本發明專利技術公開了一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒及其制備方法和應用。該試劑盒的組成包括：稀釋液、幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑和空白液，還可包括校準品和質控品。所述的幽門螺桿菌抗原為幽門螺桿菌抗原，可為幽門螺桿菌全菌體蛋白抗原、幽門螺桿菌尿素酶抗原、幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白A抗原或幽門螺桿菌細胞空泡毒素A抗原中的一種或多種，所述膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的兩種不同粒徑膠乳顆粒的混合物，制備所述校準品、質控品所需的幽門螺桿菌抗體源自感染幽門螺桿菌患者血清中IgM和/或IgG。本發明專利技術適用于各類型全自動生化分析儀和半自動生化分析儀，具有檢測快速、敏感度高、特異性強和準確性好等優點。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種檢測試劑盒，特別涉及一種用于檢測人體血清中幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑盒及其制備方法。本專利技術屬于生物檢測
技術介紹
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,簡稱HP)是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌，呈革蘭染色陰性，在胃粘膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性胃潰殤以及胃動膜相關淋巴組織 (MALT)淋巴瘤的主要致病因素，并且與胃癌的發生密切相關.1994年世界衛生組織/國際癌癥研究機構(WH0/IARC)將幽門螺桿菌定為I類致癌原。慢性胃炎患者的胃粘膜活檢標本中幽門螺桿菌檢出率可達80% 90%.而消化性胃潰殤患者更高，可達95%以上，甚至接近100%。胃癌由于局部上皮細胞己發生異化，因此其檢出率高低報道不一。幽門螺桿菌的感染己是個世界性問題，對其進行準確診斷有利于控制HP傳播與流行及根除HP感染治療的監測。目前，國內外已建立的HP檢測方法從檢測手段上分為侵入性和非侵入性兩大類。一、侵入性檢測方法這類方法的特點是使用內窺鏡取得胃活檢組織后進行檢測，試驗方法主要有快速尿酶試驗法、病理學檢測法及細菌培養法。I、快速尿酶檢測法依據HP具有豐富的尿素酶可分解尿素產生氨氣，由pH指示劑顯色。該法簡便、迅速、靈敏，但也有可能因含尿素酶的其他細菌存在而產生假陽性。此夕卜，近期使用過降低胃部細菌量或直接抑制尿素酶活性的藥物的樣品可產生假陰性。2、病理學檢測法通過對胃粘膜組織進行切片染色檢查，可直接顯示HP菌體而證實，其中銀染法檢測率高，但不同病理學家觀察的差異性對于胃萎縮樣品的診斷具有一定的困難性。3、細菌培養法取胃粘膜活組織作HP培養，因培養細菌較少、操作過程較復雜、時間周期較氏、費用昂貴而不適宜普遍應用。二、非侵入性檢測方法此類方法特點是不需要使用內窺鏡采取胃活檢組織，從而避免病人因反復做胃窺鏡而帶來的侵害痛苦或發生其它類型的感染。試驗方法主要有尿素呼吸試驗、PCR檢測法和免疫血清學法。I、尿素呼吸試驗由于HP富含尿素酶,用13C或14C標記的尿素由受試者服用后，根據氣體核素質譜儀檢測到分解產生的帶同位素標記的二氧化碳標本來判斷HP感染程度。該法靈敏度高，可定量，但有一定的放射性危險，并且受設備限制難于普遍推廣。2、PCR檢測法主要檢測胃液、粘膜中HP尿素酶(UReA)基因和毒素相關蛋白A (CagA)基因，但操作復雜，易污染，對檢驗人員的專業知識及操作技術的要求較高，且大大增加患者的經濟開支，因此在臨床上的應用也較為有限。3、免疫血清學法目前已有方法包括酶聯免疫法、免疫印跡法和膠體金法,為HP的流行病學調查提供了有利便捷手段，但檢測速度慢，除酶聯免疫法可使用全自動酶免分析儀(且需2 3小時、步驟多)外，其余都需手工操作，患者獲得檢測結果為定性分析，不適于治療監控及療效評估。目前，雖然檢測幽門螺旋桿菌感染的方法繁多，但還沒有一種合適的生化分析儀，能夠簡便、快速、大批量且定量的進行檢測。如能建立該種方法，則能使檢測過程大為簡便化，操作人員只需設置好上機參數，將試劑和樣本置于相應位置后，生化分析儀即可全自動 完成檢測，并能夠迅速得到結果，易于在各級醫療機構推廣應用，對于幽門螺旋桿菌的防治具有重大的臨床意義和普及價值。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有方法及技術的缺陷，提供一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑盒及其制備方法以及使用該試劑進行臨床樣本檢測的方法。該試劑適用于各類型生化分析儀，具有樣本無需稀釋、操作簡單、快速、定量準確、重復性好、穩定性好、敏感度高、特異性強的特點。為實現本專利技術的目的，采用了如下的技術方案本專利技術的一種用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于包括稀釋液、幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑及空白液；其中，所述的幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的兩種不同粒徑的膠乳顆粒的混合物，所述的膠乳顆粒為聚苯乙烯微球。在本專利技術中，優選的，所述的稀釋液為含有表面活性劑及反應增強劑的緩沖液，所述的緩沖液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優選為磷酸鹽緩沖液；所述的反應增強劑為PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一種或幾種，優選為PEG6000 ;更優選的所述的稀釋液中還含有2mol/L的氯化鈉。其中，無機鹽氯化鈉可以調節離子強度，反應增強劑可以加快抗原抗體的免疫反應速度，縮短檢測時間，表面活性劑(Tween 20)可以去除非特異性的結合反應。在本專利技術中，優選的，所述的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的粒徑為60 -90nm和粒徑為160 — 200nm的膠乳顆粒的混合物。優選的，所述的膠乳顆粒為聚苯乙烯納米微球，這種組合既能夠提高反應的靈敏度，而且也能夠提高試劑的檢測范圍。在本專利技術中，優選的，所述的膠乳試劑可以按照以下方法制備得到( I)膠乳前處理取Iml未標記的膠乳顆粒加入IOml 0. 02M pH7. 4磷酸緩沖液中，離心機IOOOOrpm離心20min,去掉上清液、再用IOml 0. 02M pH7. 4磷酸緩沖液重懸顆粒,離心機IOOOOrpm離心20min，去掉上清并用5ml 0. 02M pH7. 4磷酸緩沖液重懸、4°C保存待用；(2)膠乳顆粒標記將步驟(I)處理后膠乳用0. 02M pH6. IMES緩沖液將膠乳顆粒稀釋成10mg/ml濃度，然后加入Img EDC,混勻活化15分鐘，離心8000rpm棄去上清，并用0. 02MPH7. 4磷酸緩沖液重懸，加入Img幽門螺桿菌抗原于10mg/ml 2ml膠乳液體中，室溫混勻2 — 4小時,離心機SOOOrpm離心15分鐘，將上清分離到另外的容器中備用，顆粒使用封閉液重懸，并室溫混勻I小時，離心機SOOOrpm離心15min，沉淀復溶于分散液，將標記完成的膠乳顆粒分裝成Iml/支，4°C保存；(3)使用上述步驟分別對粒徑60 - 90nm和160 — 200nm的膠乳進行分別標記，標記結束后將所述60-90nm膠乳和所述160-200nm膠乳進行混合，按質量體積百分比計，使60 — 90nm 膠乳的濃度為 0. 673-0. 732%，使 160 — 200nm 膠乳的濃度為 0. 135-0. 323%,混合后進行保存，優選的使用上述流程分別對粒徑70 - 90nm和160 — ISOnm的膠乳進 行分別標記，標記結束后將所述70 - 90nm膠乳和所述160 — ISOnm膠乳進行混合，按質量體積百分比計，使70 - 90nm膠乳濃度為0. 708-0. 732%，使160 — 180nm膠乳濃度為0. 135-0. 235%，混合后進行保存；所述的封閉液為含有5g/L BSA的0. 02M PH7. 4的磷酸緩沖液；所述的分散液由BSA，吐溫-20、PVP-K30以及生物防腐劑通過0. 02M PH7. 4的磷酸緩沖液配制而成，其中BSA濃度為lg/L，吐溫-20濃度為0. 05% (v/v), PVP-K30濃度為2g/L，生物防腐劑濃度為0. 05% (v/v)。在本專利技術中，優選的，所述本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：金鑫，
申請(專利權)人：北京美康生物技術研究中心，
類型：發明
國別省市：
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