微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒制造技術

本實用新型專利技術涉及一種微量尿白蛋白（MAU）膠體金定量檢測試劑盒，包括盒座、盒蓋和試劑條，所述試劑條固定于所述盒座中部且位于所述盒座與所述盒蓋之間，所述盒蓋上設有加樣孔與觀察口，其中，所述試劑條包括底層與上層，所述底層為塑料薄片，所述上層依次頭尾相接排列有濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記人白蛋白單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有平行的兩條檢測線和一條質控線，所述檢測線上包被有人白蛋白，所述質控線上包被有羊抗人IgG。本實用新型專利技術的微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒適合定性及定量檢測樣本中的微量尿白蛋白。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及免疫膠體金檢測試劑盒，尤其涉及微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒。
技術介紹
蛋白尿指尿蛋白定量檢查大于150mg/24h尿或定性試驗陽性。白蛋白尿陽性指定量檢查白蛋白尿>30mg/24h尿。尿白蛋白排泄率(AER)的正常值<30mg/d(20iig/min);持續的尿白蛋白排泄率介于30-300mg/d(20-200 ii g/min)稱為微量白蛋白尿；尿白蛋白排泄率超過300mg/d(200 V- g/min)即為顯性蛋白尿。目前廣泛應用于臨床尿蛋白的檢測方法主要有24h尿蛋白定量檢查、隨機尿樣尿液試紙定性檢查、隨機尿樣白蛋白定量及隨機尿樣或者晨尿白蛋白/肌酐比值(ACR)等。 24h蛋白定量檢查被目前認為是檢測蛋白尿的金標準，然而其需要準確采集24h尿液標本，不僅耗時長而且影響因素多，患者順應性差，難以常規檢測。尿液試紙定性檢查主要包括磺基水楊酸法和加熱こ酸法。標本均采集隨機尿樣，操作簡便、結果顯示快。前者與清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周蛋白均能發生反應援但有一定的假陽性。后者是經典方法，為蛋白定性確證實驗。檢測尿蛋白特異性強、干擾因素少，與清蛋白和球蛋白均能反應。試紙定性法主要缺點是檢測靈敏度低，因樣本的隨機性而影響因素多，結果變異大。此外還有一些檢測方法是半定量試紙檢測，針對常規定量檢測陰性的標本,Clinitek微量白蛋白試紙和Micral_2試紙測試可檢測微量尿白蛋白，其敏感性和特異性分別為80-97%和33%-80%。尿白蛋白定量檢查搖常規檢測方法有免疫散射比濁法、免疫透射比濁法和放射免疫法，由于采集隨機尿液檢測，因此影響因素多，結果變異大。以上內容摘自朱旻霞倪兆慧，2型糖尿病患者微量白蛋白尿的早期檢測及治療新認識，中國中西醫結合腎病雜志，2011，12 (2) :180-182。但是總體來說上述方法均不能滿足現在臨床大量樣本或少量樣本的快速精確定量測定的要求。
技術實現思路
本技術的目的是從提高檢測準確度出發，提供一種與金標讀數儀配套使用的微量尿白蛋白(MAU)膠體金定量檢測試劑盒。本技術采用了下述技術方案來解決上述技術問題 ー種微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒，包括盒座、盒蓋和試劑條，其中，所述試劑條固定于所述盒座中部且位于所述盒座與所述盒蓋之間，所述盒蓋上設有加樣孔與觀察ロ，所述試劑條包括底層與上層，所述底層為塑料薄片，所述上層依次頭尾相接排列有濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記抗人白蛋白單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有平行的兩條檢測線和一條質控線，所述檢測線上包被有人白蛋白，所述質控線上包被有羊抗鼠IgG。進ー步的，所述兩條檢測線靠近所述免疫硝酸纖維素膜的近免疫膠體金紙片端，質控線靠近所述免疫硝酸纖維素膜的近吸水紙端。進ー步的，所述盒蓋的加樣孔位于所述試劑條的濾樣紙之上，部分濾樣紙裸露于所述加樣孔之中，所述盒蓋的觀察ロ位于所述試劑條的免疫硝酸纖維素膜之上，所述免疫硝酸纖維素膜上的檢測線與質控線完全或部分裸露 于所述觀察ロ之中。進ー步的，所述加樣孔貫穿盒蓋且為方形開ロ。進ー步的，所述觀察ロ貫穿盒蓋且為方形開ロ。進ー步的，所述盒蓋與盒座的邊緣相匹配且相互粘合，或者盒蓋與盒座上設有對應的卡合或扣合連接部件，并可經所述連接部件相卡合或扣合。所述膠體金標記抗人白蛋白單克隆抗體可采用抗人白蛋白單克隆抗體常規方法標記膠體金獲得。微量尿白蛋白(MAU)檢測試劑盒(膠體金法)中試劑條的主要生產エ藝過程包括I)膠體金標記抗人白蛋白單克隆抗體用檸檬酸鈉還原法制備膠體金，并用制備好的膠體金標記抗人白蛋白單克隆抗體；2)免疫膠體金紙片的制備將膠體金-抗人白蛋白單克隆抗體稀釋到一定濃度干燥在玻璃纖維素紙片上；3)免疫硝酸纖維素膜的制備將人白蛋白溶液稀釋到適宜濃度，微機自動點膜到硝酸纖維素膜上制|I\、T2線；4)貼膜、切裁、干燥制得半成品將免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙、濾樣紙粘貼在粘膠紙上，組成MAU檢測試劑卡，將卡片分切成試劑條，干燥后即得。上述MAU膠體金檢測試劑盒的工作原理，即是利用高度特異的抗體-抗原特異結合反應及免疫膜層析技術，通過競爭抑制法來定量檢測人尿漿中出現的MAU水平。試劑盒纖維膜上的檢測線(T1、T2線)包被有人白蛋白，免疫膠體金紙片上包被有抗人白蛋白單克隆抗體膠體金復合物。檢測時，被檢樣品首先與抗人白蛋白單克隆抗體膠體金混合，并沿纖維膜向上層析依次通過T1線、T2線、C線。如果樣品中有MAU存在，MAU首先和抗人白蛋白單克隆抗體膠體金結合，形成“尿白蛋白-杭人白蛋白單克隆抗體膠體金復合物”，在層析至檢測線時，由于抗體位點被結合而不能與檢測線上的尿白蛋白結合，僅在質控線出現ー紅色條帶。如果樣品中沒有MAU，抗人白蛋白單克隆抗體層析至檢測線時，會與檢測線上的人白蛋白結合，而在檢測區上呈現1-2條紅色條帶。在試紙條上的質控區(C線)包被有羊抗人IgG，以指示試劑盒反應系統工作是否正常。質控線的出現與MAU的存在無關。質控區色帶的出現表明①樣品加入量充足；②樣品在紙條上運行正常。本技術試劑盒的使用方法為I.將試劑盒放置在水平臺面上。2.用加樣吸管吸取樣品，然后滴3滴(約120ul)樣品到試劑盒的加樣孔中。每檢測ー份不同的樣品注意要使用不同的吸管。3.觀察結果在滴加樣品后3-8分鐘判讀結果，顯色穩定后插入金標讀數儀插槽內進行定量檢測。檢測結果的定性判斷方法陽性在結果觀察窗口內出現一條色帶，即質控線(C線)位置出現一條紅色線條，表示樣品中有MAU存在。陰性在結果觀察窗ロ的質控線(C線)位置出現一條紅色線條，檢測線(1\、T2線)出現一條或兩條線條，表示樣品無MAU存在。無效質控線(C線)不出現。任何情況下，C線均應形成，表示加樣和操作正確。C線未出現表明測試結果是不確定的，應重做。本技術提供的微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒敏感性高、特異性強、操作簡便省吋，檢測結果準確、穩定，適合定性及定量檢測樣本中的微量尿白蛋白。 附圖說明圖I :MAU膠體金定量檢測試劑盒示意圖圖2:去盒蓋的MAU膠體金定量檢測試劑盒示意圖圖3:MAU膠體金定量檢測試劑盒的試劑條側視示意圖具體實施方式如圖1-3所示微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒，包括盒座I、盒蓋2和試劑條3，其中，試劑條3固定于盒座I中部且位于盒座I與盒蓋2之間，盒蓋上設有加樣孔12與觀察ロ 13。試劑條3包括底層與上層，底層為塑料薄片4，上層依次頭尾相接排列有濾樣紙5、免疫膠體金紙片6、免疫硝酸纖維素膜7和吸水紙8，免疫膠體金紙片6上包被有膠體金標記抗人白蛋白單克隆抗體，免疫硝酸纖維素膜7上設有平行的兩條檢測線9、10和一條質控線11，檢測線9、10上包被有人白蛋白，質控線11上包被有羊抗鼠IgG。進ー步的，所述兩條檢測線9、10靠近免疫硝酸纖維素膜7的近免疫膠體金紙片端，質控線11靠近免疫硝酸纖維素膜7的近吸水紙端。進ー步的，盒蓋的加樣孔12位于試劑條的濾樣紙5之上，部分濾樣紙裸露于加樣孔12之中，盒蓋的觀察ロ 13位于試劑條的免疫硝酸纖維素膜7之上，免疫硝酸纖維素膜上的檢測線9、10與質控線11完全或部分裸露于觀察ロ 13之中。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種微量尿白蛋白膠體金定量檢測試劑盒，包括盒座、盒蓋和試劑條，所述試劑條固定于所述盒座中部且位于所述盒座與所述盒蓋之間，所述盒蓋上設有加樣孔與觀察口，其特征在于，所述試劑條包括底層與上層，所述底層為塑料薄片，所述上層依次頭尾相接排列有濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記抗人白蛋白單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有平行的兩條檢測線和一條質控線，所述檢測線上包被有人白蛋白，所述質控線上包被有羊抗鼠IgG。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張國華，
申請(專利權)人：上海凱創生物技術有限公司，
類型：實用新型
國別省市：