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    菊糖芽孢乳桿菌的D-乳酸脫氫酶及其編碼基因與應用制造技術

    技術編號:7951593 閱讀:341 留言:0更新日期:2012-11-08 21:10
    本發明專利技術公開了一種來源于菊糖芽孢乳桿菌(Sporolactobacillus?inulinus)的D-乳酸脫氫酶及其編碼基因與應用。本發明專利技術所提供的D-乳酸脫氫酶是如下(a)或(b):(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質;(b)將序列1的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有D-乳酸脫氫酶活性的由序列1衍生的蛋白質。本發明專利技術所提供的D-乳酸脫氫酶能夠以NADH為輔酶,也可以NADPH為輔酶,催化丙酮酸生成D-乳酸,也能以NADH為輔酶催化苯基丙酮酸生成D-苯基乳酸,且生成產物光學純度可達100%(無L型產物生成),具有廣闊的工業應用前景。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及一種來源于菊糖芽孢乳桿菌(Sporolactobacillus inulinus)的D-乳酸脫氫酶及其編碼基因與應用。
    技術介紹
    3-苯基乳酸,即2-羥基-3-苯基丙酸,是一種重要的化學合成前體,并廣泛應用于醫藥、化工和生物合成等領域。近幾年來,它作為一種新型的抑菌劑又受到食品行業的廣泛關注。3-苯基乳酸的第二個碳原子是手性碳,有兩種構型,即D-苯基乳酸和L-苯基乳 酸,這兩種構型化合物對生物體的作用及其在醫藥、化工方面的應用不同。D-苯基乳酸,又名D-3-苯基乳酸、D-2-羥基-3-苯丙酸或(R) -2-羥基-3-苯基丙酸(CAS號7326_19_4)。D-苯基乳酸可用于合成降血糖藥、驅腸蟲藥,并對人體內類固醇的水平有一定的調節作用。D-苯基乳酸是用于制備4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸的手性砌塊,也是制備降血糖助劑英格列酮以及15N-標記苯基丙氨酸的起始物。3-苯基乳酸的制備主要為化學合成法。3-苯基乳酸的化學合成主要有以下幾種方法(I)吖內酯鋅汞齊還原法;(2)由β -苯基丙烯酸鋅汞齊還原法;(3)用苯甲醛經縮合、開環、水解、還原等幾步反應制得。這些方法都在不同程度上存在技術復雜、污染環境、產品不純、光學純度低而不能得到單一構型化合物等缺點,因而近幾年來轉向了生物合成法的開發與研究。1996年,日本學者Hashimoto等從土壤中篩選到了一株假單胞菌(Pseudomonas sp.),能夠轉化苯乙醒_氰醇為D-苯基乳酸,生成的D-苯基乳酸光學純度僅為75%。2002年,Katrin等從青忙草中也分離到了一株植質乳桿菌(Lactobacillusplantarum),它產生的D-苯基乳酸光學純度僅為90%。美國Diversa公司開發了利用腈酶(EC 3. 5. 5. I)制備光學純度大于99%的D-苯基乳酸。
    技術實現思路
    本專利技術的目的是提供一種具有D-乳酸脫氫酶活性的蛋白,該蛋白來源于菊糖芽 包乳桿菌(Sporolactobacillus inulinus)。本專利技術所提供的具有D-乳酸脫氫酶活性的蛋白,是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質;(b)將序列I的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有D-乳酸脫氫酶活性的由序列I衍生的蛋白質。上述(b)中的蛋白質可人工合成,也可先合成其編碼基因,再進行生物表達得到。上述(b)中的蛋白質的編碼基因可通過將序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子,和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變。序列表中序列I由335個氨基酸殘基組成。為了便于所述蛋白的純化,可在由序列表中序列I的氨基酸殘基序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如下表所示的標簽。表標簽的序列本文檔來自技高網
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    【技術保護點】
    蛋白質,是如下(a)或(b):(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質;(b)將序列1的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有D?乳酸脫氫酶活性的由序列1衍生的蛋白質。

    【技術特征摘要】
    1.蛋白質,是如下(a)或(b) Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質; (b)將序列I的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有D-乳酸脫氫酶活性的由序列I衍生的蛋白質。2.編碼權利要求I所述蛋白質的核酸分子。3.根據權利要求2所述的核酸分子,其特征在于所述核酸分子是編碼權利要求I所述蛋白質的基因;所述基因是如下I)至4)中任一所述的DNA分子 1)編碼序列為序列表中序列2的DNA分子; 2)序列表中序列2所示的DNA分子; 3)在嚴格條件下與I)或2)限定的DNA分子雜交且編碼權利要求I所述蛋白質的DNA分子; 4)與I)或2)或3)限定的DNA分子具有80%以上同源性且編碼權利要求I所述蛋白質的DNA分子。4.含有權利要求2或3所述核酸分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌;所述重組載體...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:馬延和于波王麗敏朱凌峰
    申請(專利權)人:中國科學院微生物研究所
    類型:發明
    國別省市:

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