本發明專利技術公開了一種檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的試劑盒。本發明專利技術提供了一種檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的試劑盒，包括用于檢測VSTM1蛋白表達的裝置和用于檢測VSTM1蛋白表達試劑；所述VSTM1蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列1。本發明專利技術的實驗證明，本發明專利技術發現了VSTM1蛋白的表達與髓系細胞的分化有關，因此得到了一種檢測急性髓系白血病髓系細胞分化階段的試劑盒，利用該試劑盒檢測VSTM1蛋白表達的表達量，從而判斷出急性髓系白血病髓系細胞的不同分化階段，更詳細和及早的反應急性髓系白血病的分化過程，將在白血病的診治中發揮重要作用。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物
，尤其涉及一種檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的試劑盒。
技術介紹
白血病是以造血細胞分化阻滯為特征的一類惡性疾病，目前根據累及的細胞類別不同分為淋巴細胞白血病、髓系白血病、紅白血病及巨核細胞白血病等。其中以急性髓系白血病(AML)因髓系細胞分化阻滯階段不同而呈現很大的異質性。傳統的對AML的FAB分型已經不足以反映AML的特征，臨床應用有限。因此，目前廣泛運用的WHO的分型將AML的免疫標志物表達(免疫分型)、細胞遺傳學改變及分子生物學(融合基因、突變)等納入分類因素，更詳細的反映了 AML的真實特征及其與預后的關系，對臨床治療的指導意義更大。 雖然目前可用多種免疫標志物、分子標志物或遺傳學改變將不同臨床特點的AML亞型分別開來，但是仍有大部分AML尚無明確的分子標志物將其分別開來而被歸為未分型組，僅能參照FAB的分型粗略地將其劃分到大致的分化階段。尋找新的、更精確反映白血病分化階段的免疫標志物或分子標志物，研究其與臨床的關系將是深入認識不同亞型AML從而實現精密的個體化治療的前提。VSTMl (V-set and transmembrane domain containing I)是由北京大學人類疾病基因研究中心新發現的一種潛在的細胞因子編碼基因。人類VSTMl基因定位于染色體19ql3. 42，存在五種剪切體，其中VSTMl-vl和VSTMl_v2是兩種主要形式。VSTMl-vl為I型膜蛋白，在NK、T、B、單核和粒細胞中廣泛表達，在大多數腫瘤來源的細胞系中表達缺失；VSTM1-V2為經典分泌的糖蛋白，能促進外周血⑶4+T細胞分泌IL-17A。
技術實現思路
本專利技術的一個目的是提供一種檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的試劑盒。本專利技術提供的試劑盒，包括流式細胞儀和用于檢測VSTMl蛋白的抗體組；所述VSTMl蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列I ;所述用于檢測VSTMl蛋白的抗體組包括抗VSTMl抗體。上述試劑盒中，所述用于檢測VSTMl蛋白的抗體組還包括抗⑶45抗體、抗⑶33抗體和抗⑶34抗體。上述試劑盒中，所述用于檢測VSTMl蛋白的抗體組由抗VSTMl抗體、抗⑶45抗體、抗⑶33抗體和抗⑶34抗體。上述試劑盒中，所述抗VSTMl抗體、抗⑶45抗體、抗⑶33抗體和抗⑶34抗體均用不同熒光素標記；所述抗VSTMl抗體具體為VSTM1-FITC，所述抗CD45抗體具體為CD45-PerCP、所述抗CD33抗體具體為CD33-APC，所述抗CD34抗體具體為CD34-PE。上述試劑盒中，所述試劑盒還包括記載在載體上的5種判斷標準I)若表達VSTMl的陽性細胞占幼稚細胞百分比為12. 40%和/或VSTMl蛋白平均熒光強度為12. 90，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為MO或Ml ；2)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為12. 71%和/或VSTMl平均熒光強度為33. 13，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M2 ；3)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為95. 26%和/或VSTMl平均熒光強度為106. 28，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M3 ；4)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為18. 59%和/或VSTMl平均熒光強度為33. 68，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M4 ； 5)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為47. 35%和/或VSTMl平均熒光強度為120. 23，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M5。上述試劑盒中，所述髓系白血病細胞為急性髓系白血病細胞。上述的試劑盒在制備檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的產品中的應用。上述應用中，所述試劑盒由所述流式細胞儀、所述用于檢測VSTMl蛋白的抗體組和所述記載在載體上的5種判斷標準組成；所述髓系白血病細胞為急性髓系白血病細胞。上述急性髓系白血病細胞分化階段為如下5種分化階段的任意一種1)M0或Ml ；2) M2 ；3)M3 ；4)M4 ;5)M5。上述應用為將待測髓系白血病細胞用上述試劑盒進行檢測，I)若表達VSTMl的陽性細胞占幼稚細胞百分比為12. 40%和/或VSTMl蛋白平均熒光強度為12. 90，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為MO或Ml ；2)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為12. 71%和/或VSTMl平均熒光強度為33. 13，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M2 ；3)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為95. 26%和/或VSTMl平均熒光強度為106. 28，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M3 ；4)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為18. 59%和/或VSTMl平均熒光強度為33. 68，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M4 ；5)若表達VSTMl陽性細胞占幼稚細胞百分比為47. 35%和/或VSTMl平均熒光強度為120. 23，則所述髓系白血病細胞的分化階段為或候選為M5。上述VSTMl蛋白在開發、設計和/或制備檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的產品中的應用也是本專利技術保護的范圍；所述髓系白血病細胞具體為急性髓系白血病細胞；所述急性髓系白血病細胞分化階段具體為如下5種分化階段中的任一一種1)M0或Ml ；2)M2 ；3)M3 ；4)M4 ;5)M5。本專利技術的實驗證明，本專利技術發現了 VSTMl蛋白的表達與髓系細胞的分化有關，因此得到了一種檢測急性髓系白血病髓系細胞分化階段的試劑盒，利用該試劑盒檢測VSTMl蛋白的表達，從而判斷出急性髓系白血病髓系細胞的不同分化階段，更詳細和及早的反應AML的分化過程，對臨床治療的指導意義更大。附圖說明圖I為VSTMl在正常供者骨髓各細胞亞群中的表達示例2為VSTMl在正常供者不同分化階段的髓系細胞中的表達示例3為VSTMl在正常供者不同分化階段的髓系細胞中的表達示例4為VSTMl在正常供者不同分化階段的髓系細胞中的表達水平圖5為VSTMl在白血病骨髓細胞中的表達示例6為VSTMl在不同亞型AML中的表達示例7為AML急性髓系白血病骨髓細胞中VSTMl的表達圖8為VSTMl在M5中的表達與⑶34表達水平有關圖9為ATRA誘導分化后NB4細胞VSTMl的表達和⑶I Ib的表達 圖10為K562細胞ATRA誘導后VSTMl的表達圖11為APL細胞經ATRA處理后VSTMl的mRNA和蛋白的表達具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到，部分具體列如下I、小牛血清、RPMI1640 :購自GIBCO公司。2、TRIzol 試劑購自 Invitrogen 公司3、隨機引物、M-MLV逆轉錄酶購自Promega公司。4、急性早幼粒細胞白血病細胞系NB4 (NB4細胞購自北京欣興唐生物科技有限公司，產品目錄號為CL007 ；)。6、6孔、24孔及96孔培養板購自Corning公司。7、熒光素標記的單克隆抗體CD45-PerCP(產品目錄號347464)、CD33-APC(產品目錄號340474)、CD13-APC (產品目錄號55本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種檢測或輔助檢測髓系白血病細胞分化階段的試劑盒，包括流式細胞儀和用于檢測VSTM1蛋白的抗體組；所述VSTM1蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列1；所述用于檢測VSTM1蛋白的抗體組包括抗VSTM1抗體。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃曉軍，阮國瑞，謝敏，韓文玲，馬大龍，陳珊珊，劉艷榮，李婷，冷馨，王緒華，
申請(專利權)人：北京大學人民醫院，
類型：發明
國別省市：
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