本發明專利技術為“一種治療乙型肝炎的新藥及其提取分離方法”。涉及從高突足襞蛞蝓中，提取分離出一種能抑制HBV-DNA復制、并降低E抗元(HbeAg)表達的JK1。主要工藝：蛞蝓勻漿-50℃水浴鍋內攪拌提取4小時--布袋離心--配成70％醇濃度浸出提取24小時-旋轉蒸發回收乙醇--布袋離心棄渣-超濾膜脫水脫醇-真空冷凍干燥得JK1干粉---加入輔料制成膠囊劑、片劑。
【技術實現步驟摘要】
生物技術
技術介紹
乙型病毒性肝炎(Chronic Hepatitis B, CHB)是由HBV引起的一種常見傳染病。 HBV感染呈世界性分布是一個嚴重的公共衛生問題。全球約20億人被證明有HBV感染，5% 的世界人口現行慢性感染，其中3. 5億人為HBV慢性感染，每年約100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發性肝細胞癌(HCC)。慢性乙型肝炎已成為世界上第10大致死疾病之一。我國屬HBV感染中、高流行區，一般人群的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性檢出率為9. 09%，慢性乙型肝炎患者約3000萬，每年有80 100萬新生兒攜帶乙肝。乙型肝炎嚴重威脅人民的生命健康，且給家庭和社會造成巨大的經濟損失，因此，對乙型肝炎治療新藥的研究迫在眉睫。乙型肝炎的治療目標是抑制或清除HBV，減輕肝內炎癥活動，延緩或阻止肝損傷， 防止發展至肝臟失代償、肝硬化及肝癌，改善患者生存質量和延長生存時間。目前對慢性乙型肝炎患者的治療多采取綜合治療方法，其中抗病毒治療是重要的治療措施之一。近年來，國內外學者已對慢性乙型肝炎的抗病毒治療作了大量的研究，主要有細胞因子治療、免疫調節治療、核苷類似物治療、聯合治療、中醫中藥治療、導向治療和基因治療等。通過抑制 HBV復制而直接阻斷其自然病程的抗病毒療法是慢性乙肝治療的關鍵。但由于慢性HBV感染是病毒、肝細胞、機體免疫系統之間相互作 用的動態過程，抗病毒治療不僅與HBV基因異質性、HBVcccDNA的穩定性等病毒因素有關，更涉及到宿主的遺傳素質及免疫狀態等，因此臨床抗病毒療效遠非理想，尤其是遠期療效。在抗HBV藥物中，研究最為深入，療效也較為確切的是α干擾素(IFN-α)和以拉米呋啶(3TC)為代表的核苷類藥物。干擾素，有抗病毒和激發免疫應答兩方面的作用。干擾素使用效果個體差異大，對所有慢性乙型肝炎病人的完全應答率為30% 50%，完全應答的病人可能在3個月內使 HBeAg、HBV-DNA轉陰，且大多數結果穩定。但e抗原陰性慢性乙型肝炎患者對干擾素的反應性，比對e抗原陽性患者差，療程至少I年才能獲得較好療效。干擾素開始用時普遍有發熱反應，治療期間多有疲乏，食欲略差，較重要的是近1/3的病人發生白細胞或血小板減少， 偶可出現精神抑郁癥狀或誘導產生自身抗體和自身免疫性疾病，但是通用的劑量一般都能耐受，干擾素治療期間激發免疫應答，ALT可能更高，肝炎癥狀可更明顯，使較重的代償性肝病失代償，但是干擾素一般無耐藥性突變。干擾素的適合治療對象是慢性乙型肝炎，但干擾素不良反應較多，受到許多限制，如妊娠、精神病史、未經控制的自身免疫性疾病、失代償性肝硬化、有癥狀的心臟病等都是絕對的禁忌癥。核苷類藥物，目前在國內以拉米夫定為主。拉米呋啶(3TC)是一種人工合成的以左旋對映體構型存在的脫氧胞嘧啶類似物。拉米呋啶通過抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸聚合酶(HBV-DNAp)而抑制病毒的復制，起效快，對大部分患者有效，大約有10%的病人 2周內血清病毒可下降至基礎水平，但是這種抑制作用是可逆的，停藥后易反彈，甚至病情加重。且隨用藥時間的延長發生耐藥變異的比例增高，有研究顯示拉米呋啶治療3年后，YMDD變異率可高達70%。拉米夫定最終抑制程度不及干擾素。另外，拉米呋啶對HBeAg的轉陰率不及干擾素，且要堅持用藥數年甚至更長的時間。，其他核苷類似物，如阿德福韋(adefovir dipivoxil,ADV)、恩替卡韋(entecavir, ETV)、恩屈他濱(emtricitabine，ETC)等也能抑制HBV復制。但不良反應較多。如ADV是一種新的單磷酸腺苷類似物，對HBV野生株和YMDD變異株病毒有抑制作用，能使病人HBV-DNA 水平迅速下降，但有明顯的腎毒性，表現為腎小管酸中毒、輕度腎衰，停藥后可恢復。ETV現已經完成III期臨床研究，其安全性和耐受性與拉米呋啶相似，能抑制拉米呋啶耐藥株的復制，但與拉米呋啶存在交叉耐藥，發展前景似乎也不大。ETC療效與拉米呋啶相似且耐受性好，但動物實驗發現大劑量使用可能有致癌作用。中藥，近期新研發的成藥(如肝復樂)和方劑不少，但尚乏能抑制HBV-DNA復制者，只能減輕肝內炎癥活動，延緩肝損傷，防止發展至肝臟失代償、肝硬化及肝癌，改善患者生存質量和延長生存時間。綜上所述，權衡利蔽，目前仍然沒有理想的抗乙肝新藥，加強對新的抗HBV藥物的研究已是當務之急。近期，國內有人試圖用蛞蝓多糖來治療乙肝。劉群紅、蔡霞等用蛞蝓多糖 HepG2. 2. 15細胞做體外抗乙型肝炎病毒試驗以不同濃度的蛞蝓多糖和拉米夫定與 H印G2. 2. 15細胞混合培養，通過MTT法檢測藥物的細胞毒性，9天后用ELISA法檢測細胞培養液中的HBsAg和HBeAg分泌水平，用實時熒光定量PCR技術檢測培養液中的HBV-DNA含量。結果蛞蝓多糖在Img -Hil--I濃度以下對細胞無毒性。蛞蝓多糖在所稀釋的各濃度下， 對HBsAg、HBeAg均有抑制作用，最大抑制率分別為56. 2 %和58. I % ；HBsAg,HBeAg的治療指數分別大于19. 98%,22. 78%。蛞蝓多糖可抑制HBV-DNA的復制(P < O. 05)。揭示蛞蝓多糖在體外具有顯著抑制HBV的作用。蔡霞等還做了“蛞蝓多糖抗鴨乙型肝炎病毒(DHBV)的作用”實驗采用先天感染DHBV的北京雛鴨為模型，隨機分設O. 9%氯化鈉注射液模型對照組、拉米夫定組、蛞蝓多糖低、中、高3個劑量組，每組8只雛鴨均以20mg *kg-l -d-Ι灌胃給藥IOd.斑點雜交法觀察用藥前與用藥后5d、IOd及停藥后5d血清中DHBV-DNA表達。結果 蛞蝓多糖不同劑量組對DHBV均有一定抑制作用.其中蛞蝓多糖的中、高劑量組于用藥后第 5 天血清 DHBV-DNA 的吸光度 A 值為(O. 66 ± O. 14)、(O. 73 ± O. 26)，第 10 天為(O. 47 ± O. 18)、 (O. 54±0· 10)，較O. 9%氯化鈉注射液對照組(I. 61 + 0. 54)、(I. 20±0· 51)明顯降低，蛞蝓多糖的中、高劑量組對DHBV-DNA的抑制率于用藥后第5天為24. 14%、23. 96%，第10天為 45. 98%,43. 75%，與O. 9%氯化鈉注射液對照組相比明顯提高。揭示蛞蝓多糖具有降低鴨血DHBV-DNA含量，抑制乙型肝炎病毒作用。
技術實現思路
本專利技術涉及從軟體動物高突足裝賠蝓(Vaginulus alte Ferussac)中，提取分離出一種能治療乙型肝炎的新藥，這種新藥能有效的抑制HBV-DNA的復制，并降低E抗元的表達。本專利技術人在研究蛞蝓抗肺作用的同時，給15只HBV-DNA轉基因感染的C57小鼠，用蛞蝓提取物兩種不同部位“JK1”和“JK2”按400mg/kg. d灌胃，以拉米夫定作陽性對照，按40mg/ kg. d灌胃給藥15天驗血、JKl組HBV-DNA考 貝數有50%下降到正常(103)以下水平。而拉米夫定無變化；陰性對照組呈指數復制擴增。第30天血清學復查結果JK1組HBV-DNA， 100%下降到正常指標(103)以下。JK2和拉米夫定只有50%下降到正常水平；血清HbeAg(E抗元)定量(本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.該發明JKl是從高突足襞蛞蝓中提取分離出來的有效部位，其化學成份有待進一步研究。2.該發明JKl是經蛞蝓勻漿、水提、醇沉、三氯乙酸脫蛋白，特別是經過200nm超濾膜和真空冷凍干燥等高新技術和工藝而制...
【專利技術屬性】
技術研發人員：謝金魁，謝斌，張聰琪，
申請(專利權)人：謝金魁，謝斌，
類型：發明
國別省市：
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