本發(fā)明專利技術屬于魚的育種技術領域，涉及分子標記技術領域。本發(fā)明專利技術具體涉及一種用于檢測與馴食人工飼料鱖魚相關基因多態(tài)性的SNP分子標記，其特征在于，所述的分子標記是下列基因片段所對應的核苷酸序列：(1)神經(jīng)肽Y基因的SNP分子標記，其核苷酸序列如序列表SEQ?IDNO：1所示；(2)胃蛋白酶基因的SNP分子標記，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：2所示；(3)脂蛋白酯酶基因的SNP分子標記，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：3所示。本發(fā)明專利技術為鱖魚馴食人工飼料鱖魚相關基因多態(tài)性的SNP分子標記，可用于鱖魚的標記輔助選擇。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于魚類分子標記制備
，具體涉及ー種與易馴食人工飼料鱖魚相關基因的SNP分子標記的制備，所述的分子標記可應用于鱖魚育種基因型的輔助選擇。
技術介紹
鱖又稱鱖魚(Siniperca chuatsi)是淡水名貴魚類,隸屬于S盧形目S盧亞目，俗稱桂花魚、胖鱖、季花魚等。翹嘴鱖由于其具有生長速度快等特性，已成為中國鱖養(yǎng)殖中的主養(yǎng)品種，但這種魚食性奇特，終生以活魚蝦為食，通常情況下絕對拒食死餌或配合飼料，這種 現(xiàn)象在魚類中十分罕見[1]。鱖商品化養(yǎng)殖歷來以投喂活餌進行，鱖魚苗出膜即以其它種魚苗為食，因此自然條件下苗種成活率低，生產(chǎn)過程中，苗種培育及其活餌料供應成了其養(yǎng)殖生產(chǎn)迅速大規(guī)模發(fā)展的兩大制約因素。能否使鱖通過人工馴化，轉為攝食非活餌，已成為鱖魚養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的關鍵。近年來，我國的鱖魚人工飼料研究取得了突破性進展，吳遵霖等[2]在Im3網(wǎng)箱中用配合飼料馴飼鱖魚幼魚獲得成功，共馴化幼鱖4642尾，存活率達89. 6%，飼料系數(shù)I. 68-1. 78。梁旭方等[3_4]在幼鱖食性馴化取得成功的基礎上，又在水庫網(wǎng)箱中開展了鮮魚、魚塊和配合飼料馴飼鱖魚2齡魚種(體長17-21cm)的試驗，試驗亦獲得成功，馴化率分別達到100%、100%和88. 4%，飼料系數(shù)分別為I. 6、I. 4和2. 7，共馴化出鱖魚2齡魚種4047尾。配合飼料馴飼成功，只是提供整個養(yǎng)殖過程ー個良好的基礎和開端。在長期的養(yǎng)殖過程中，我們發(fā)現(xiàn)通過馴養(yǎng)，能逐步誘導部分鱖開始以非活餌為食，即為易馴化鱖；而另一部分鱖則至死都只以新鮮活餌為食，即不易馴化鱖。在魚類中，NPY有促進食欲作用與機體的能量平衡狀況有關[5]。魚類通過外周和下丘腦的攝食調控因子來調控NPY的分泌；當能量處于正平衡時，瘦素和胰島素分泌増加，使NPY的分泌受到抑制；當能量處于負平衡時，糖皮質激素、刺鼠相關肽(AGRP)、Ghrelin和orexin的分泌増加，它們能啟動NPY神經(jīng)元使NPY分泌増加，從而起促攝食作用。此外，食欲促進作用與相關特異性受體有夫。禁食24_48h的金魚下丘腦有大量的NPYmRNA表達；而禁食72h后的金魚大腦的端腦的前視區(qū)(telencephalonpre-optic)及丘腦頂蓋區(qū)域(optic tectum-thalamus regions)亦可找到NPY mRNA表達[6づ]。金魚腦室注射(i. c. V) NPY可増加金魚的攝食量M。同時，將哺乳動物Yl或Y5受體拮抗劑注射入金魚腦室，可抑制NPY誘導的攝食活動[9_1CI]。Narnaware [11]等在金魚腦室注射NPY Yl([31Leu，34Pro]NPY)、Y2 (NPY2-36)、及 Y5 ([D_32Trp]NPY)等受體激動劑 2h 后，Yl 及 Y5 可促進金魚的攝食活動，而Y2受體對金魚的攝食活動沒有影響。說明金魚與哺乳動物相似，推測在NPY所有受體中，Yl及Y5被認為是其中樞神經(jīng)系統(tǒng)介導食欲調控過程中重要的受體[12_13]。但Aldegunde對虹鱒腦室注射Yl受體激動劑(Leu31，Pro34) -NPY (4 u g)、Y2受體激動劑NPY (3-36) (4ii g)及 Y5 受體激動劑(cPPト7，NPY19-23，Ala31, Aib32, Gln34) -hPP (4 u g)后發(fā)現(xiàn)，注射Yl受體激動劑的虹鱒增加短期(2h)攝食行為；注射Y2受體激動劑的虹鱒的攝食行為明顯増加；但注射Y5受體激動劑的虹鱒完全不受影響。推測在虹鱒中攝食是由Yl及Y2樣受體、而非Y5樣受體介導。這可能是虹鱒的Yl樣及Y2樣受體在食欲調節(jié)上有協(xié)作關系，而在金魚中這兩者是獨立作用的。魚類的攝食行為受到了食欲促進因子包括了 NPY、食欲肽苯基ニ氫咪唑啉(orexin/hypocretin,包括 orexinA 及 orexinB)、甘丙月太(galanin, GAL)及 3 -END 的影響，它們都具食欲促進作用。此外，在下丘腦還有食欲抑制因子包括胰酶分泌素、韓娃皮素(bombesin, BBS)、促腎上腺皮質激素釋放因子(Corticotropin-releasingfactor family ofpeptides, CRF)、可卡因-安非他明調節(jié)轉錄妝(Cocaine-andamphetamine-regulatedtranscript, CART)、速激肽(tachykinins)、瘦素及血清素(serotonin)有調節(jié)魚類食欲減退的作用[5’7’14’15]。NPY作為ー個最強的誘導因子，與這些促進及抑制因子相互作用而對魚類的攝食進行調節(jié)。胃蛋白酶(pepsinogen PEP)是ー種酸性胃消化蛋白水解酶，其前體胃蛋白酶原在成年脊椎動物胃黏膜中合成，由胃主細胞分泌，在胃液的酸性條件下轉換成胃蛋白酶。PEP在酸性條件下水解蛋白質[16]。這類酸性蛋白酶用作動物飼料添加劑[17_18]，可促進魚類對營養(yǎng)物質的消化吸收，能夠提高飼料利用率，進而促進魚類生長，魚類胃蛋白酶與食性關系ー直是研究的熱點，胃蛋白酶活性與食物適應性關系已有不少報道[19_22]。脂類的貯存和代謝對動物體維持正常的生命活動具有重大意義。與陸生動物相比，魚類對碳水化合物特別是多糖的利用效率較低，脂類作為其能源物質就顯得更加重要。脂類是魚類必須的營養(yǎng)元素之一，尤其是肉食性魚類所需能量的主要來源[23]。直接來自飼料或體內(nèi)代謝產(chǎn)生的游離脂肪酸(Free fatty acids，F(xiàn)FA)、甘油三酯是魚類維持生長和生產(chǎn)的重要能源。脂酶是ー種水溶性的酶，對食物中脂肪的吸收、平衡能量和血漿脂蛋白的代謝起著重要的作用[24_25]，其中，脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase LPL)是脂蛋白代謝的關鍵酶之一，與機體的脂質代謝及肥胖與否密切相關_，LPL生理功能是催化乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)核心的甘油三酯(TG)分解為甘油和脂肪酸，以供組織氧化供能和貯存；LPL還參與VLDL和高密度脂蛋白(HDL)之間的載脂蛋白和磷脂的轉換[27]。而在牛、羊、豬、鼠等哺乳動物中，LPL基因均已被克隆和定位，對豬LPL基因的研究已有關于其多態(tài)性及與經(jīng)濟性狀相關性研究的報道，如Harbitz等[28]對豬LPL基因多態(tài)性進行了研究，但未確定不同基因型與生產(chǎn)性狀的關系。張依裕等[29]利用PCR-SSCP技術對鑒定鴨LPL基因內(nèi)含子5多態(tài)性進行分析，結果在5發(fā)現(xiàn)4個SNP多態(tài)性，認為AB基因型是體尺性狀的有利基因型。隨著分子生物學的發(fā)展，來自分子水平的信息，尤其是海量的DNA序列數(shù)據(jù)為人們進ー步認識和解釋生命的多祥性提供了前所未有的機會。因此，研究與遺傳表型相關的DNA序列變異就成了遺傳學研究的主要內(nèi)容之一。一般來說，在同一物種的不同個體中，等位基因基本上具有相同的喊基序列。但實際上喊基序列在等位基因間常表現(xiàn)出或多或少的差異，這種差異稱為基因多態(tài)性。根據(jù)堿基序列改變的多少及堿基改變對相關檢測方法的影響，基因多態(tài)性分為多種類型。其中，最常見的是在基因組水平上有單個堿基變異所造成的DNA序列多態(tài)性,稱為單核苷酸多態(tài)性(single mucleotide polymorphism, SNP)。SNPs本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.用于檢測與馴食人工飼料鱖魚相關基因多態(tài)性的SNP分子標記，其特征在于，所述的分子標記是下列基因片段所對應的核苷酸序列 (1)神經(jīng)肽Y基因的SNP分子標記，其核苷酸序列如序列表SEQID NO :I所示； (2)胃蛋白酶基因的...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：梁旭方，何珊，楊宇暉，方榮，曹亮，杜嵇華，何焱，符云，葉衛(wèi)，
申請(專利權)人：華中農(nóng)業(yè)大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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