一種快速檢測三聚氰胺的測試卡制造技術

本發明專利技術公開一種快速檢測三聚氰胺的測試卡，所述的快速檢測三聚聚氰胺的測試卡包括親水性的顯色反應區域和憎水性的非檢測區域，所述的測試卡的基體材料為纖維素濾紙，纖維素濾紙上的顯色反應區域涂覆有親水性聚合物和含有寡核苷酸的納米金作為顯色反應材料，纖維素濾紙上的非檢測區域涂覆有憎水性的聚苯乙烯；本發明專利技術適用于液態奶、固態奶、飼料等食品中三聚氰胺的快速檢測。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種快速檢測三聚氰胺的測試卡。
技術介紹
由于食品和飼料工業蛋白質含量檢測方法的缺陷，三聚氰胺被不法商人摻雜進食品或飼料中，以提升食品或飼料檢測中的蛋白質含量指標，因此三聚氰胺也被作假的人稱為“蛋白精”。2007年，美國爆發寵物食品受污染事件。事后調查表明摻雜了< 6. 6%三聚氰胺的小麥蛋白粉是寵物食品導致中毒的原因。2008年9月，中國爆發三鹿嬰幼兒奶粉受污染事件，導致食用了受污染奶粉的嬰幼兒產生腎結石病癥，其原因也是奶粉中含有三聚氰胺。三聚氰胺進入人體后，發生取代反應(水解)，生成三聚氰酸，三聚氰酸和三聚氰胺形成大的網狀結構，造成結石。目前用于三聚氰胺檢測的國家標準(標準號GB/T22388-2008)采用高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜/質譜法(LC-MS/MS)、氣相色譜-質譜聯用法GC-MS)，這·些方法雖然具有較高的靈敏度以及較低的檢測限，但是需要進行復雜的樣品前處理，需要專業的檢測人員，檢測時間較長，儀器價格昂貴，檢測成本高，不適合用于牛奶中三聚氰胺的現場快速篩查。在目前已經公布的三聚氰胺快速檢測相關專利中，拉曼光譜的方法(專利號:200910078299. I 以及 200910078300. O)、電化學的方法(專利號:200810234859. 3 以及200910029572. I)都需憑借專業的儀器在專業技術人員的操作下才能完成對三聚氰胺的檢測。而用于三聚氰胺快速測定的相關儀器(ZL 200820213241. 4)、試劑盒(專利號200810202732. 3)、試紙(專利號200810197094. 0)等因其構造復雜，制作過程繁瑣，在實際應用中也受到很大的限制。納米金的顏色與納米金顆粒的聚集狀態相關。納米金的聚集狀態不同時，其表面等離子共振吸收也不同，溶液的顏色表現出由紅色到藍色的變化。近年來有文獻(J. Am.Chem. Soc. , 2009，131 (27)，9496 - 9497 !Analyst, 2011，136，179-183 !Analyst,2011，136，1644-1648 ；Analyst, 2011, 136，4192 - 4196)報道利用修飾的納米金或未修飾的納米金與三聚氰胺發生作用，引起溶液中納米金顆粒的聚集程度不同而使溶液產生顏色變化從而檢測三聚氰胺。但是，這種顯色反應與溶液的混合過程密切相關，因此檢測結果與操作者的操作過程有關，因而檢測結果不穩定、重現性和再現性差，不同的操作者檢測結果差別很大。此外，基于抗原抗體免疫反應的免疫學檢測技術制備的酶聯免疫試劑盒或試紙條(如專利號:200910242090. 4,200910060513. 0,201110157278. 6,201110132592. 9等)則由于抗體制備困難、穩定性不好、對技術人員的操作要求比較高，還不能完全滿足食品中三聚氰胺快速低成本檢測的要求。因此，建立檢驗成本低、操作簡便、不需大型專業儀器的現場快速檢測三聚氰胺的技術具有重要的應用前景和推廣價值。
技術實現思路
本專利技術的目的就是要克服現有技術的不足，提供一種快速檢測三聚氰胺的測試卡。本專利技術的目的是這樣實現的本專利技術的快速檢測三聚氰胺的測試卡，包括親水性的顯色反應區域和憎水性的非檢測區域，所述的測試卡的基體材料為纖維素濾紙，纖維素濾紙上的顯色反應區域涂覆有親水性聚合物和含有寡核苷酸的納米金作為顯色反應材料，纖維素濾紙上的非檢測區域涂覆有憎水性的聚苯乙烯。與現有技術比較本專利技術的優點本專利技術利用三聚氰胺與寡核苷酸上胸腺嘧啶堿基之間的反應引起納米金顆粒發生聚集產生顏色變化，根據顯色反應區域的顏色變化程度來判斷樣品中三聚氰胺的含量；本專利技術的測試卡具有制備成本低、制備方法簡單、攜帶和保存 方便、檢測方法快速簡便，檢測人員無須專門培訓，無須任何檢測儀器，僅憑肉眼即可判斷檢測結果，適合于現場快速篩查；該測試卡可應用于固態奶粉、液態奶、飼料中三聚氰胺的現場快速低成本檢測。具體實施例方式以下結合具體實施實例，對本專利技術進一步說明。(但不是對本專利技術的限制)。本專利技術的快速檢測三聚氰胺的測試卡，包括親水性的顯色反應區域和憎水性的非檢測區域組成，纖維素濾紙上的顯色反應區域涂覆有親水性聚合物和涂覆有寡核苷酸修飾的納米金作為顯色反應材料，利用三聚氰胺與寡核苷酸上胸腺嘧啶堿基之間的反應引起納米金顆粒發生聚集產生顏色變化，根據顯色反應區域的顏色變化程度來判斷樣品中三聚氰胺的含量，所述的測試卡的基體材料為纖維素濾紙，所述的憎水性區域涂覆有聚苯乙烯。所述的親水性聚合物可以是聚乙二醇或聚乙烯醇。所述的寡核苷酸為含有胸腺嘧啶堿基的寡核苷酸或巰基修飾的含有胸腺嘧啶堿基的寡核苷酸。所述的胸腺嘧啶堿基數為廣200。所述的納米金合成用來制備納米金的玻璃容器經過王水浸泡之后首先用自來水沖洗干凈，再用超純水徹底清洗；將氯金酸溶液加熱至沸，然后迅速加入檸檬酸三鈉溶液，此時溶液的顏色由淺黃色最終變為酒紅色，加熱回流反應5 60 min之后，停止加熱，攪拌下自然冷卻至室溫，冷卻后的金溶膠置于冰箱冷藏；所述的納米金顆粒的粒徑為10 40nmo本專利技術所述的測試卡由纖維素濾紙制備而成，纖維素濾紙上的顯色反應區域涂覆有親水性聚合物和含有胸腺嘧啶堿基的寡核苷酸修飾的納米金，纖維素濾紙上的非檢測區域涂覆有憎水性的聚苯乙烯。纖維素濾紙上的非檢測區域涂覆有憎水性的聚苯乙烯，可以將固定體積的樣品水溶液限制在顯色反應區域內。纖維素濾紙上的顯色反應區域涂覆有親水性的聚乙烯醇或聚乙二醇，能保留納米金顆粒上修飾的胸腺喃唳堿基對三聚氰胺的反應活性以及增加納米金顆粒在纖維素濾紙上的擴散性能。顯色反應區域上涂覆有含有胸腺嘧啶堿基的寡核苷酸的納米金作為顯色反應材料，當含有三聚氰胺的樣品溶液滴加到檢測卡的顯色反應區域，三聚氰胺與納米金修飾的胸腺嘧啶堿基發生反應引起納米金顆粒發生聚集產生顏色變化，根據顯色反應區域的顏色變化程度來判斷樣品中三聚氰胺的含量。隨著三聚氰胺濃度的增加，顯色反應區域的顏色由紅色向紫紅色、藍灰色、藍色、黑色變化。實施例I本專利技術所述的測試卡的制備先將纖維素濾紙裁剪成長條狀(如4 cm (長)X0.8 cm(寬))，放入含有聚苯乙烯(如1%)的甲苯溶液中浸泡(如2小時)，取出纖維素濾紙，在室溫下干燥；接著在聚苯乙烯修飾的纖維素濾紙(憎水性)上作圓圈(如直徑0. 5 cm)標記，將甲苯滴加到作標記的圓圈中部，腐蝕聚苯乙烯而恢復纖維素濾紙的親水性。滴加聚乙二醇(如1%，分子量約2000)或聚乙烯醇(如1%，分子量約130000)溶液到纖維素濾紙的親水性區域(即作標記的圓圈)，然后將纖維素濾紙于烘箱中干燥(如60°C)。滴加修飾有寡核苷酸的納米金溶液(如20i!L)于纖維素濾紙的親水性區域(即作標記的圓圈)，低溫真空干燥后作為檢測三聚氰胺的測試卡。測試卡低溫保存。含有納米金的紅色區域為檢測三聚氰胺的顯色反應區。配置濃度為0、0. 5、1、2、5、10 ppm的三聚氰胺標準溶液，滴加Tris-HCl緩沖溶液(如10 UL 50 mM,pH 8.0,NaCl 0.2 mol/L)到三聚氰胺測試卡的顯色反應區將紅色納米金潤濕后，分別滴加上述標準溶液(如=IOyL)到測試卡的顯色本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭小嚴，郭良洽，林欽，黃紅霞，林松，付鳳富，吳燕萍，郭清全，
申請(專利權)人：福建省產品質量檢驗研究院，福州大學，
類型：發明
國別省市：