本申請至少部分涉及向人或動物患者的脊髓施用小干擾RNA(siRNA)的方法，并且還涉及治療脊髓損傷和其他CNS疾病和疾患的方法。具體地，本申請公開了以有效劑量局部地、直接地和不需要轉導載體地遞送siRNA化合物和制劑到受損傷的脊髓以促進CNS功能恢復和或異常性疼痛減弱的方法。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本申請至少部分涉及向人或動物患者的脊髓施用小干擾RNA(SiRNA)的方法，并且還涉及治療脊髓損傷和神經性疼痛的方法。具體地，本申請公開了預防和治療神經性疼痛和異常性疼痛的方法和治療受損傷的脊髓以促進CNS功能恢復的方法。背景siRNA代表有希望的治療技術，然而在向患者施用siRNA中還存在待克服的障礙。已采用各種技術來將siRNA引入細胞中，包括陽離子脂質介導的轉染、病毒遞送和核轉染。使用陽離子脂質的遞送看來是最簡單的轉染方法，然而其效率通常是低的并限制于特定細胞類型。雖然病毒遞送很好地用于一些困難的細胞、細胞系和用于體內遞送(Garraway等，2007，J Pharmacol Exp Ther. 322 :982-8)，其具有增加的安全顧慮。未修飾的siRNA單鏈或雙鏈體在血清中極不穩定，單鏈的半衰期小于I分鐘，而雙鏈體的半衰期為3. 3到5 分鐘(Sioud,2005. Curr Drug Targets. 6 :647-53 ；Sioud 和 Iversen, 2005. Curr DrugTargets. 6 :647-53)。然而,siRNA的化學修飾已展現出穩定性顯著改善；修飾的siRNA比未修飾的 siRNA 穩定性增加大約 900 倍(Morrissey 等，2005. Nat Biotechnol. 23 :1002-7)。轉讓給本專利技術申請人的PCT專利公布WO 2008/050329和WO 2009/044392公開了某些穩定的和活性的siRNA化合物，所述專利公布通過引用整體并入本文。由于血腦屏障(BBB)，siRNA向中樞神經系統(CNS)的遞送是成問題的，并且最成功的策略是使用鞘內路徑。經由微泵向嚙齒類動物大腦中腦室內輸注高濃度的裸露的siRNA已成功抑制了靶基因表達，然而，在遠離輸注位點的區域，靶基因表達的敲低顯著下降(Thakker 等，2004. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 :17270-5)。使用連接至微型滲透泵的腰椎留置插管，在脊髓中鞘內應用高劑量(400 y g/天)siRNA沉默了 ATP-門控的陽離子通道P2X3，并緩解了慢性神經性疼痛(Dorn等，2004. Nucleic Acids Res. 32 :e49)。其他研究在鞘內遞送后實現了治療作用以顯著較低的劑量在ALS進展的慢性小鼠模型中使用植入的Alzet泵(Wang等，2008. J Biol Chem. 283 :15845-52)以及在急性疼痛模型中采用預治療(Christoph 等，2006. Biochem Biophys Res Commun. 350 :238-43 ;Luo 等，2005.Mol Pain. I 29)。Rohl 和 Kerreck 綜述了疼痛模型中的各種 RNAi 方法(J. Neurochem. 99 371-380)。Inoue 暗示神經性疼痛中 RhoA 的活化(Inoue 等，2004. Nat Med 10(7) :712-8)。對脊髓的挫傷性損傷產生對組織的初級損害，并啟動稱為次級損傷的級聯事件，次級損傷經數天至數周以幾個階段進展(Beattie等,2000. J Neurotrauma. 17 :915-25)。脊髓內的小膠質細胞在損傷后被快速活化。在大鼠中，活化的巨噬細胞在脊髓損傷后3天 開始積累(Schwab等，2004. Glia. 47 :377-86)。在SCI后的前幾天，損傷位點中和周圍存在大量細胞死亡，以及神經元的軸突過程從損傷位點死亡。這些過程伴有復雜的分子變化，包括在神經細胞(D' Alessandri 等，1995. Curr. Eye Res. 14 :911-926 ;Dubreuil 等，2003. J Cell Biol. 162 :233-43 ；Erschbamer 等，2005. J Comp Neurol. 484 :224-33 ；Yune等，2007. J Neurosci. 27 :7751-61)和免疫細胞(Fu 等，2007. J Neurosci. 27 :4154-64 ；Pixley 等，2005J Cell Sci. 118 :1873-83 ;Schwab 等，2004) 二者中 RhoA 的上調和活化，這被認為促成了次級損害以及限制軸突再生和功能恢復。細胞穿透性Rho拮抗劑(如BA-210)，其抑制磷酸化的包括RhoA在內的Rho家族蛋白的活性，顯示在嚙齒類動物中改善脊髓損傷后的恢復(Lord-Fontaine 等，2008. J Neurotrauma. 25 :1309-22)，并正在臨床測試中測試以促進軸突再生和功能恢復(Baptiste等,2009. Expert Opin InvestigDrugs. 18 :663-73)。RhoA蛋白水平上調數倍，在脊髓挫傷后 7天在大鼠脊髓中達到其最高水平，提供了用于SCI后治療干預的窗口(Erschbamer等,2005同上)。然而,發現RhoA的BA-210抑制最多僅至急性治療后4天而不是一周(Lord-Fontaine等，2008)，此時RhoA表達是穩健的(Erschbamer等,2005)。祀向遞送siRNA至CNS的方法和祀細胞中增強的活性將是期望的。疼痛是疾病最常見的癥狀，并且是患者向醫師呈現的最經常的不適。不適當的疼痛管理仍是大的公共健康問題。異常性疼痛/SCI相關的疼痛的目前可用的治療選擇是有·限的，并且因為許多SCI疼痛病癥不易于治療，特別是處于損傷水平(at-level)和損傷水平以下(below-level)神經性疼痛，管理變得主要是針對癥狀的。因此需要用于治療異常性疼痛/SCI相關的疼痛的解決方案。專利技術概述本文提供了治療中樞神經系統疾病、疾患和損傷的方法。本申請公開了在不存在轉導載體(transduction vehicle)、遞送載體(delivery carrier)或遞送系統下向受治療者中的受損或病態脊髓遞送siRNA的方法，并提供了治療中樞神經系統的疾病、疾患和損傷(包括脊髓損傷、神經變性和神經性疼痛)的方法。在一方面，提供了治療患有與靶基因的表達有關的CNS疾病、疾患或損傷的受治療者的方法，包括以有效治療受治療者的量局部地向受治療者的脊髓施用定向至靶基因的雙鏈RNA化合物。在一些實施方案中，實質內施用和/或通過腰椎注射施用雙鏈RNA化合物。在一些實施方案中，實質內施用雙鏈RNA化合物。在優選的實施方案中，通過腰椎注射施用雙鏈RNA化合物。在一些實施方案中，通過在損傷或疾病發作后0至48小時腰椎穿刺向受治療者施用雙鏈RNA。在一些實施方案中，通過在損傷或疾病發作后0至42小時、0至36小時、0至30小時或0至24小時腰椎穿刺向受治療者施用雙鏈RNA。在一些實施方案中，受治療者患有疼痛。在不同的實施方案中，疼痛是神經性疼痛。在特定的實施方案中，提供了治療或預防受治療者中的神經性疼痛的方法，包括以有效治療或預防受治療者中的神經性疼痛的量向受治療者施用定向至選自RhoA或TLR4的革巴基因的雙鏈RNA化合物。在優選的實施方案中，雙鏈RNA化合物通過腰椎注射施用本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：埃琳娜·費因斯坦，馬丁·格呂梅，
申請(專利權)人：夸克醫藥公司，新澤西州立拉特格斯大學，
類型：發明
國別省市：
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