人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1活性調(diào)節(jié)劑篩選模型及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種以人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)為靶點(diǎn)的ABCA1活性調(diào)節(jié)劑體外高通量篩選模型或試劑盒，本發(fā)明專利技術(shù)還涉及一種利用所述篩選模型或試劑盒篩選人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1活性調(diào)節(jié)劑的方法，以及利用所述模型或試劑盒篩選獲得的人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1活性調(diào)節(jié)劑，尤其是人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1激動(dòng)劑和人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1拮抗劑。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及以人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al為靶點(diǎn)的ABCAl活性調(diào)節(jié)劑體外高通量篩選模型或者試劑盒；本專利技術(shù)還涉及利用所述篩選模型或試劑盒篩選人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al活性調(diào)節(jié)劑的方法，以及利用所述模型或試劑盒篩選獲得的人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al活性調(diào)節(jié)劑，尤其是ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al激動(dòng)劑和ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al拮抗劑。
技術(shù)介紹
動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是缺血性心腦血管疾病(如冠心病、心絞痛、心肌梗塞、腦卒中等)共同的病理生理基礎(chǔ)，而外周細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝障礙是動(dòng)脈粥樣硬化的重要發(fā)病機(jī)制。過量膽固醇從肝外組織中的清除是預(yù)防和治療AS的關(guān)鍵步驟。 ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體 Al (ABCA1, ATP-binding cassette, sub-family A(ABCl), member I,Location 9q31. I)是ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體超家族成員之一,是一種重要的以ATP為能源轉(zhuǎn)運(yùn)各種離子、脂類等細(xì)胞代謝物的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。ABCAl可介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)磷脂和游離膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至貧脂或無脂的載脂蛋白A-I (apolipoprotein A-I, apoA_I),從而促進(jìn)高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)生成。此過程被譽(yù)為脂質(zhì)外流的限速步驟,在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，ApoA-I與ABCAl是類似于一種受體-配體的相互作用來發(fā)揮其功能的。ApoA-I作為HDL中的主要載脂蛋白成分，被認(rèn)為是ABCAl介導(dǎo)的膽固醇和磷脂外流的主要接受體。Nan Wang 等人(Wang N, Silver DL, Costet P and Tall AR(2000) Specificbinding of ApoA-I, enhanced cholesterol efflux, and altered plasma membranemorphology in cells expressing ABC1.J Biol Chem 275(42) :33053-33058)經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明ABCAl轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，apoA-I促進(jìn)膽固醇外流的EC5tl約為2. Oy g/ml。如此低的EC5tl值說明了 ABCAl和apoA-I之間存在著高親和力。ApoA-I在細(xì)胞表面的結(jié)合同樣需要功能性的ABCAl的存在。已發(fā)現(xiàn)的兩種化合物格列本脲和BLT-4抑制apoA_I與ABCAl結(jié)合，同樣也發(fā)現(xiàn)二者均能降低細(xì)胞膽固醇的外流(Nieland TJ, Chroni A, FitzgeraldML, Maliga Z, Zannis VI, Kirchhausen T and Krieger M(2004)Cross-inhibition ofSR-BI-and ABCAl—mediated cholesterol transport by the small molecules BLT-4 andglyburide. J Lipid Res 45(7) :1256-1265)。cAMP 提高了細(xì)胞 ABCAl 蛋白的表達(dá)，同樣也發(fā)現(xiàn)了其增加了 apoA-I 的結(jié)合(Oram JF, Lawn RM,Garvin MR and Wade DP (2000)ABCAl isthe cAMP-inducibleapolipoprotein receptor that mediates cholesterol secretionfrom macrophages. J Biol Chem 275(44) :34508-34511)。這提不專利技術(shù)人可以通過增加細(xì)胞表面apoA-I的結(jié)合來增加膽固醇外流。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
鑒于上述研究發(fā)現(xiàn)，很有必要從增加膽固醇外流這一原理來建立藥物篩選模型，本專利技術(shù)人經(jīng)過嘗試，首次成功建立了基于與ABCAl結(jié)合的ApoA-I的cell-ELISA-like的高通量篩選模型。具體地，本專利技術(shù)所述篩選模型或試劑盒利用ApoA-I為配基，以在中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO的細(xì)胞膜上成功表達(dá)的ABCAl為靶點(diǎn)，建立了 ABCAl的活性調(diào)節(jié)劑篩選模型或試劑盒，其特點(diǎn)在于與現(xiàn)有的體外配基受體結(jié)合模型或試劑盒相比較，作為篩選靶點(diǎn)人ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al在哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上表達(dá)，因此，受體與待測化合物的相互作用接近在人體細(xì)胞中的真實(shí)狀態(tài)。通過該在細(xì)胞水平上建立的篩選模型降低了用純化的ABCAl蛋白進(jìn)行篩選的成本，同時(shí)采用cell-ELISA方法，適合于高通量篩選。此外，專利技術(shù)人利用此模型對400個(gè)化合物進(jìn)行了篩選，成功發(fā)現(xiàn)了具有上調(diào)ABCAl與ApoA-I結(jié)合活性的陽性候選化合物。具體地，本專利技術(shù)的一個(gè)方面，涉及下式I所示的化合物、含有式I所示化合物的組合物。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.下式I所示的化合物2.含有權(quán)利要求I的化合物的組合物。3.上調(diào)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al活性的方法，其包括使權(quán)利要求I的化合物或者權(quán)利要求2的組合物與需要上調(diào)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al的細(xì)胞在合適的條件下接觸。4.權(quán)利要求I的化合物在制備ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al活性上調(diào)劑中的用途。5.用于ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al活性調(diào)節(jié)劑的體外高通量篩選的試劑盒，其包括 (1)細(xì)胞表面高表達(dá)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al的可穩(wěn)定傳代的細(xì)胞，和 (2)載脂蛋白A-I，以及使用說明書， (3)任選地，包括陽性對照和陰性對照。6.針對ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al活性調(diào)節(jié)劑的體外高通量篩選方法，其包括 I:篩選材料的準(zhǔn)備 (1)提供細(xì)胞表面高表達(dá)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al的可穩(wěn)定傳代的細(xì)胞， (2)提供合適濃度的載脂蛋白A-I， (3)提供活性調(diào)節(jié)劑的候選化合物， II:篩選 將(1)-(3)在適當(dāng)?shù)臈l件下接觸合理的時(shí)間，同時(shí)設(shè)立空白對照，其中在與前述操作相同的條件下，不加入(3)之后進(jìn)行洗滌； III:鑒定 ...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：司書毅，張忠兵，劉繼開，許艷妮，謝子建，洪斌，姜威，李卓榮，王智敏，來芳芳，劉偉，馮婷婷，
申請(專利權(quán))人：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：