DLK1在肝癌診斷及預后判斷中的應用制造技術

本發明專利技術涉及一種DLK1在肝癌診斷及預后判斷中的應用。具體地，本發明專利技術提供了前脂肪細胞因子-1(DLK1蛋白)在(a)制備肝癌預后檢測的診斷試劑或試劑盒以及(b)制備血清檢測肝癌的診斷試劑或試劑盒中的用途。本發明專利技術還提供了相應檢測試劑盒。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及腫瘤學和診斷領域。更具體地，本專利技術涉及DLKl在肝癌診斷及預后判斷中的應用。
技術介紹
DLKl (Delta-like I homologue)，也被稱為 Pref-I (前脂肪細胞因子-I)，是首先在神經母細胞瘤發現并克隆的基因(Laborda J et al，J Biol Chem，1993，268 (6)3817-3820)，定位于人染色體人14q32。DLKl蛋白在細胞分化方面起到一定的作用，尤其在內胚層起源的肝細胞、呼吸道上皮細胞中有表達，隨著胎兒胎齡的增加，正常組織中DLKl的表達逐漸減少。 人基因Dlkl (GeneBank登錄號BC007741)全長1557bp，開放閱讀框含有1152個核苷酸，編碼383個氨基酸殘基。DLKl蛋白是一種跨膜蛋白，包含細胞內信號肽，中間跨膜區及細胞外區，其中細胞外區由6個表皮生長因子樣(epidermal growth factor-likerepeat, EGF-Iike repeat)串聯重復組成。因此DLKl屬于EGF樣超家族的成員之一。DLKl蛋白通過胞外結構域的糖基化以及同源和異源二聚體來調節其細胞生物學活性，根據其糖基化程度的不同，DLKl蛋白的分子量約在45-60kD之間。其胞外結構域上有兩處蛋白酶加工的位點，在跨膜區近側，經蛋白酶作用后，會產生分泌性蛋白片段，釋放到細胞外發揮其生物學效應。DLKl在人和嚙齒類胚肝中高表達，但成體肝組織中無表達。DLKl與肝臟纖維化甚至肝硬化密切相關。有報道稱，在小鼠中DLKl可以作為一個肝干細胞標志富集肝母細胞，而且DLKl陽性的肝細胞可進一步分化成為肝細胞和膽管上皮細胞(Oertel M et al,Gastroenterology，2008 :134 :823-832 ;Tanimizu N et al, J Cell Sci，2003 :116 :1775-1786)。目前發現DLKl在多種腫瘤中的表達上調，其中包括小細胞肺癌(Laborda Jet al,J Biol Chem，1993 :268 :3817-3820)、神經內分泌腫瘤(Yin D etal, Oncogene, 2006 25 1852-1861)和肝癌(Jin ZH et al, Expert Opin Biol Ther 2008 :8 :371-377 ;Dezso Ket al, Virchows Arch, 2008 :452 :443-448 ；Huang J et al, Carcinogenesis, 2007 :28 1094-1103)等。本專利技術人前期研究表明，DLKl在肝癌組織中的表達顯著上調(71.9%)，而且外源性表達DLKl可以明顯促進肝癌細胞系的體外增殖和裸鼠體內成瘤能力(Yu Fet al,Liver International,2010 :1478-3223)。原發性肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我國最常見惡性腫瘤之一，占居民腫瘤死亡第二位。肝癌出現癥狀時多屬中晚期，切除后復發、轉移率高。因此，肝癌的早期診斷以及預后判斷對延長患者的生存時間和降低肝癌死亡率具有重要意義。目前肝癌的診斷主要依靠影像學檢查、肝穿刺組織學檢查等方法，然而這些檢測方法均具有一定的局限性。例如即使是很好的細針穿刺仍因取材有限而有較高的假陰性率，并且有使腫瘤擴散和針道種植的危險。癌癥的血清學檢測技術一直是研究的重點。然而，目前現有的針對癌癥(如HCC)檢測尚缺乏令人滿意的血清標志物，更缺乏可用于血清檢測或肝癌預后檢測的血清標志物。因此，本領域迫切需要開發可用于血清檢測或肝癌預后檢測的血清特異標志物。
技術實現思路
本專利技術的目的就是提供一種可用于血清檢測或肝癌預后檢測的血清特異標志物。在本專利技術的第一方面，提供了前脂肪細胞因子-UDLKl蛋白)或其特異性抗體的用途，它被(a)用于制備肝癌預后檢測的診斷試劑或試劑盒；或(b)用于制備血清檢測肝癌的診斷試劑或試劑盒。在另一優選例中，所述的DLKl蛋白或其特異性抗體偶聯有或帶有可檢測標記。在另一優選例中，所述可檢測標記選自下組生色團、化學發光基團、熒光團、同位 素或酶。在另一優選例中，所述診斷試劑是單克隆抗體。在另一優選例中，所述的特異性抗體是單克隆抗體。在另一優選例中，所述的肝癌預后檢測是血清檢測。在另一優選例中，所述的血清檢測是ELISA法、或雙抗夾心時間分辨免疫熒光法(TRFIA 法)。在另一優選例中，所述的DLKl蛋白包括全長DLKl蛋白、或其分泌性蛋白。在另一優選例中，人DLKl蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。在另一優選例中，人DLKl蛋白的分泌性蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO :2中第24-303 位。在本專利技術的第二方面，提供了一種用于肝癌預后檢測的診斷試劑盒，其中所述的試劑盒含有一容器，所述容器中含有DLKl蛋白或其特異性抗體；以及標簽或說明書，所述標簽或說明書注明所述試劑盒用于檢測肝癌或肝癌預后檢測。在另一優選例中，所述的DLKl蛋白或其特異性抗體偶聯有或帶有可檢測標記。在另一優選例中，所述的標簽或說明書中注明以下內容(i)如果檢測對象的血清DLKl濃度彡1000pg/ml (較佳地彡1500pg/ml,更佳地^ 2000pg/ml)，則該對象發生肝癌的幾率大于正常人群；和/或(ii)如果檢測對象的血清DLKl濃度彡890pg/ml (較佳地彡1000pg/ml,更佳地^ 1200pg/ml)，則該對象的肝癌預后較差，即該對象的生存期短于一般肝癌患者(或DLKl陰性的肝癌患者)生存期的概率高。在另一優選例中，進行肝癌預后檢測的對象是肝癌患者。在另一優選例中，所述的DLKl陰性的肝癌患者指血清DLKl濃度< 890pg/ml，較佳地< 700pg/ml,更佳地< 600pg/ml。在另一優選例中，所述肝癌包括肝細胞肝癌，尤其是原發性肝細胞肝癌。在另一優選例中，所述的DLKl蛋白或其特異性抗體偶聯有或帶有可檢測標記。在另一優選例中，所述可檢測標記選自下組生色團、化學發光基團、熒光團、同位素或酶。在另一優選例中，所述的抗體是單克隆抗體。在本專利技術的第三方面，提供了一種前脂肪細胞因子-UDLKl蛋白)的用途，它被用作肝癌預后檢測的標志物。在另一優選例中，所述的檢測是血清檢測。在本專利技術的第四方面，提供了一種前脂肪細胞因子-UDLKl蛋白)的拮抗劑的用途，它被用于制備提高肝癌預后的藥物。在另一優選例中，所述的拮抗劑包括針對DLKl的siRNA、反義RNA、抗體、或其組口 o 應理解，在本專利技術范圍內中，本專利技術的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說明圖I顯示了 DLKl的氨基酸序列(SEQ ID NO. :2)，其中DLKl分泌性蛋白位于第24-303 位。圖2顯示了肝癌患者血清中DLKl濃度明顯高于健康對照組(P < 0. 05)。圖3顯示了血清DLKl的ROC曲線。其中，ROC曲線下面積為0. 512±0. 029 (95%可信區間為0. 455和0. 570)。cut-本文檔來自技高網...

【技術保護點】
前脂肪細胞因子？1(DLK1蛋白)或其特異性抗體的用途，其特征在于，(a)用于制備肝癌預后檢測的診斷試劑或試劑盒；(b)用于制備血清檢測肝癌的診斷試劑或試劑盒。

【技術特征摘要】
1.前脂肪細胞因子-UDLKl蛋白)或其特異性抗體的用途，其特征在于，(a)用于制備肝癌預后檢測的診斷試劑或試劑盒；(b)用于制備血清檢測肝癌的診斷試劑或試劑盒。2.如權利要求I所述的用途，其特征在于，所述的DLKl蛋白或其特異性抗體偶聯有或帶有可檢測標記。3.如權利要求2所述的用途，其特征在于，所述可檢測標記選自下組生色團、化學發光基團、熒光團、同位素或酶。4.如權利要求I所述的用途，其特征在于，所述診斷試劑是單克隆抗體。5.如權利要求I所述的用途，其特征在于，所述的肝癌預后檢測是血清檢測。6.如權利要求I所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李錦軍，李紅，葛超，
申請(專利權)人：上海市腫瘤研究所，
類型：發明
國別省市：