本發明專利技術公開了一種腎上腺素alpha1受體亞型的熒光探針組合，由腎上腺素alpha1A受體（alpha1A-AR）熒光探針和腎上腺素alpha1B受體（alpha1B-AR）熒光探針組成，alpha1A-AR熒光探針和alpha1B-AR熒光探針的核苷酸序列分別如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；應用上述熒光探針組合和熒光原位雜交技術，在熒光標記少突膠質前體細胞（OPC）轉基因小鼠腦內，發現不同腦區OPC表達alpha1-AR類型不一致，說明alpha1A-AR和alpha1B-AR可以作為OPC異質性的標記，本發明專利技術的熒光探針組合可以作為區分不同腦區OPC的試劑，用于OPC的異質性研究。
Fluorescent probe combinations of adrenergic alpha1 receptor subtypes and uses thereof
The invention discloses a fluorescent probe combination of alpha1 adrenergic receptor subtypes, the alpha1A adrenergic receptors (alpha1A-AR) fluorescent probe and alpha1B adrenergic receptors (alpha1B-AR) fluorescence probe, alpha1A-AR fluorescence probe and fluorescence probe alpha1B-AR nucleotide sequence SEQIDNo.1 and SEQIDNo.2 respectively as shown in the above application; combination of fluorescence probe and fluorescence in situ hybridization technology of oligodendrocyte precursor cells in fluorescence labeling (OPC) transgenic mice, found in different regions of the brain OPC expression of alpha1-AR type is not consistent, indicating that alpha1A-AR and alpha1B-AR can be used as a marker of OPC heterogeneity, fluorescent probe combination of the invention can be used as reagents to distinguish different brain regions of OPC, used to study the heterogeneity of OPC.
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于核酸檢測
，涉及一種核酸探針組合及其應用。
技術介紹
神經膠質細胞約占中樞神經系統細胞總數的90%，其在神經系統中的重要性日益受到重視，逐漸成為神經科學研究的熱點之一。早先有神經生物學研究者在中樞神經系統中發現了一種具有典型雙極突起、胞體小而不規則的細胞，其形態很難歸入已知的神經膠質細胞范疇，而類似不成熟的膠質細胞。根據其能夠增殖并可分化為少突膠質細胞的特性，研究者將這種細胞命名為少突膠質前體細胞(oligodendrocyte precursor cell,0PC)。硫酸軟骨素蛋白多糖(NG2)是OPC的特異性免疫標記物和鑒定標準。早先的研究認為OPC是哺乳動物胚胎發育早期的少突膠質前體細胞，其在出生后分化成熟，成為成髓鞘的少突膠質細胞。但最近研究顯示，成熟的腦內也表達大量的NG2免疫陽性反應細胞,這些細胞在形態上與星狀膠質細胞、少突膠質細胞、小膠質細胞等均有所區別，胞體稍大，突起短而且豐富，有較多分枝，從形態學特征來看傾向認為是腦內一類成熟的膠質細胞，而這些細胞在灰質、白質及海馬區域的廣泛分布也預示其可能不嚴格屬于少突膠質細胞系的前體細胞，而是在中樞神經系統中與少突膠質細胞、星狀膠質細胞不同的一種新的膠質細胞類型。由于近年研究顯示OPC與神經退行性疾病、毒性物質作用、營養代謝障礙和缺氧缺血所致的白質損害等均密切相關，從而成為新近神經科學研究的熱點。哺乳動物腦內白質與灰質OPC形態有不同。OPC是否與星狀膠質細胞類似，在不同腦區也具有異質性，對于闡明其在體功能具有重要意義。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于針對OPC的異質性研究，設計和構建一種熒光探針。為達到上述目的，本專利技術提供如下技術方案 I、腎上腺素alphal受體(alphal_AR)亞型的突光探針組合，由腎上腺素alphalA受 體(alphalA-AR)熒光探針和腎上腺素alphalB受體(alphalB_AR)熒光探針組成，所述alphalA-AR熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID No. I所示，alphalB_AR熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示；所述alphalA-AR熒光探針和alphalB_AR熒光探針分別用熒光光譜互不重疊的熒光分子進行標記。優選的，所述alphalA-AR熒光探針和alphalB_AR熒光探針中的任意一種用熒光分子Cy5進行標記,另一種用突光分子Alexa Fluor488進行標記。2、alphal-AR亞型的熒光探針組合作為區分不同腦區OPC的試劑的應用。本專利技術的有益效果在于本專利技術設計并構建了一種alphal-AR亞型的熒光探針組合，包括alphalA-AR熒光探針和alphalB-AR熒光探針，應用該熒光探針組合和熒光原位雜交技術，在熒光標記OPC轉基因小鼠腦內，發現不同腦區OPC表達alphal-AR類型不一致，alphalA-AR和alphalB-AR可以作為區分不同腦區OPC的標志物，該熒光探針組合可以作為區分不同腦區OPC的試劑，用于OPC的異質性研究。由于現有技術中針對alphalA-AR和alphalB-AR的抗體尚不具有特異性區分alphalA-AR和alphalB-AR的能力，而熒光標記技術具有檢測簡單、靈敏度高(相對于常規標記技術)、特異性強(相對于受體檢測技術)等優點，本專利技術的熒光探針組合具有良好的應用前景。附圖說明圖I顯示了 AlphalAAR-I寡核苷酸的質譜檢測結果，單吸收峰在16382Da。圖2顯示了 AlphalBAR-I寡核苷酸的質譜檢測結果，單吸收峰在14491Da。圖3顯示了海馬CAl區OPC表達alphalA-AR (箭頭所示)但不表達alphalB-AR。圖4顯示了海馬CA2區OPC表達alphalA-AR (箭頭所示)但不表達alphalB-AR。 圖5顯示了大腦皮層灰質OPC既不表達alphalA-AR也不表達alphalB-AR。圖6顯示了大腦皮層白質OPC既表達alphalA-AR(箭頭所示)也表達alphalB-AR。具體實施例方式為了使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本專利技術進行詳細的描述。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如分子克隆實驗指南(第三版，J-薩姆布魯克等著)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。一、alphalA-AR熒光探針和alphalB-AR熒光探針的制備 根據GenBank中登錄的alphalA-AR的mRNA全長序列(登錄號NM_013461. 3)和alphaIB-AR的mRNA全長序列(登錄號NM_007416. 3)設計alphalA-AR和alphalB-AR的特異性寡核苷酸探針序列如下 alphalA-AR 的寡核昔酸探針 AlphalAAR-I :5’-gcatcacgaggaagaacggcagccagcagaggaeg- aagcatcccaccacaa-3’ (SEQ ID No. I)； alphalB-AR 的寡核昔酸探針 AlphalBAR-I :5，-aaggcgcacagctccacgggtggctgcgttccacga- cccaggtat-3’ (SEQ ID No. 2)。AlphalAAR-I探針序列與alphalA-AR mRNA全長序列的BLAST比對結果見表I。AlphalBAR-I探針序列與alpha IB-AR mRNA全長序列的BLAST比對結果見表2。表I AlphalAAR-I 與 alphalA-AR mRNA 全長序列的 BLAST 結果—....IH— 願 SI FelwlrTliwin序遲屢;Dscirfes':d κ-ζ切..I iTctd sc^rt-:.Evske·.iieui 小釀賢上腺索受館.d-ΑιΓ^ …' S7S S SISO3=4Χ15- a Aii s. Is.I 表 2 AlphalBAR-I 與 alphalB-AR mRNA 全長序列的 BLAST 結果 a 錄號.賴描述 ...........'mM§...........................IwSiiflisjt.....Siiiagsrltil..... iSnfijs......I;AcceisDe53ipscs'-κ-ctr ;T^ti sccr iQ^ety cc-v^age- -J value}Ζ κ iimiW--I%Ia Sp 7|Q 7JOOi,I XlCid am SA 探針的熒光標記釆用末端標記法，在每條寡核苷酸探針的5’端和3’端都標記上同一種焚光分子。本實施例中用Cy5標記AlphalAAR-I探針，用Alexa Fluor488標記AlphalBAR-I探針。Cy5的激發波長為649nm，發射波長為670nm ；Alexa Fluor488的激發波長為490nm，發射波長為520nm ;二者熒光光譜互不重疊，從而避免了后續熒光檢測中的互相干擾。當然，本專利技術也可以用Alexa Fluor488標記AlphalAAR-I探針，用Cy5標記AlphalBAR-I探針；也可以采用熒光光譜互不重疊的其它熒光分子分別標記AlphalAAR-I探針和本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.腎上腺素alphal受體亞型的熒光探針組合，其特征在于，由腎上腺素alphalA受體熒光探針和腎上腺素alphalB受體熒光探針組成,所述腎上腺素alphalA受體熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID No. I所示，腎上腺素alphalB受體熒光探針的核苷酸序列如SEQ IDNo. 2所示；所述腎上腺素alphalA受體熒光探針和腎上腺素alphalB受體熒光探針分別用熒光光譜...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳鵬慧，阮懷珍，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第三軍醫大學，
類型：發明
國別省市：
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