本發(fā)明專利技術(shù)涉及復(fù)方免疫增強(qiáng)劑及其在制備獸用疫苗中的應(yīng)用。復(fù)方免疫增強(qiáng)劑含有0.5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000μg/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、5～2000μg/mL的β-葡聚糖和5～2000μg/mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQIDNO.1所示。本發(fā)明專利技術(shù)復(fù)方免疫增強(qiáng)劑與H9亞型禽流感滅活疫苗混合，可縮短免疫窗口期2周，抗體持續(xù)期延長(zhǎng)8周，對(duì)H9亞型同型毒株攻擊產(chǎn)生消除性免疫保護(hù)，降低配制疫苗用的抗原含量。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及。
技術(shù)介紹
畜禽各類傳染病的滅活疫苗，對(duì)防控這些疫病發(fā)揮了重要作用。使用滅活疫苗希望能夠達(dá)到消除性免疫，即在接受某種疫苗免疫后，完全保護(hù)機(jī)體免受此類疫病的感染發(fā)發(fā)病，或者在感染后不排毒，不將病毒傳播給其它動(dòng)物。但現(xiàn)有疫苗在應(yīng)用中仍存在一定的缺陷,疫苗質(zhì)量有待于進(jìn)一步改善。這些缺陷包括以下方面?，F(xiàn)有滅活疫苗免疫機(jī)體后抗體產(chǎn)生較慢，抗體持續(xù)期較短，抗體水平整齊度差。常 規(guī)滅活疫苗免疫后3周，才能對(duì)同型病毒的攻擊提供保護(hù)。由于動(dòng)物個(gè)體間的抗體水相差較大，導(dǎo)致群體抗體離散度大。在規(guī)模化養(yǎng)殖條件下，群體中少部分動(dòng)物因抗體水平較低而發(fā)病，可能會(huì)波及整群發(fā)病，帶來災(zāi)難性的后果。臨床生產(chǎn)中常規(guī)疫苗抗體持續(xù)期約為3-4個(gè)月。為了使抗體水平整齊度較好，同時(shí)使維持較高的抗體水平，一般需多次免疫。這將加大人力投入，同時(shí)增加對(duì)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)，影響生產(chǎn)性能和飼料報(bào)酬。通常，獸用滅活疫苗配制中抗原用量較多。一方面，疫苗抗原純化工藝不成熟，表現(xiàn)在疫苗抗原中雜蛋白較多，導(dǎo)致副反應(yīng)較大。另外一方面，現(xiàn)有禽用滅活多聯(lián)疫苗在配制時(shí)需進(jìn)行抗原濃縮，以保證疫苗中的抗原含量和疫苗的免疫效果，但增加疫苗的生產(chǎn)成本。臨床生產(chǎn)亟需通過合適的技術(shù)方法，在保證較好的抗體水平情況下，有效降低抗原用量，降低副反應(yīng)。禽用細(xì)菌滅活苗存在免疫原性較弱，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體效價(jià)低等缺陷。由副雞嗜血桿菌為抗原制備的雞傳染性鼻炎疫苗也存在此類缺陷。但單純從提高由副雞嗜血桿菌抗原量來提高抗體效價(jià)，不但使得生產(chǎn)成本提高，也導(dǎo)致疫苗副反應(yīng)增大，難以吸收。臨床應(yīng)用中需要一種技術(shù)克服以上缺點(diǎn)。專利技術(shù)內(nèi)容本專利技術(shù)的目的之一是提供一種復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，該復(fù)方免疫增強(qiáng)劑能夠縮短現(xiàn)有疫苗免疫窗口期，顯著提高抗體效價(jià)，提高抗體整齊度，延長(zhǎng)抗體持續(xù)期，有效降低抗原用量和產(chǎn)生消除性免疫。本專利技術(shù)的目的之二是提供復(fù)方免疫增強(qiáng)劑的制備方法，該方法簡(jiǎn)單易操作。本專利技術(shù)的目的之三是提供禽用疫苗，該禽用疫苗含有上述復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，疫苗的免疫窗口期縮短，抗體效價(jià)高，抗體整齊度高，抗體持續(xù)期長(zhǎng)，抗原用量降低，并且能夠產(chǎn)生消除性免疫。本專利技術(shù)的目的之四是提供所述禽用疫苗的制備方法，該方法簡(jiǎn)單易操作。采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)上述目的一種復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，含有0. 5 100 u g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 1000V- g/mL的a -半乳糖基神經(jīng)酰胺、5 2000 u g /mL的P -葡聚糖和5 2000 u g /mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO. I所示。該復(fù)方免疫增強(qiáng)劑含有0. 5 5 i! g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 100 y g/mL的a -半乳糖基神經(jīng)酰胺、5 200 u g/mL的P -葡聚糖和5 10 y g/mL的左旋咪唑。該復(fù)方免疫增強(qiáng)劑含有5 IOOii g/mL的含CpG基序的核酸序列、100 1000 ii g/mL的a -半乳糖基神經(jīng)酰胺、200 2000 u g /mL的P -葡聚糖和10 2000 u g /mL的左旋咪唑。一種制備所述復(fù)方免疫增強(qiáng)劑的方法，包括下述步驟 (1)配制水相溶液在磷酸鹽緩沖液中加入含CpG基序的核酸序列、a-半乳糖基神經(jīng)酰胺、P -葡聚糖和左旋咪唑，然后加入吐溫-80，配制成水相溶液； (2)配制油相溶液在白油中加入司盤-80配制成油相溶液；將所述水相溶液與油相溶·液充分混合，即得所述復(fù)方免疫增強(qiáng)劑。所述禽用疫苗含有0. 5 100 u g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 1000 u g/mL的a -半乳糖基神經(jīng)酰胺、5 2000 u g/mL的P -葡聚糖、5 2000 u g /mL的左旋咪唑和滅活疫苗抗原；所述含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO. I所示。所述禽用疫苗優(yōu)選含有0. 5 5 ii g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 100 y g/mL的a -半乳糖基神經(jīng)酰胺、5 200 u g /mL的P -葡聚糖和5 10 y g/mL的左旋咪唑和滅活疫苗抗原。所述禽用疫苗優(yōu)選含有5 IOOii g/mL的含CpG基序的核酸序列、100 1000 Ii g/mL的a -半乳糖基神經(jīng)酰胺、200 2000 u g /mL的P -葡聚糖和10 2000 u g/mL的左旋咪唑和滅活疫苗抗原。所述禽用疫苗為H9亞型禽流感疫苗或新城疫、傳染性支氣管炎、H9亞型禽流感、產(chǎn)蛋下降綜合癥四聯(lián)滅活疫苗或新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊三聯(lián)滅活疫苗或雞傳染性鼻炎滅活疫苗。一種制備所述禽用疫苗的方法，包括下述步驟 (1)在磷酸鹽緩沖液中加入含CpG基序的核酸序列、a-半乳糖基神經(jīng)酰胺、P -葡聚糖和左旋咪唑，然后加入吐溫-80，配制成水相溶液； (2)在所述水相溶液中加入滅活疫苗抗原，混勻后得到滅活抗原溶液； (3)在白油中加司盤-80配制成油相溶液； (4)將所述滅活抗原溶液與油相溶液充分混合，即得所述復(fù)方免疫增強(qiáng)劑。有益效果本專利技術(shù)復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，由于其各成分的協(xié)同作用，使疫苗的免疫窗口期縮短，顯著提高抗體效價(jià)，延長(zhǎng)抗體持續(xù)期，產(chǎn)生針對(duì)同型毒株攻毒提供消除性免疫保護(hù)，降低抗原用量。本專利技術(shù)復(fù)方免疫增強(qiáng)劑與H9亞型禽流感滅活疫苗混合使用免疫雞，與常規(guī)疫苗比較，抗體產(chǎn)生提前2周，即免疫窗口期縮短2周，將抗體持續(xù)期延長(zhǎng)8周。本專利技術(shù)復(fù)方免疫增強(qiáng)劑與1/10的H9亞型禽流感滅活疫苗抗原配伍使用即可達(dá)到與H9亞型禽流感常規(guī)疫苗的免疫效果。本專利技術(shù)含有該復(fù)方免疫增強(qiáng)劑的H9亞型禽流感滅活疫苗能夠提供消除性免疫。本專利技術(shù)提供的復(fù)方免疫增強(qiáng)劑亦對(duì)新城疫、傳染性支氣管炎、H9亞型禽流感、產(chǎn)蛋下降綜合癥四聯(lián)滅活疫苗和新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊三聯(lián)滅活疫苗中的各抗原均有顯著免疫增強(qiáng)作用。本專利技術(shù)提供的復(fù)方免疫增強(qiáng)劑亦對(duì)細(xì)菌性滅活疫苗雞傳染性鼻炎滅活疫苗具有顯著免疫增強(qiáng)作用。本專利技術(shù)所述禽用疫苗的制備方法，簡(jiǎn)單易操作。附圖說明圖I顯示各組免疫后血清針對(duì)H9檢測(cè)抗原的HI抗體效價(jià)。圖2顯示各組免疫后針對(duì)H9檢測(cè)抗原的HI抗體持續(xù)期。圖3顯示各組免疫后針對(duì)H9檢測(cè)抗原的HI抗體效價(jià) 圖4顯示免疫后4周各免疫組對(duì)ND、IB、H9和EDS檢測(cè)抗原的抗體效價(jià)。 圖5顯示免疫后4周各免疫組針對(duì)三聯(lián)苗中的ND和IB檢測(cè)抗原的抗體。圖6顯示免疫后4周各免疫組針對(duì)三聯(lián)苗中的IBD檢測(cè)抗原的抗體。圖7免疫后4周各免疫組對(duì)雞傳染性鼻炎的抗體效價(jià)。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I復(fù)方免疫增強(qiáng)劑、禽用疫苗的配制 (I) 試驗(yàn)材料 含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO. I所示，具體為5’ - GTTCCTGACGTTGGTGCATCGATGCAGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGTCGTCGTITTGTCGITITGTCGITGGGGGGGCTAGACGTTAGCGT-3’，由。葡聚糖，a -半乳糖基神經(jīng)酰胺(a -galactosylceramide,簡(jiǎn)稱 a-GC)購(gòu)自 Invivogen。左旋咪唑購(gòu)自 SIGMA 公司。白油購(gòu)自法國(guó)埃索公司，吐溫-80和司盤-80購(gòu)自本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，其特征在于該復(fù)方免疫增強(qiáng)劑含有0.5～100？μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000？μg/mL的α？半乳糖基神經(jīng)酰胺、5～2000μg？/mL的β？葡聚糖和5～2000μg？/mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：唐應(yīng)華，陸吉虎，吳培培，劉振興，田震，何家惠，侯繼波，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。