標準治療中劑量的決定方法-體表面積(BSA)僅僅考慮了患者的身高和體重。BSA沒有考慮許多影響5-FU代謝和效カ的因素比如基因型、年齡、性另O、疾病狀態、藥物相互作用、器官功能、和合并癥。因此，盡管是基于BSA的相同劑量給藥， 不同患者的5-FU血藥濃度有超過10倍的差別也就不足為奇。最近的學術研究表明，基于血漿5-FU濃度的藥物動力學監測的個體5-FU劑量調整可導致對5-FU的客觀反應率的顯著提高。例見Gemelin et al. J. Clin. Oncol.，26(13) :2099-2105 (2008) ；C1imente-Marti et al.，J.Pharmaceut. Sci. ,92 (6)1155-1165(2003) ；Milano et al.，Int. J. Cancer, 41 :537-541 (1988)。這些研究表明接受5-FU治療的個體患者中的5-FU血液濃度的臨床檢測對于5-FU劑量調整、療效優化和減少嚴重不良反應無疑是需要的。專利技術概沭本專利技術提供了了ー種在患者樣品中檢測5-氟尿嘧啶的方法。第一方面，提供了在從接受了 5-FU和可選的其它藥物的患者取得的樣品中檢測5-FU的方法。該方法中，從攝入5-FU的患者中取得樣品，然后該樣品與ニ氫嘧啶脫氫酶(DPD)滅活劑混合，而后在該樣品中特別是與DH)滅活劑混合的狀態下測定5-FU的量。另ー方面，本專利技術提供了ー種用5-FU治療患者的方法，包括以下步驟給予患者第一劑5-氟尿嘧啶；測量取自該攝入5-FU患者的樣品中的5-FU含量，其中所述的樣品在體外摻入ー種DH)滅活劑形成混合物，其中所述樣品中5-FU的量最好是在有滅活劑存在的情況下測得的；然后給予該患者第二劑5-FU。第二劑給予5-FU的量是根據患者樣品中所測量的5-FU水平并基于預設最佳或目標5-FU AUC來決定的。本專利技術也為5-FU檢驗提供了一種處理接受了 5-FU并可選擇地的其它藥物療法患者的血液樣品的方法。在一實施方案中，該方法包括以下步驟 從攝入5-FU的患者中獲得含有5-FU的血液樣品；從血樣中分離出血漿；在分離血漿中添加DI3D滅活劑以組成混合物；然后將混合物送往實驗室進行混合物中5-FU水平的分析試驗。在另ー實施方案中，該方法包括以下步驟從攝入5-FU的患者中獲得含有5-FU的血液樣品；在血樣中添加Dro滅活劑以組成混合物；然后從混合物中分離出含有5-氟尿嘧啶和滅活劑的血漿。由此獲得的血漿可送往實驗室進行5-FU檢驗。在另ー種實施方案中，處理注入5-FU的患者的血液樣品的方法需要以下步驟-J人患者中獲得含有5-FU的血液樣品；在血樣中添加Dro滅活劑以組成混合物；然后將混合物送往實驗室進行5-FU檢驗。本專利技術的另一方面，提供了一種組合物，包括從攝入了 5-FU的患者中分離的、混有ニ氫嘧啶脫氫酶滅活劑的樣品，這里所說的樣品是血液或血漿或血清，而滅活劑在組合物中的濃度至少為850ng/ml。另ー方面，本專利技術提供了ー個試劑盒包括以下成分在ー個容器內(a)從攝入了5-FU的患者中分離的、混有濃度至少為850ng/ml的ニ氫嘧啶脫氫酶滅活劑的樣品；(b)將該樣品降溫至IOoC以下的手段。在本專利技術的各個方面中，最好樣品從上述患者中分離出來后5到10個小時之內不冷凍。滅活劑的例子包括，例如，嘧啶或者吡啶衍生物，特別是尿嘧啶類似物比如恩尿嘧啶(eniluracil)和吉美拉西(Gimeracil)。樣品中的5-FU可通過任何已知的技術來檢驗，t匕如，HPLC、Mass-Spec (質譜)、或使用抗5-FU抗體的免疫分析。 除非另外定義，本說明書中有關技術的和科學的術語與本領域內的技術人員所通常理解的意思相同。雖然在實驗或實際應用中可以應用與此間所述相似或相同的方法和材料，本文還是在下文中對材料和方法做了描述。在相沖突的情況下，以本說明書包括其中定義為準，另外，材料、方法和例子僅供說明，而不具限制性。本專利技術的其他特點和優勢將由下面的具體說明和權利要求書作詳細的描述。附圖簡沭圖I是顯示實施于臨床環境中樣品處理方法的實施方案的圖表圖2是顯示恩尿嘧啶對防止血樣中5-FU的降解有效的圖表。圖3是5-こ烯基尿嘧啶，5-碘尿嘧啶和吉美拉西對穩定血液樣品中5-FU都有效的圖表。圖4是顯示血液中低濃度的吉美拉西對抑制Dro調節的5-FU的降解有效的圖解。圖5是顯示長時間在不經過血漿分離的血液中保持有吉美拉西的影響的圖解。圖6是顯示轉移注射器裝配的一種實施方案圖。圖7A和7B是顯示轉移注射器裝配的一種實施方案圖。圖8是顯示轉移注射器裝配的一種實施方案圖。專利技術詳述I.樣品制備，5-FU檢驗，組合物和試劑盒依照本專利技術的第一方面，提供了一種處理用于檢驗5-FU的包含5-FU的患者樣品(例如，從用5-FU或5-FU前體藥物治療的患者中取得)的方法。該方法導致樣品中5-氟尿嘧啶穩定性增強而且顯著提高5-FU檢測的精確性。因此，在另一方面，本專利技術也提供了一種使用根據處理方法處理的患者樣品進行5-FU檢驗的方法。一般來說，該處理方法包括以下步驟獲取含有5-FU的樣品(例如，從經受5-FU或5-FU前體藥物治療的患者中取得)；在樣品中添加ニ氫嘧啶脫氫酶滅活劑以組成混合物；然后將混合物送往實驗室進行混合物中5-FU檢驗。值得注意的是，雖然本專利技術的實施方案本著從5-FU治療患者獲得的患者樣品進行詳細地說明，但本專利技術也可涵蓋從5-FU前體藥物治療的患者獲得的患者樣品。這樣的前體藥物(例如，喃氟啶，去氧氟尿苷和卡培他濱)在患者體內被激活并且轉化成5-FU。本專利技術用到的包含5-FU的患者樣品可以來自任何接受5-FU治療并需要測量5_FU水平的患者。也可來自接受一種或多種5-FU前體藥物如喃氟唳(tegafur),去氧氟尿苷和卡培他濱的患者。舉例來說，5-FU通常用于癌癥患者的化療包括患有乳腺癌、肺癌、結腸直腸癌、胰腺癌或者頭頸癌的患者。5-FU也可用于對青光眼患者的眼科手術中作為一種抗瘢痕藥物用在小梁切除位點。另外，5-FU可作為一種面霜局部使用以治療鮑溫病、日光性角化癥和皮膚基底細胞癌。本專利技術的方法對癌癥患者樣品中的5-FU檢驗尤其優越，患者可以是經受包含5-FU的治療方案的癌癥患者。舉例來說，5-FU通常是與葉酸或亞葉酸一同給予。在轉移性直腸癌中，5-FU常常用在諸如FOLFOX(5-FU加上奧沙利鉬和亞葉酸)和FOLFIRI (5-FU加上伊立替康和亞葉酸)等聯合用藥方案中。新藥如貝伐單抗、帕尼單抗和西妥昔單抗也可加入這些用藥方案中。本專利技術適用于所有這些療法和治療方案中，對獲取于這些療法治療的患者樣品進行5-FU檢驗,并且優化給予個體患者的5-F本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2009.07.17 US 61/226,589;2010.04.14 US 61/324,2411.一種檢測樣本中5-氟尿嘧啶的方法，樣本來自服用5-FU或其前體藥物的患者，該方法包括從所述患者身上獲取樣本，在體外將樣本混入一種或多種ニ氫嘧啶脫氫酶的抑制劑；測定該樣本中5-氟尿嘧啶的含量。2.ー種檢測來自服用5-FU或其前體藥物的患者的樣本中5-氟尿嘧啶的方法，該方法包括測量從所述服用5-FU或其前體藥物的患者身上獲取的樣本中5-氟尿嘧啶，該樣本從所述患者上獲取之后，在體外與ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合。3.ー種使用5-氟尿嘧啶或其前體藥物治療患者的方法，包括使患者攝入第一劑5-氟尿嘧啶或其前體藥物；測定該攝入了 5-氟尿嘧啶或其前體藥物的患者的樣本中的5-氟尿嘧啶含量，該樣本在體外與ー種ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合；判定這步完成后，使 該患者服用第二劑5-氟尿嘧啶或其前體藥物。4.權利要求1-3任何ー種方法，其中所述測定或測量步驟包括將所述樣本與ー種與5-氟尿嘧啶發生免疫反應的抗體接觸。5.權利要求1-4中任何ー種方法，其中所述樣本在從所述患者中分離之后10小時內沒有被冷凍。6.權利要求1-5中任何ー種方法，其中所述樣本是血液、血漿、血清或尿液。7.權利要求1-6中任何ー種方法，其中所述樣本是血液。8.權利要求1-7中任何ー種方法，其中所述抑制劑是嘧啶衍生物或吡啶衍生物。9.權利要求8中的方法，其中所述抑制劑是恩尿嘧啶或吉美拉西。10.權利要求1-9中任何ー種方法，其中5-氟尿嘧啶是在所述抑制劑存在的情況下測量。11.ー種處理從接受了包括5-氟尿嘧啶或其前體藥物的治療方案的患者取得的血樣用于5-氟尿嘧啶檢驗分析的方法，所述方法包括從所述患者中獲得含有5-氟尿嘧啶的血樣；從所述血樣中分離血漿；將分離到的血漿與ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合形成混合物；以及將所述混合物送入實驗室進行5-氟尿嘧啶檢測分析。12.ー種處理從接受了包括5-氟尿嘧啶或其前體藥物的治療方案的患者取得的血樣用于5-氟尿嘧啶檢驗分析的方法，所述方法包括從所述患者中獲得包含5-氟尿嘧啶的血樣；將血樣與ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合形成混合物；從所述混合物中分離包含5-氟尿嘧啶和所述抑制劑的血漿；及將所述血漿送入實驗室進行5-氟尿嘧啶檢測分析。13.—種處理從接受了包括5-氟尿嘧啶或其前體藥物的治療方案的患者取得的血樣用于5-氟尿嘧啶檢驗分析的方法，所述方法包括從所述患者中獲得包含5-氟尿嘧啶的血樣；將血樣與ニ氫嘧啶脫氫酶抑制劑混合形成混合物；及將所述混合物送入實驗室進行5-氟尿嘧啶檢測分析。14.權利要求11-13中任何ー種方法，其中所述樣本在從所述患者中分離之后10小時內沒有被冷凍。15.權利要求11-14中任何ー種方法，其中所述抑制劑是ー種嘧啶衍...

【專利技術屬性】
技術研發人員：S·J·薩拉莫內，B·洛，C·科爾文，M·奧弗菲爾德，H·麥克勞德，
申請(專利權)人：美瑞德生物工程公司，
類型：發明
國別省市：