一種恩拉霉素標準品的高壓液相制備方法，包括發酵菌體試樣溶液制備，將發酵菌體按30-90ml/g的比例懸浮在由丙酮：鹽酸溶液：水=20：1：21比例混合的提取液中，用超聲破碎儀或者超聲機進行細胞破碎，得到含有恩拉霉素的提取液，收集上清液，用濾膜過濾作為試樣溶液備用；動物飼料試樣溶液制備，再相應條件進行反相高壓液相色譜，根據組分的保留時間進行收集，之后按常規的旋轉蒸發工藝除去溶劑，即得恩拉霉素組分標準品。本發明專利技術的恩拉霉素標準品的高壓液相制備方法，具有以下優點：1、前處理簡單快捷，易于操作；2、收集方法簡單；3、制備的標準品純度高，純度能達到90%以上。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種。
技術介紹
恩拉霉素(enramycin)是由包括13個不同種類的17個氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的多肽類抗生素，其中氨基酸分子構成環狀多肽結構，脂肪酸位于多肽結構末端。據其末端脂肪酸種類不同，分為恩拉霉A (C107H138Ci2N26O31)和恩拉霉素B (C108H140C12N26O31)，恩拉霉素則是由這兩種成分組成的混合物。恩拉霉素的鹽酸鹽為白色結晶性粉末，分子量約為2500,熔點為238 245°C,易溶于二甲亞砜,可溶于甲醇、含水乙醇,難溶于丙酮,不溶于苯、氯仿。恩拉霉素的鹽酸鹽對熱、光照和潮濕有極好的穩定性。恩拉霉素在飼料中具有很高的穩定性，在室溫條件下長期儲藏很少降解，在制成顆粒料過程中也非常穩定，與飼料混合后在室溫下長期儲藏效價下降甚微。恩拉霉素在腸道內不被降解，能夠保持原有的抗菌 活性。目前尚未發現涉及恩拉霉素標準品制備方法的報導。
技術實現思路
本專利技術的目的就是提供一種簡單快捷，易于操作，制備的標準品純度高的。本專利技術的，包括以下步驟 I、發酵菌體試樣溶液制備 將發酵菌體用去離子水清洗后，按30-90ml/g的比例懸浮在由丙酮鹽酸溶液水=20 I21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，用超聲破碎儀或者超聲機進行細胞破碎lOmin，得到的混合物在20°C，ISOrpm的條件下振蕩提取90min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心lOmin，收集上清液，用0.45 um濾膜過濾作為試樣溶液備用，試樣溶液濃度不超過2000 u g/ml ； 動物飼料試樣溶液制備 按GB/T 14699. I的規定選取動物飼料樣品200g_500g，用四分法縮至100g，粉碎通過0. 45mm孔徑篩，混勻，貯存于磨口瓶中備用，取上述動物飼料樣品5_10g，加入到80ml的由丙酮鹽酸溶液水=20 1 21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，在20°C，180rpm的條件下振蕩提取90min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心IOmin,收集上清液,用0. 45 y m濾膜過濾作為試樣溶液備用，試樣溶液濃度不超過2000 u g/ml。2、恩拉霉素標準品制備按下列條件進行反相高壓液相色譜 試樣溶液濃度不超過2000 u g/ml ； 進樣量100 ill ； 色譜柱C18柱半制備型,長250mm,內徑IOmm,粒度5 y m ; 流動相B :色譜純乙腈，A :0. 2%乙酸，制法是，吸取2ml色譜純乙酸，溶于1000ml純凈水中；流速2. Oml/min ； 柱溫30°C ; 檢測波長267nm ； 根據組分A和組分B的保留時間進行收集； 將收集的組分A峰和組分B峰分別按常規的旋轉蒸發工藝除去溶劑，即得恩拉霉素組分標準品。所述的發酵菌體是指發酵液中恩拉霉素產生菌的菌絲體。 所述的動物飼料是指動物配合飼料、濃縮飼料、預混合飼料或恩拉霉素預混劑。本專利技術的，具有以下優點1 :前處理簡單快捷，易于操作；2、收集方法簡單，只要根據保留時間收集相應組分即可；3、制備的標準品純度高，純度能達到90%以上；4、能將組分A和組分B分開收集，為日后理論研究奠定基礎。具體實施例方式實施例I :將發酵菌體用去離子水清洗后，按65ml/g的比例懸浮在由丙酮鹽酸溶液水=20 1 21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，用超聲破碎儀或者超聲機進行細胞破碎lOmin，得到的混合物在20°C，180rpm的條件下振蕩提取90 min,得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心lOmin，收集上清液，用0. 45 ii m濾膜過濾作為試樣溶液備用。將處理好的樣品按下面的色譜條件進樣 進樣量100 ill ； 色譜柱Phenomenex C18柱半制備型，長250mm,內徑IOmm,粒度5 y m ; 流動相B :色譜純乙腈，A :0. 2%乙酸，制法是，吸取2ml色譜純乙酸，溶于IOOOml純凈水中；流速2. Oml/min ； 柱溫30°C ; 檢測波長267nm ； 按標準色譜圖分別收集組分A和組分B :組分A和組分B的保留時間分別為14. 176min和21. 070min,根據保留時間對組分A和組分B的進行收集，組分A和組分B分別收集到8. 2L 和 4. 5 L0將收集的組分A和組分B分別按常規的旋轉蒸發工藝除去溶劑，即得恩拉霉素組分標準品。進行純度檢測，組分A的純度為96. 5%，組分B的純度為92. 9%。實施例2 :按GB/T 14699. I的規定選取動物飼料樣品400g，用四分法縮至100g，粉碎通過0. 45mm孔徑篩,混勻，I&存于磨口瓶中備用，取上述動物飼料樣品5_10g,加入到80ml的由丙酮鹽酸溶液水=20 1 21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，在20°C，180rpm的條件下振蕩提取90min小時，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心IOmin,收集上清液,用0. 45 y m濾膜過濾作為試樣溶液備用，試樣溶液濃度不超過2000 u g/ml。將處理好的樣品按下面的色譜條件進樣進樣量100 ill ； 色譜柱Phenomenex C18柱半制備型，長250mm,內徑IOmm,粒度5 y m ; 流動相B :色譜純乙腈，A :0. 2%乙酸，制法是，吸取2ml色譜純乙酸，溶于IOOOml純凈水中；流速2. Oml/min ； 柱溫30°C ; 檢測波長267nm ； 按標準色譜圖分別收集組分A和組分B :組分A和組分B的保留時間分別為14. 231min和21. IOSmin,根據保留時間對組分A和組分B的進行收集，組分A和組分B分別收集到8.7L 和 4. 9 L0將收集的組分A和組分B分別按常規的旋轉蒸發工藝除去溶劑，即得恩拉霉素組分標準品。進行純度檢測，組分A的純度為96. 1%，組分B的純度為92. 8%。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1. 一種恩拉霉素標準品的高壓液相制備方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)、發酵菌體試樣溶液制備 將發酵菌體用去離子水清洗后，按30-90ml/g的比例懸浮在由丙酮鹽酸溶液水=20 .1 21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，用超聲破碎儀或者超聲機進行細胞破碎lOmin，得到的混合物在20°C，ISOrpm的條件下振蕩提取90min，得到含有恩拉霉素的提取液，然后在10000r/min的轉速下離心lOmin，收集上清液，用.0.45 um濾膜過濾作為試樣溶液備用，試樣溶液濃度不超過2000 u g/ml ； 動物飼料試樣溶液制備 按GB/T 14699. I的規定選取動物飼料樣品200g_500g，用四分法縮至100g，粉碎通過.0.45mm孔徑篩，混勻，貯存于磨口瓶中備用，取上述動物飼料樣品5_10g，加入到80ml的由丙酮鹽酸溶液水=20 1 21比例混合的提取液中，丙酮為分析純濃度，鹽酸溶液的濃度為2mol/L，在20...
【專利技術屬性】
技術研發人員：崔厚華，冷董碧，殷曉浦，黃苓，劉雅晶，
申請(專利權)人：江西興鼎科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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