本發(fā)明專利技術(shù)涉及禾本科(Poaceae)(真禾本科(truegrasses))第5組變應原的重組變體的制備和使用，其特征在于與已知野生型變應原相比，IgE反應性降低，并同時基本保留與T-淋巴細胞的反應性。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及禾本科(Poaceae)(真禾本科(true grasses))第5組變應原重組變體的制備和使用，其特征在于與已知野生型變應原相比，降低IgE反應性，并同時基本保留與T-淋巴細胞的反應性。降低IgE反應性主要通過某些脯氨酸殘基的取代或缺失來實現(xiàn)，所述脯氨酸殘基在第5組變應原中高度保守。另外，已認識到第211位氨基酸脯氨酸(Phl P 5. 0109編號)是特異性影響變體在水性制劑中的溶解行為的關(guān)鍵位置。這些低變應原性的變應原變體可用于患有禾草(grass)花粉變態(tài)反應的患者的特異性免疫治療(脫敏作用)，或用于防止禾草花粉變態(tài)反應發(fā)展的預防性治療中。 本專利技術(shù)優(yōu)選實施方案涉及來自梯牧草(Timothy grass) iphleuni p:mt￡mse)H的主要變應原Phl p 5的變體。
技術(shù)介紹
I型變態(tài)反應具有全球重要性。工業(yè)化國家中有多達20%的人口遭受諸如變態(tài)反應性鼻炎、結(jié)膜炎或支氣管哮喘等疾病。這些變態(tài)反應由各種起源的來源引起，例如樹木和禾草(花粉)、真菌(孢子)、螨(糞便)、貓或狗。變應原來源可直接釋放到空氣中(花粉、孢子)，或可與柴油機灰粒(花粉)或室內(nèi)塵埃(螨糞便、皮膚顆粒、毛發(fā))結(jié)合而到達空氣中。因為變態(tài)反應-觸發(fā)物質(zhì)位于空氣中，所以亦使用術(shù)語空氣源性變應原(aeroalIergen)。I型變態(tài)反應-觸發(fā)物質(zhì)為蛋白質(zhì)、糖蛋白或多肽。這些變應原經(jīng)由粘膜攝取后，在致敏人群中與結(jié)合在肥大細胞表面的IgE分子反應。如果這些IgE分子通過變應原相互交聯(lián)，其結(jié)果是效應細胞分泌介質(zhì)(例如組胺、前列腺素)和細胞因子，并因此產(chǎn)生相應的變態(tài)反應癥狀。多達40%的I型變態(tài)反應患者對真禾本科花粉提取物表現(xiàn)出特異IgE反應性(Burney 等，1997，J. Allergy Clin. Tmmunol. 99:314-322 ;D，Amato 等，1998，Allergy 53: 567-578 ；Freidhoff 等,1986, J. Allergy Clin Immunology, 78,1190-2002)。真禾本科(禾本科)包括10000個以上的物種，迄今認為其中超過20種為變態(tài)反應癥狀的觸發(fā)物(Andersson 和 Lidholm, 2003, Int. Arch. Allergy Tmmunol.130:87-107 ；Esch, 2008, Allergy and Allergy Immunotherapy, Clinical Allergy andImmunology Series, 107-126)。大多數(shù)變態(tài)反應-觸發(fā)性真禾本科屬于早熟禾亞科(Pooideae) 0除作為野生形式存在的禾草物種外，例如絨毛草Qlolcus Iana tus)(絨毛草)、喜濕薦草{PImlarisaquatica)(金絲雀薦草)、黃花茅(Anthoxanthum odoraturn)(黃花草)、鴨茅{Dactylisglomerata)(果園草)、牛尾草{pestuca pratensis)(牛尾草)、草地早熟禾、Poapra tensis)(肯塔基藍草)或多年生黑麥草{Lolium perenne)(黑麥草)，栽培谷類植物例如普通小麥 ijriticum aestivum)(小麥)、黑麥{Secale cereale、(黑麥)和大麥(BordeumVUI gar e)(大麥)亦是該亞科的已知成員。關(guān)于其變應原研究得最為透徹的早熟禾亞科(Pooideeie)物種之一是梯牧草，梯牧草作為野生植物在世界范圍內(nèi)廣泛分布，作為牧草植物和耐寒性飼用草(hardy feedgrass)還有商業(yè)作用。依據(jù)人群中單種變應原分子與變態(tài)反應患者的IgE抗體反應的相對頻率,對主要和次要變應原作了區(qū)分。梯牧草中以下六種變應原可視為主要變應原Phl P I (Petersen等，1993，J.Allergy Clin. Tmmunol. 92: 789-796)、Phl p 5 (Matthiesen 和 L5wenstein, 1991,Clin. Exp. Allergy 21: 297-307 ;Petersen 等，1992, Int. Arch. Allergy Tmmunol ·98: 105-109)、Phl p 6 (Petersen 等，1995，Int. Arch. Allergy Tmmunol. 108,49-54)、Phl p 2/3 (Dolecek 等，1993，F(xiàn)EBS 335 (3) : 299-304)、Phl p 4 (Haavik等，1985，Int. Arch. Allergy AppI. Tmmunol. 78: 260-268 ；Valenta 等，1992， Int. Arch. Allergy Tmmunol · 97: 287-294 ；Nandy 等,Biochem. Biophys. Res.Commun. , 2005, 337(2) : 563-70)和 Phl p 13 (Suck 等，2000，Clin. Exp. Allergy30: 1395-1402)。梯牧草中占優(yōu)勢的主要變應原為Phl P I和Phl P 5 (Andersson和Lidholm,2003, Int. Arch. Allergy Tmmunol. 130:87-107),其中 Phl p 5 以兩種形式存在，即5a和5b，其由獨立的基因編碼，在分子量上有差別。按照變應原的正式命名法，將Phl P5a稱為Phl P 5. 01而將Phl p 5b稱為Phl p 5. 02 (WH0/IHS變應原命名小組委員會，www.allergen.org)。Phl p 5a和Phl p 5b 二者的氨基酸序列都來源于克隆的cDNA序列。已鑒定兩種同工型的天然變體，兩者通過點突變區(qū)別于彼此，對應于不同的等位基因形式(Vrtala 等，1993，J. Immunol. , 151: 4773-4781 ;Gelhar 等，1997，Eur. J.Biochem. , 247: 217-23)。這些變體在 WH0/IUIS 數(shù)據(jù)庫中記錄為 Phl p 5. Olxx 和 Phl p5. 02χχο天然Phl P 5a (nPhl p 5a)為約32 kDa的蛋白質(zhì),與85-90%的禾草花粉變態(tài)反應患者的 IgE 抗體反應(Rossi 等，2000, Allergy Int. , 49: 93-97)。來自禾本科特別是早熟禾亞科的親緣真禾本科物種(例如多年生黑麥草和草地早熟禾)的花粉，含有與Phl P 5同源的變應原，將其和Phl P 5—起稱作第5組變應原。這些第5組變應原的高度結(jié)構(gòu)同源性相應地導致分子與IgE抗體的高度交叉反應性(Lorenz等，2009，Int. Arch. Immunol. 148:1_17)。最終,這種交叉反應性意味著一種禾草物種的敏化可足可以觸發(fā)其它親緣禾草的變態(tài)反應。第5組變應原的高度交叉反應性根本上是基于同源變應原的相似一級序列。這通過所選早熟禾亞科物種的第5組變應原的氨基酸序列比較來顯示(圖I)。除第5組變應原彼此間的交叉反應性外，亦已知Phl P 5與本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：M瓦爾德，A南迪，H菲比希，B韋伯，H卡勒特，G雷澤，O克倫威爾，
申請(專利權(quán))人：默克專利股份公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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