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    一種適用于幼齡兔卵母細胞體外成熟培養的方法及培養液配方組成比例

    技術編號:7781322 閱讀:255 留言:0更新日期:2012-09-20 18:22
    本發明專利技術屬于生物學領域,具體涉及一種適用于幼齡兔卵母細胞體外成熟培養的方法及培養液配方。該方法采用TCM-199基礎培養體系在體外培養卵丘卵母細胞復合體,以TCM-199培養液為基礎,在其中添加10%FBS、0.11g/L丙酮酸鈉、10μg/mlLH、10μg/mlFSH、1μg/mlE2、100IU/ml青霉素、100IU/ml硫酸鏈霉素、15-20μM的表沒食子兒茶素沒食子酸酯。本發明專利技術在TCM-199基礎培養體系中通過添加EGCG研究其對幼齡新西蘭兔卵母細胞體外成熟的影響,建立了一種簡單、適用的幼兔卵母細胞體外成熟的方法。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術屬于生物學領域,具體涉及ー種適用于幼齡兔卵母細胞體外成熟培養的方法。
    技術介紹
    JIVET 技術(juvenile in vitro embryo transfer)是集幼畜的超數排卵與米卵、卵母細胞體外成熟、體外受精、胚胎體外培養和胚胎移植等技術為一體的生物高技術體系,最早由澳大利亞南澳政府生埴與發育研究中心(South Australia ReproductionInstitute, SARD)研究開發。以幼畜為供體,對幼畜進行超數排卵,不僅可以為胚胎體外生產提供大量的卵母細胞資源,滿足人們科研和生產的需求,而且還可以大大縮短世代間隔,加快育種進程,并且為受精生物學、發育生物學研究提供理想的技術平臺。而對幼畜超排后獲得的卵母細胞進行有效的培養,是JIVET技術的基礎和關鍵。但目前對幼畜卵母細胞體外成熟的研究報道還較為少見。卵母細胞體外成熟培養技術是應用促性腺激素和類固醇激素在體外模擬卵泡環境,進而誘發卵母細胞成熟的ー項生物技術。自20世紀60年代以來,卵母細胞體外培養的研究得到迅速發展,眾多科學家對哺乳動物卵母細胞的成熟培養進行了探索,并取得了很好的研究結果。目前,卵母細胞的體外成熟技術已被廣泛應用于科學研究、畜牧生產和醫學生殖工程中,牛、羊等未成熟卵母細胞經體外培養,排出第I極體率可達90%以上。已有的研究結果表明,動物的種類和年齡,卵母細胞類型,獲取卵母細胞卵泡的大小,成熟培養液及添加成分(如激素、血清、卵泡液、抗氧化物質)等,均可影響卵母細胞的成熟效率。成熟基礎培養液的構成直接影響到卵母細胞的成熟率及以后的受精和胚胎發育。目前,卵母細胞成熟基礎培養液有TCM-199 (TCM199)、HTF、HAMF等,但大部分采用穩定性較好的TCM-199作為基礎培養液。TCM199培養液(標準型)成分如表1,含Earle’ s混合鹽,100mg/L谷氨酰胺,2200mg/L碳酸氫鈉。pH值7. 2-7. 4。表I. TCM-199培養液(標準型)成分本文檔來自技高網...

    【技術保護點】

    【技術特征摘要】
    1.ー種適用于幼齡兔卵母細胞體外成熟培養的方法,包括采用TCM-199培養體系在體外培養卵丘卵母細胞復合體,其特征在于,在TCM-199中添加10% FBS,O. llg/L丙酮酸鈉、10 μ g/ml LH、10 μ g/ml FSH、I μ g/ml E2, lOOIU/ml 青霉素、lOOIU/ml 硫酸鏈霉素、15 —20 μ M的表沒食子兒茶素沒食子酸酷。2.根據權利要求I所述的方法...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:李擁軍李太坤李文婷張光景張佳慧
    申請(專利權)人:揚州大學
    類型:發明
    國別省市:

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