本發明專利技術提供一種新型三角形銀-硫化銀納米復合顆粒的制備方法及其在寡核苷酸探針合成中的應用，其由三角形銀納米顆粒與硫化物直接反應制備而來，在三角形銀納米顆粒的表面覆蓋有硫化銀形成的保護層。本發明專利技術還提供了所述納米復合顆粒的制備方法，其特點是過程簡單快速，且合成的納米復合顆粒既能夠保持三角形銀納米顆粒的穩定性，而又不影響其化學與生物識別的靈敏度，而且無需對納米顆粒進行表面修飾，即可直接通過該三角形銀-硫化銀納米復合顆粒表面的硫化銀與巰基修飾的寡核苷酸探針相偶聯制備出相應的生物納米探針，其過程簡單快速，在生物傳感領域具有廣泛的應用前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種貴金屬納米復合顆粒的制備方法及其在制備寡核苷酸探針中的應用，尤其涉及一種三角形銀-硫化銀納米復合顆粒的制備方法及其在制備寡核苷酸探針中的應用。
技術介紹
貴金屬納米顆粒(如金和銀納米顆粒)，在催化、光學和生物傳感中具有潛在的廣泛應用前景。對金屬納顆粒的研究，尤其是對其形貌可控制備及相應性質和應用的研究，一直是材料科學以及相關領域的前沿熱點。因三角形銀納米顆粒具有獨特的表面質子共振(SPR)性質-其具有三個明顯的SPR峰，即面外四極、面內四極和面內雙極共振峰，且這種性質與它的尺寸和形狀密切相關。因此，對于三角銀納米顆粒的研究吸引了越來越多的人們的注意力。其中一個重要的應用是三角形銀納米顆粒與生物分子的直接功能化得到相應的生物納米探針。然而，三角形銀納米顆粒具有很高的表面能量，特別是在尖角和邊緣處，此處的Ag原子極容易被氧化。這種氧化作用會導致其結構中尖角的塌陷或是結構的整體溶解，SPR峰移動甚至消失。這使得三角形銀納米顆粒幾乎不可能直接應用于生物領域。為了實現其進一步的應用，需要提高不同環境中三角形銀納米顆粒的穩定性。盡管硫醇和二氧化硅的鈍化層可以用于三角形銀納米顆粒的保護及提高他們的穩定性，但這些方法具有以下缺點I)過程復雜繁瑣；2)鈍化的基團會影響生物分子的穩定性和檢測分子的SPR靈敏度。因此，需要找到一種既能保持三角形銀納米顆粒穩定性，又不影響其化學與生物識別靈敏度的方法。
技術實現思路
為了解決上述現有技術的缺陷，本專利技術的目的在于提供一種以三角形銀納米顆粒為原料制備三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒及其寡核苷酸探針的制備方法。本專利技術的特點是簡單和快速，并且具有很好的重現性。并進一步通過三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒表面的Ag2S與巰基修飾的寡核苷酸(HS-DNA)偶聯制備出相應的寡核苷酸探針。為了達到上述目的本專利技術采用如下技術方案本專利技術提供一種新型三角形銀-硫化銀納米復合顆粒，其中包含三角形銀納米顆粒，其特征在于其是由三角形銀納米顆粒與硫化物直接反應制備而來，在三角形銀納米顆粒的表面覆蓋有硫化銀形成的保護層。所述的硫化銀可直接與巰基修飾的寡核苷酸相偶聯制備相應的寡核苷酸探針。其制備方法包括以下步驟(I)制備聚乙烯吡咯烷酮(PVP)保護的三角形銀納米顆粒；(2)避光條件下在步驟⑴的溶液中快速加入硫化物的水溶液，恒溫保持20-35 °C，攪拌 5-30 分鐘。、其中步驟(I)可以采用現有的方法，例如Adv Mater, 2005,17 (4) :412-415公開的方法制備得到。其中步驟(2)中加入硫化物的水溶液，使得三角形銀納米顆粒與硫化物的摩爾比為 50 : 1-5 : I。其中步驟(2)中所用的硫化物為硫化鈉或硫化鉀。此外，本專利技術還提供了該新型三角形銀-硫化銀納米復合顆粒在制備寡核苷酸探針中的應用方法，包括以下步驟(I)三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒用磷酸緩沖液洗滌；(2)室溫下，將三角形Ag-Ag2Sm米復合顆粒與巰基修飾的寡核苷酸(HS-DNA)和硼酸緩沖液混合，離心除去上清液；(3)沉淀用磷酸緩沖液洗滌，得到三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒寡核苷酸探針；(4)得到的三角形Ag-Ag2Sm米復合顆粒寡核苷酸探針重分散到磷酸緩沖液中，于4°C儲存。其中，步驟(I)所用磷酸緩沖液的pH值為7. 5-8. 5，含有濃度為O. 1-0. 2mol/L的NaCl ;優選pH值為8.0，含有濃度為O. 15mol/L的NaCl。其中，步驟(3)和⑷中所用磷酸緩沖液的pH值為6. 5-7. 5，含有濃度為O. 1-0. 2mol/L 的 NaCl ;優選 pH 值為 7. 0，含有濃度為 O. 15mol/L 的 NaCl。其中，步驟(2)中所用硼酸緩沖液的pH值為8. 5-9. 5，濃度為45-55mmol/L ;優選pH值為9. 2，濃度為50mmol/L。本專利技術的優點在于(I)提供了一種簡單快速的合成新型的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒的制備方法;(2)通過三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒表面的Ag2S與HS-DNA偶聯制備出相應的寡核苷酸探針。利用本專利技術所制備的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒制備寡核苷酸探針的過程省去了納米材料本身再修飾的過程，具有突出的簡單方便的優點。本專利技術合成的新型三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒可用于DNA分子的檢測，其作為新型納米生物探針在生物傳感領域具有廣泛的應用前景。附圖說明圖I為本專利技術的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒寡核苷酸探針制備示意圖。圖2為本專利技術一實施例制備的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒的透射電子顯微鏡的圖片( Μ)。圖3為本專利技術一實施例制備的三角形Ag-Ag2S納米顆粒寡核苷酸探針與靶標DNA的解鏈溫度示意圖。圖4為本專利技術又一實施例制備的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒的透射電子顯微鏡的圖片(TEM)。圖5為本專利技術又一實施例制備的三角形Ag-Ag2S納米顆粒寡核苷酸探針與靶標DNA的解鏈溫度示意圖。、圖6為本專利技術另一實施例制備的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒的透射電子顯微鏡的圖片(TEM)。圖7為本專利技術另一實施例制備的三角形Ag_Ag2S納米顆粒寡核苷酸探針與靶標DNA的解鏈溫度示意圖。具體實施例方式實施例I :三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒制備(I)參照文獻(Adv Mater, 2005，17 (4) =412-415.)的方法制備PVP保護的三角銀納米顆粒使用PVP和檸檬酸根作為穩定劑和模版劑，避光攪拌條件下用NaBH4還原AgNO3制備出PVP保護的三角銀納米顆粒。(2)避光條件下在步驟(I)制備的三角銀納米顆粒溶液中快速加入lyLlmmol/L硫化鈉水溶液，三角銀納米顆粒和硫化鈉的摩爾比例約是10 I。恒溫25°C攪拌30分鐘，得到三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒。其形貌見附圖2。利用三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒制備寡核苷酸探針及其雜交性能測試實例模型寡核苷酸分子如下探針a : 5' -TCT-CAA-CTC-GTA-TTTT-SH-3'探針 b : 5' -SH-TTTT-CGC-ATT-CAG-GAT-3'靶標DNA : 5' -TAC-GAG-TTG-AGA-ATC-CTG-AAT-GCG-3'(I)由圖I制備的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒用磷酸緩沖液(PBS) (pH 8. O7NaClO. 15mol/L)洗漆。(2)室溫條件下，將步驟(I)的三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒與探針a和硼酸緩沖液(50mmol/L,pH 9.2)混合，離心除去上清液，沉淀用磷酸緩沖液(pH 7. O7NaCl O. 15mol/L)清洗。將得到的巰基寡核苷酸修飾的三角形Ag-Ag2Sm米顆粒(納米探針a)重分散到磷酸緩沖液中并于4°C儲存。(3)納米探針b通過同樣的方法與探針b反應制備，重分散于磷酸緩沖液中并于4°C儲存。(4)將納米探針a和b與靶標DNA混合，加熱到70°C以上10分鐘，自然冷卻，使用分光光度計對其解鏈溫度進行檢測。見附圖3。實施例2 三角形Ag-Ag2S納米復合顆粒制備制備方法和實例I基本相同；不同點在于步驟(2)中避光條件下在步驟I)制備的三角銀納米顆粒溶液中快速加入3 μ L 2本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.ー種三角形銀-硫化銀納米復合顆粒，其中包含三角形銀納米顆粒，其特征在于在三角形銀納米顆粒的表面覆蓋有硫化銀形成的保護層，所述硫化銀由三角形銀納米顆粒與硫化物直接反應制備而來。2.如權利要求I所述的三角形銀-硫化銀納米復合顆粒，其特征在于所述的硫化銀可直接與巰基修飾的寡核苷酸相偶聯制備相應的寡核苷酸探針。3.一種制備如權利要求I或2所述的三角形銀-硫化銀納米復合顆粒的方法，，其特征在于主要包括以下步驟 (1)制備聚こ烯吡咯烷酮(PVP)保護的三角形銀納米顆粒； (2)避光條件下在步驟(I)的溶液中快速加入硫化物的水溶液，恒溫保持20-35°C，攪拌5-30分鐘。4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在干步驟(I)所述的三角形銀納米顆粒由現有方法(Adv Mater, 2005,17 (4) :412-415.)所制備。5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在干所述步驟(2)中加入的硫化物的水溶液，使得三角形銀納米顆粒與硫化物的摩爾比為50 1-5 I。6.如權利要求3所述的制備方法，其特征在干所述步驟(2)中所用的硫化物為硫化鈉或硫化鉀。7.權利要求1-6任一項所述的三角形銀-硫化銀納米復...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馬占芳，劉兵，韓景漫，
申請(專利權)人：首都師范大學，
類型：發明
國別省市：
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