本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種基于代謝組學(xué)技術(shù)的中藥制劑制備工藝的評價(jià)方法，主要技術(shù)路線包括：1.通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)或平行對照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)獲取不同制備工藝的中藥制劑制品；2.對制備得各制品進(jìn)行樣品前處理；3.應(yīng)用液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜儀，獲得中藥制劑制品的色譜圖；4.根據(jù)質(zhì)量虧損策略，在色譜圖中找尋中藥材歸屬性的成分；5.依據(jù)測定的精確質(zhì)量數(shù)和源內(nèi)誘導(dǎo)碰撞碎裂所得的碎片信息，推斷各成分結(jié)構(gòu)；6.定量分析各制品中所有歸屬性成分的含量；7.通過多變量的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法整體評價(jià)制備工藝對制劑的影響。該方法準(zhǔn)確、靈敏、不依賴于標(biāo)準(zhǔn)化合物，從整體上跟蹤制劑制品中藥材歸屬性成分的變化，可廣泛適用于中藥制劑的制備工藝評價(jià)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及制藥生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及中藥制劑或天然藥物制劑的制備工藝評價(jià)、質(zhì)量評價(jià)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立。
技術(shù)介紹
中藥制劑是以臨床應(yīng)用效果良好的中藥處方為基礎(chǔ)研制而成的，因其具有多靶點(diǎn)多效應(yīng)的作用而被廣泛使用，如復(fù)方丹參滴丸、復(fù)方丹參片、葛根素注射液、步長腦心痛、脈絡(luò)寧注射液等。長期以來，中藥制劑在滿足臨床需求、促進(jìn)中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展方面發(fā)揮了重要作用，但是也存在發(fā)展不平衡的現(xiàn)象，如基礎(chǔ)性研究缺乏、制劑質(zhì)量監(jiān)管體制落后、制劑質(zhì)量不穩(wěn)定、制備工藝落后、缺乏系統(tǒng)性評價(jià)等問題。因此，在醫(yī)療實(shí)踐中，發(fā)生了較多由中藥 制劑所引發(fā)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，如過敏性休克、抽搐昏迷、呼吸困難等。特別針對中藥注射劑，近年來不良反應(yīng)在數(shù)量上增幅較大、品種也較多。這使得中藥制劑陷入了患者質(zhì)疑、醫(yī)院停用、病例增多的現(xiàn)狀。制劑制備工藝不夠合理、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不夠完善是中藥制劑目前最突出的問題。中藥制劑與單一成分的化學(xué)藥物不同，中藥制劑是將中藥材經(jīng)過提取純化而制成的具有一定規(guī)格，直接用于防病治病的多成分混合的藥品，成分復(fù)雜不確定。其質(zhì)量的影響因素很多，在處方確定之后，從原料藥材的生長、采收、貯藏，到原藥材的粉碎、浸提、分離，再到浸提液的濃縮、干燥與成劑型，每個(gè)環(huán)節(jié)的改變都會使中藥制劑的質(zhì)量發(fā)生變化。早期中藥制劑的質(zhì)量評價(jià)只是經(jīng)過感官的檢驗(yàn)。50年代開始將中藥制劑的質(zhì)量管理納入法制化、規(guī)范化的軌道。90年代，隨著色譜技術(shù)的廣泛發(fā)展，中藥制劑的質(zhì)量評價(jià)開始從最初的植物形態(tài)學(xué)檢查、物理化學(xué)方法檢查發(fā)展到利用高效液相色譜法、液相串聯(lián)質(zhì)譜法對多個(gè)指標(biāo)性成分檢測。2000年8月國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)了《中藥指紋圖譜研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》，這種指紋圖譜形式的評價(jià)手段更為靈敏、專屬性更強(qiáng)、更客觀、科學(xué)。但是，中藥制劑特別是復(fù)方制劑，其藥效成分不明確、雜質(zhì)多、存在未知成分、作用復(fù)雜(如山楂在制劑中以健胃消食為主治功效，需測定有機(jī)酸含量；如以心血管疾病為主治功效，需測定黃酮類成分)，僅通過指紋圖譜色譜峰的相似性來評價(jià)中藥制劑的質(zhì)量并不合理，同時(shí)也不能支持工藝改進(jìn)。指紋圖譜中色譜峰的歸屬、歸屬成分的定量檢測及綜合的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的評價(jià)是今后研究發(fā)展的必然趨勢和要求。近年來，國內(nèi)外均開始重視(生物)系統(tǒng)的組學(xué)研究，這給我們中藥制劑的質(zhì)量評價(jià)帶來新的思路和借鑒。代謝組學(xué)是一種通過組群指標(biāo)的高通量定量檢測，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，從而研究系統(tǒng)的特征和變化的技術(shù)。總體來說，代謝組學(xué)技術(shù)分成兩個(gè)步驟1)利用現(xiàn)代分析技術(shù)對系統(tǒng)中的成分組群定性定量檢測；2)通過統(tǒng)計(jì)軟件對組群成分的定量分析數(shù)據(jù)進(jìn)行多變量統(tǒng)計(jì)分析如PCA、PLS-DA等。結(jié)合高分辨的質(zhì)譜分析手段，代謝組學(xué)技術(shù)對完善中藥制劑的質(zhì)量評價(jià)體系和改進(jìn)提高中藥制劑的制備工藝具有重要意義。借助多變量的統(tǒng)計(jì)分析方法，分析歸納總結(jié)并預(yù)測制劑及制劑中間產(chǎn)物中多組分的綜合效用；借助液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜儀，能夠高通量的定性和定量中藥制劑中多組分；其高準(zhǔn)確度的精確質(zhì)量數(shù)測定和對化合物的誘導(dǎo)碎裂的特點(diǎn)提供了豐富而精確的化合物結(jié)構(gòu)信息，對鑒定制劑及制劑中間產(chǎn)物復(fù)雜的成分結(jié)構(gòu)具有突出優(yōu)勢；同時(shí)其高通量、高靈敏度、寬動態(tài)范圍的分析平臺為復(fù)雜的化學(xué)成分定量提供便利。基于此的制劑及制劑中間產(chǎn)物的代謝組學(xué)評價(jià)方法更為科學(xué)、合理。鑒于此，本專利技術(shù)應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)建立了一種整合的中藥、天然藥物制劑及制劑中間產(chǎn)物的評價(jià)方法，對中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立和制劑制備工藝的改進(jìn)具有重要意義和普遍使用性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是利用代謝組學(xué)技術(shù)，跟蹤中藥制劑制備過程中藥材歸屬性成分的變化，得到的數(shù)據(jù)采用多變量統(tǒng)計(jì)分析建立數(shù)學(xué)模型，以表征不同制備工藝對中藥制劑制品最終質(zhì)量的影響。 為解決上述問題，本專利技術(shù)提供如下技術(shù)方案，步驟包括a:明確影響中藥制劑質(zhì)量的因素，通過平行對照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)或正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)制備不同工藝的中藥制劑制品，為保證準(zhǔn)確性，每種工藝平行制備6個(gè)以上的批次；制劑過程中影響最終制劑質(zhì)量的因素包括中藥材的產(chǎn)地、中藥材的投料配比、中藥材粉碎粒度、中藥材的提取溶劑、中藥材提取的溫度、中藥材提取的時(shí)間、中藥材提取次數(shù)、所用的助溶劑、所用吸附沉淀劑。b:根據(jù)中藥制劑所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測方法的需要，選擇適宜的方法對中藥制劑制品進(jìn)行處理，獲得中藥制劑特征性總成分提取物；處理方法包括液液萃取、固相萃取、過濾，其中液液萃取溶劑包括正丁醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、苯、正己烷；固相萃取包括各種型號的固相小柱；過濾包括各種型號的濾膜。c :應(yīng)用液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜聯(lián)儀，在一定的色譜分離條件下，對不同制備工藝的中藥制劑進(jìn)行分析，獲取特征性的總離子流色譜圖；所用的高分辨質(zhì)譜儀必須為同時(shí)具有高準(zhǔn)確度的離子精確質(zhì)量數(shù)測定功能和離子碎裂功能的各種高分辨質(zhì)譜儀；其中串聯(lián)的液相色譜儀包括高效液相色譜儀(HPLC)以及超高效液相色譜儀(UPLC)。d :運(yùn)用質(zhì)量虧損策略，篩選譜圖中中藥制劑藥材歸屬性的成分；e:依靠高分辨質(zhì)譜儀產(chǎn)生的高準(zhǔn)確度的精確質(zhì)量數(shù)測定值預(yù)測各成分的分子式，結(jié)合誘導(dǎo)碰撞裂解產(chǎn)生的碎片信息，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫比對，確定所有歸屬性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)；f :在不進(jìn)行誘導(dǎo)碰撞裂解的質(zhì)譜條件下，對所有樣品進(jìn)行定量分析；定量分析方法包括依賴于標(biāo)準(zhǔn)品的絕對定量方法和不依賴于標(biāo)準(zhǔn)品的半定量方法，其中不依賴于標(biāo)準(zhǔn)品的半定量方法包括用峰面積或峰高進(jìn)行定量分析的方法。g:通過代謝組學(xué)相關(guān)軟件，建立數(shù)學(xué)模型，從多維空間數(shù)學(xué)模型中提取參數(shù)，計(jì)算各樣品之間的相對距離，表征其在含量上的差異，數(shù)學(xué)模型的建立應(yīng)根據(jù)6個(gè)批次以上的供試品的測定結(jié)果來計(jì)算；基于代謝組學(xué)技術(shù)的多變量統(tǒng)計(jì)分析，包括利用各種代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行的主成份分析(PCA)、偏最小二乘判別分析(PLS-DA)、偏最小二乘分析(PLS)、正交偏最小二乘分析(OPLS)、正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)、非線性映射(Nonlinemapping, NLM)、熱圖分析(Heat map)或聚類分析(HCA);其中所述軟件具體為SPSS、Metlab 或 Simca-P。本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)I本專利技術(shù)提出的質(zhì)量虧損策略，可以快速的篩選并歸屬中藥制劑中藥材歸屬性成分，其具有普適性，避免了煩瑣的數(shù)據(jù)處理和歸納。與常規(guī)的單指標(biāo)或多指標(biāo)成分含量測定的評價(jià)相比，其能夠整體性的反應(yīng)中藥制劑在生產(chǎn)過程中的變化；與指紋圖譜技術(shù)相比，該方法立足于對藥材歸屬性成分的測定和比較，并且對歸屬性成分進(jìn)行初步的結(jié)構(gòu)推測，其專屬性更強(qiáng)，能夠排除雜質(zhì)成分對評價(jià)的干擾。2體內(nèi)藥物的代謝產(chǎn)物亦具有相似的母核結(jié)構(gòu)，因此本專利技術(shù)提出的質(zhì)量虧損策略可以延伸于體內(nèi)藥物代謝產(chǎn)物的篩選。3本專利技術(shù)中運(yùn)用的液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜可以同時(shí)獲得中藥制劑藥材歸屬性組分的結(jié)構(gòu)信息和含量變化信息。通過高分辨質(zhì)譜儀提供的離子精確質(zhì)量數(shù)測定和離子的碎裂信息，能夠快速的鑒定出未知組分的分子結(jié)構(gòu)式。 4利用代謝組學(xué)技術(shù)可以綜合而全面的量化反映不同制備工藝的制劑中所有組 分(包括未知組分和已知組分)的含量變化，相對于傳統(tǒng)的單一指標(biāo)的評價(jià)形式，該方法不依賴于標(biāo)準(zhǔn)化合物，適用廣泛、評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)客觀且準(zhǔn)確。5本專利技術(shù)運(yùn)用的多變量統(tǒng)計(jì)方法能夠科學(xué)的闡明所有組分的變化趨勢，提供綜合的評價(jià)指標(biāo)。其具有客觀的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，更具科學(xué)性和準(zhǔn)確性，避免了本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種基于代謝組學(xué)技術(shù)的中藥制劑制備工藝的評價(jià)方法，其特征在于由以下幾個(gè)步驟組成：a：明確影響中藥制劑質(zhì)量的因素，通過平行對照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)或正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)制備不同工藝的中藥制劑制品，為保證準(zhǔn)確性，每種工藝平行進(jìn)行6次以上；b：根據(jù)中藥制劑所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測方法的需要，選擇適宜的方法對中藥制劑制品進(jìn)行處理，獲得中藥制劑特征性總成分提取物；c：運(yùn)用液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜聯(lián)儀，在一定的色譜質(zhì)譜分離條件下，對中藥制劑制品進(jìn)行分析，獲取特征性的總離子流色譜圖；d：運(yùn)用質(zhì)量虧損策略，篩選譜圖中各藥材歸屬性的成分；e：依靠高分辨質(zhì)譜儀產(chǎn)生的高準(zhǔn)確度的精確質(zhì)量數(shù)測定值預(yù)測各成分的分子式，結(jié)合誘導(dǎo)碰撞裂解產(chǎn)生的碎片信息，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫比對，確定所有歸屬性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)；f：在不進(jìn)行誘導(dǎo)碰撞裂解的質(zhì)譜條件下，對所有樣品進(jìn)行定量分析；g：通過代謝組學(xué)相關(guān)軟件，建立數(shù)學(xué)模型，從多維空間數(shù)學(xué)模型中提取參數(shù)，計(jì)算各樣品之間的相對距離，表征其在含量上的差異，數(shù)學(xué)模型的建立應(yīng)根據(jù)6個(gè)批次以上的供試品的測定結(jié)果來計(jì)算。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王廣基，謝彤，郝海平，梁艷，謝林，康安，戴琛，鄭嘯，劉林生，龔平，
申請(專利權(quán))人：中國藥科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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