在此披露了具有磷酸酶和張力蛋白同系物（PTEN）抑制活性的分離的多肽，用于表達(dá)它們的載體和細(xì)胞以及它們用于治療細(xì)胞毒性應(yīng)激相關(guān)疾病的方法，例如脊髓損傷、中風(fēng)、創(chuàng)傷性腦損傷、多發(fā)性硬化癥、阿耳茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化（ALS）、帕金森病、以及亨廷頓病。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及用于治療與細(xì)胞毒性或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)的不同適應(yīng)癥的治療法，它 們的用途以及方法。具體地是肽類以及它們的組合物，它們具有在其中使用的磷酸酶和張 力蛋白同系物(PTEN)抑制活性以及用于治療與細(xì)胞毒性或刺激毒性應(yīng)激相關(guān)適應(yīng)癥的方 法。
技術(shù)介紹
磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)是據(jù)報(bào)道涉及多種癌類型進(jìn)展的一種腫瘤抑制 因子(Li 等人 1997 ;Steck 等人 1997 ；Baker 2007)。PTEN 是磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/ AKT途徑的一種負(fù)調(diào)節(jié)物-失去PTEN導(dǎo)致PI3K/AKT信號級聯(lián)的活化并且導(dǎo)致增加的細(xì)胞 生長和增殖。PTEN還顯示具有與PI3K/AKT信號傳導(dǎo)不相關(guān)的其他功能-例如，在通過與著 絲粒物理地相互作用維持染色體穩(wěn)定性以及控制DNA修復(fù)方面(Shen等人2007)。PTEN已 經(jīng)隱含在多種非癌適應(yīng)癥中，例如中風(fēng)，其中用siRNA下調(diào)PTEN已經(jīng)顯示在轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元 中具有抗局部缺血神經(jīng)元損傷的神經(jīng)保護(hù)作用(Ning等人2004)。PTEN的定位和降解已經(jīng)顯示涉及翻譯后修飾，特別是泛素化作用(Trotman等人 2007 ；ffang等人2007 ；ffang等人2008)。PTEN主要定位到細(xì)胞質(zhì)中，但是已知一種獨(dú)特集 合的PTEN定位到細(xì)胞核中(綜述見(Lian和Di Cristofano 2005))。當(dāng)PTEN不包含典型 的細(xì)胞核定位信號時(shí)，它的確包含兩個(gè)PEST結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域通常發(fā)現(xiàn)于靶向用于通過 泛素化作用降解的蛋白中。實(shí)際上，多泛素化作用已經(jīng)顯示主要靶向PTEN用于細(xì)胞降解 (Wang等人2007)，而單泛素化作用主要涉及PTEN核轉(zhuǎn)位(Trotman等人2007)。PTEN蛋白 序列中兩個(gè)特異性泛素化位點(diǎn)(K13和K289)已經(jīng)顯示直接涉及PTEN核轉(zhuǎn)位-這些位點(diǎn)之 一的單泛素化作用顯示足以用于核轉(zhuǎn)位。這兩個(gè)位點(diǎn)之一的突變顯著地抑制了 PTEN的核 轉(zhuǎn)位(Trotman 等人 2007 )。尚不清楚的是核轉(zhuǎn)位是否發(fā)生在中樞神經(jīng)細(xì)胞中，并且如果發(fā)生的話，用于PTEN 的這種核轉(zhuǎn)位的機(jī)理是否與至今已經(jīng)試驗(yàn)過的其他細(xì)胞中的相同。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)部分地基于這種出人意料的發(fā)現(xiàn)，即在神經(jīng)元細(xì)胞中PTEN的K13泛素化位 點(diǎn)的突變顯著地降低了 PTEN的核轉(zhuǎn)位，而在相同細(xì)胞中PTEN的K289泛素化位點(diǎn)的突變未 顯著地影響PTEN的核轉(zhuǎn)位。此外，出人意料的是被設(shè)計(jì)成干擾PTEN的K13泛素化位點(diǎn)處 泛素化作用的某些新型肽類1)在神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)物中阻斷了 NMDA-誘導(dǎo)的PTEN核轉(zhuǎn)位； 2)在神經(jīng)元培養(yǎng)物中阻斷了 NMDA誘導(dǎo)的刺激毒性神經(jīng)元損傷；3)在大鼠局部缺血模型中 體內(nèi)地阻斷了 PTEN核轉(zhuǎn)位；4)當(dāng)中風(fēng)后給藥時(shí)，在大鼠局部缺血模型中體內(nèi)地減少了中風(fēng) 相關(guān)梗死區(qū)；5)當(dāng)中風(fēng)后給藥時(shí)，在大鼠局部缺血模型中體內(nèi)地改善了中風(fēng)相關(guān)長期運(yùn)動行為恢復(fù)；6)在ALS的轉(zhuǎn)基因動物模型中改善了行為結(jié)果；以及7)在大鼠體內(nèi)局部腦缺血 之后促進(jìn)了腦內(nèi)地移植到梗死區(qū)中的iPS-NPC (干細(xì)胞)的存活；而當(dāng)與設(shè)計(jì)成在PTEN的 K289位點(diǎn)處干擾泛素化作用的肽類比較時(shí)，不顯示這類特性。在本專利技術(shù)的某些方面中，提供了一種分離的多肽組合物，該多肽組合物具有基本 上類似于SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:6的氨基酸組成。其 中基本上類似是指當(dāng)比較等效區(qū)域時(shí)(即約14個(gè)氨基酸)，包括一種序列一致性程度。此 夕卜，基本上類似是指包括保守取代以及修飾的氨基酸，其條件是針對PTEN K-13在此說明的 PTEN抑制活性或其他活性得以維持。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供了包括SEQ ID N0:1的一種分離的多肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個(gè)氨基酸序列的一種多肽，或包括與SEQ ID NO: 1的對應(yīng) 氨基酸具有至少90% —致性的8-14個(gè)氨基酸序列的一種多肽，其條件是SEQ ID N0:1的位 置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)抑制活性。分離 的多肽可以進(jìn)一步包括結(jié)合到分離的多肽上的一個(gè)遞送和靶向(dat)部分。該dat部分可 以是選自下面的一項(xiàng)或多項(xiàng)配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。該dat 部分可以是一種PTD。該分離的多肽可以包括選自SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:5或SEQ ID N0:6的一種氨基酸序列。該dat部分可以是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素易位結(jié)構(gòu) 域、炭疽毒素易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv_l vp22、pep_l、 tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、聚-1-賴氨酸、以及聚-d-賴氨酸。該多肽可以包括SEQ ID N0:2。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供了包括SEQ ID N0:1的一種分離的多肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個(gè)氨基酸序列的一種多肽，或包括與SEQ ID NO: 1的對應(yīng) 氨基酸具有至少90% —致性的8-14個(gè)氨基酸序列的一種多肽，其條件是SEQ ID N0:1的位 置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)胞毒性應(yīng)激或刺激毒性應(yīng)激。分離的多 肽可以進(jìn)一步包括結(jié)合到分離的多肽上的一個(gè)遞送和靶向(dat)部分。該dat部分可以是 選自下面的一項(xiàng)或多項(xiàng)配體類、受體類、蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域類(PTD)、或抗體類。該dat部分 可以是一種PTD。該分離的多肽可以包括選自SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:6 的一種氨基酸序列。該dat部分可以是選自觸角足同源結(jié)構(gòu)域、白喉毒素易位結(jié)構(gòu)域、炭 疽毒素易位結(jié)構(gòu)域、假單胞菌外毒素a易位結(jié)構(gòu)域、皮抑菌肽s4、hsv_l vp22、pep_l、tat蛋 白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、聚-1-賴氨酸、以及聚-d-賴氨酸。該多肽可以包括SEQ ID NO: 2。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種分離的多核苷酸，該多核苷酸包括對在此所述 多肽進(jìn)行編碼的一種核苷酸序列。該多核苷酸可以編碼包括SEQ ID NO: 1的一種分離的多 肽或包括與SEQ ID NO: 1具有至少90% —致性的8-14個(gè)氨基酸序列的一種多肽，或包括 與SEQ ID NO: 1的對應(yīng)氨基酸具有至少90% —致性的8-14個(gè)氨基酸序列的一種多肽，其條 件是SEQ ID NO: 1的位置8是賴氨酸(K)，并且其中該多肽具有磷酸酶和張力蛋白同系物 (PTEN)抑制活性。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種組合物，該組合物包括在此所述的一種多肽和 一種載體。該多肽可以包括選自下面一項(xiàng)或多項(xiàng)的一種多肽SEQ ID NO: 1, SEQ ID N0:2、 SEQ ID N0:5、以及SEQ ID N0:6，或與其基本上類似的一種氨基酸組合物。該載體可以是選 自下組一種固相支撐體、一種穩(wěn)定劑、一種防腐劑、以及一種藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了在此所述的一種分離的多肽，該多肽已經(jīng)被重組地生產(chǎn)并且從細(xì)胞中分離。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了包含一種分離多核苷酸的載體，該多核苷酸包括對 在此所述多肽進(jìn)行編碼的一種核苷酸序列。本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王玉田，張舒，昌基茲·塔基比格洛，
申請(專利權(quán))人：不列顛哥倫比亞大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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