本發明專利技術公開了一種融合人白細胞介素28B及其制備方法。本發明專利技術公開的融合蛋白是人血清白蛋白和λ干擾素連接而成的融合蛋白。實驗證明，用本發明專利技術的重組菌制備HSA-opt-hIL28B，表達量高。且表達產物具有較強的活性。因此，本發明專利技術重組菌及本發明專利技術方法在長效人IL28B的制備領域中有廣闊的應用前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種融合人白細胞介素28B及其制備方法。
技術介紹
干擾素(interfeixm，IFN)是人類最早發現的細胞因子，早在20世紀30年代，人們已發現機體感染某一種病毒后，會對另一種抗原性毫無關系的病毒發生干擾現象。1957年，英國病毒生物學家Alick Isaacs和瑞士研究人員Jean Lindenmann,在利用雞胚絨毛尿囊膜研究流感干擾現象時了解到，病毒感染的細胞能產生一種因子，后者作用于其他細胞，干擾病毒的復制，故將其命名為干擾素，并一直沿用至今。人類IFN蛋白家族基于它們的基因序列、染色體定位和受體特異性分為三型，即I型、II型和III型干擾素，其中I型IFN家族包括至少25種亞型的IFN- α非等位基因，I個IFN-β基因，lflFN-co基因，以及了解尚少的I個IFN-K和I個IFN-ε基因，所有I型INF基因均位于9號染色體，沒有內含子，并且所編碼蛋白全部使用同一種受體IFN- α β R0II型IFN家族僅有IFN-Y —個成員，又稱為免疫干擾素，基因位于12號染色體。III型干擾素是干擾素的一個新家族，包括IFNX-l、IFN-X2和IFN-X3 3個成員，IFN-λ s基因位于19號染色體，基因中含有多個內含子，其基因結構與IL-10家族成員十分相似，而與IFN-α相差甚遠，因此IFNX-l、IFN-X2和IFN-λ 3又分別被命名為IL29，IL28A和IL28B。2003 年，Stoppard P 等運用反向生物學原理，利用 Genscan、SIGNAI、4HB、WU_BLAST等生物信息學軟件鑒定了一個干擾素新家族，首次報道了其編碼產物具有干擾素樣活性(Sheppard P,Kindsvogel W,Xu W, Henderson K,Schlutsmeyer S,Whitmore TE,KuestnerR, Garrigues U, Birks C, Roraback J, Ostrander C, Dong D, Shin J,Presnell S, Fox B,Haldeman B, Cooper E, Taft D, Gilbert T, Grant FJ, Tackett M, Krivan ff, McKnightG,Clegg C, Foster D, Klucher KM. IL-28, IL-29 and their class II cytokine receptorIL-28R. Nat Immunol. 2003 Jan ；4(1) :63-8. Epub 2002 Dec 2·)。Kotenko S V 等將它們命名為干擾素新家族——IFN- λ s (IFN- λ I、IFN- λ 2和IFN- λ 3)。人類基因組組織(HumanGeneomeOrganization, HUGO)暫時將它們命名為 IL29、IL28A 和 IL28B。III型干擾素具有多種生物學功能，其刺激細胞可產生數百種干擾素誘導基因(ISGs)。在體外IFN-As可保護人細胞系抵抗水泡口炎病毒(VSV)和心肌炎病毒引起的細胞病變；IFN-λ I可抑制HBV和HCV在肝細胞中的復制(Doyle SE, SchreckhiseH,Khuu-Duong K, Henderson K, Rosier R, Storey H, Yao L, Liu H, Barahmand—pour F,Sivakumar P,Chan C,Birks C,Foster D,Clegg CH,Wietzke-Braun P,Mihm S,KlucherKM.Interleukin-29 uses a type I interferon-like program to promote antiviralresponses inhuman hepatocytes. Hepatology. 2006 Oct ；44(4) :896-906.)。稱猴接種HIV抗原后，IFN-λ s能降低Th2型細胞因子(IL-4和IL-5和IL-13和IL-14和IL-15)的產生，這可能有利于Thl免疫途徑，增加調節性T細胞，提高CD8T細胞的細胞毒性和應答記憶(Dai J, Megjugorac NJ, Gallagher GE, Yu RY, Gallagher G. IFN-Iambdal (IL-29)inhibits GATA3expression and suppresses Th2 responses in human naive and memoryT cells. Blood. 2009Jun 4 ；113(23) :5829-38.)。近年來的研究表明，IL28B 基因多態性對于HCV感染者對IFN治療的病毒學應答具有一定的影響，與細胞因子IL28B相關的單核苷酸多態性(SNPs)，不僅與慢性HCV患者聚乙二醇干擾素/利巴韋林治療應答有強相關性，還與急性HCV感染后的自發性病毒清除高度相關，說明其在群體水平上，是決定HCV感染治療結果的一個重要的宿主因素(Ge D, Fellay J, Thompson AJ, Simon JS, ShiannaKV,Urban TJ, Heinzen EL, Qiu P, Bertelsen AH, Muir AJ, Sulkowski M, McHutchison JG,Goldstein DB. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-inducedviralclearance. Nature. 2009 Sep 17 ;461 (7262) :399-401.)。目前，人們對 III 型干擾素的生物學研究主要集中在IL29和IL28A。美國zymogenetics公司與BMS聯合研發的PEG-IL29細胞因子已經進入臨床研究，并展示出良好的抗HCV前景。但是IL28B作為藥物的研究目如仍是一片空白。干擾素是最早發現、研究最多、第一個克隆化、第一個用于臨床治療疾病的一類重要的家族性細胞因子。其首先被發現的生物活性是抵抗病毒感染，隨著研究的深入，干擾素的免疫調控、抗增殖作用以及抗腫瘤作用才逐漸為人們所認識。自1986年，美國FDA首先 批準基因工程干擾素a -2a和a -2b投放市場之后，基因工程β、Y干擾素也相繼于1990年、1993年獲準投放市場。近20年以來，隨著基因工程技術的發展，目前已有約60個國家批準干擾素上市，用于治療病毒性肝炎、癌癥及多發性硬化癥等約30多種疾病。但是干擾素相對分子質量較小，易被腎小球濾過，體內不穩定，易被血清蛋白酶降解，血漿半衰期短而治療周期長，需要頻繁注射給藥。因此，為了克服以上缺點，改善重組IFNs代謝動力學及藥效學特征，近年來開發出了很多類型的長效干擾素，其設計原理主要基于以下幾個方面(I)增大干擾素的分子量，減少腎小球濾過率；(2)減少異源蛋白的免疫原性，從而減少其體內清除率；(3)持續緩慢釋放維持藥物濃度，延長藥物作用時間。主要技術手段有化學修飾技術、基因融合技術、定點突變技術以及緩釋給藥系統等。人血清白蛋白(HS本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種融合蛋白，是人血清白蛋白和λ干擾素連接而成的融合蛋白。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊威，司有輝，楊洋，程敏，
申請(專利權)人：中國醫學科學院病原生物學研究所，
類型：發明
國別省市：
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