用于治療TWEAK 相關(guān)病癥的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供用于治療TWEAK相關(guān)病癥的方法和試劑，該病癥包括心臟、肝臟、腎臟、肺、脂肪、骨骼、肌肉、神經(jīng)、骨和軟骨的病癥。本發(fā)明專利技術(shù)還提供用于鑒定治療TWEAK相關(guān)病癥的TWEAK的激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。此外，本發(fā)明專利技術(shù)提供表達(dá)編碼TWEAK多肽或其片段、類似物或突變體的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，以及用這種動(dòng)物來(lái)鑒定TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。本發(fā)明專利技術(shù)還提供用于診斷基于TWEAK表達(dá)的疾病的方法。本發(fā)明專利技術(shù)還提供用TWEAK多肽、激動(dòng)劑或拮抗劑來(lái)影響祖細(xì)胞的細(xì)胞分化的方法。（*該技術(shù)在2023年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及用于治療TWEAK相關(guān)病癥的方法和試劑，該病癥包括心臟、肝臟、腎臟、肺、脂肪、骨骼肌、神經(jīng)、骨、軟骨、皮膚、胃腸道、胰腺、生殖器官和結(jié)締組織疾病。本專利技術(shù)還涉及用于鑒定治療TWEAK相關(guān)病癥的TWEAK的激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。此外，本專利技術(shù)涉及表達(dá)編碼TWEAK多肽或其片段、類似物或突變體的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，以及用這種動(dòng)物來(lái)鑒定TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。本專利技術(shù)還涉及用于診斷基于TWEAK表達(dá)的疾病的方法。本專利技術(shù)還涉及用TWEAK多肽、激動(dòng)劑或拮抗劑來(lái)影響祖細(xì)胞的細(xì)胞增生和分化的方法。
技術(shù)介紹
腫瘤壞死因子家族成員的配體因其結(jié)構(gòu)與TNF-α相似而如此命名，是各種過(guò)程如炎癥反應(yīng)、細(xì)胞免疫和凋亡中的重要成分。TNF配體可能作為II型膜結(jié)合蛋白通過(guò)直接細(xì)胞與細(xì)胞接觸而局部起作用，或作為具有自分泌、旁分泌或內(nèi)分泌功能的分泌蛋白而起作用。TNF家族成員通過(guò)其C末端的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合TNF受體(TNF-R)成員。各種TNF家族成員包括 TNF、淋巴毒素(LT)、Fas、CD27、CD30、CD40、4-lBB、0X-40、TRAMP、CAR-l、TRAIL、GITR、HVEM、osteoprotegrin、NGF、TRAIN、Kay (BAFF)、APRIL 和 TWEAK (TNF 相關(guān)而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的能力弱。該細(xì)胞因子受體家族的特定特征在于富含半胱氨酸的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，最早通過(guò)兩種不同的TNF受體的分子克隆來(lái)顯示。該家族的基因編碼糖蛋白，特征為I型跨膜蛋白具有細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，單一的跨膜結(jié)構(gòu)域和參與激活細(xì)胞功能的胞質(zhì)區(qū)域。富含半胱氨酸的配體結(jié)合區(qū)域具有一個(gè)緊密結(jié)合的二硫鍵連接的核心結(jié)構(gòu)域，根據(jù)特定的家族成員，該核心結(jié)構(gòu)域重復(fù)出現(xiàn)多次。絕大部分的受體具有四個(gè)結(jié)構(gòu)域，雖然可能少至I個(gè)或多達(dá)6個(gè)。TNF家族成員在調(diào)控免疫系統(tǒng)中起作用，控制細(xì)胞存活和分化，以及在急性宿主防御系統(tǒng)如炎癥中起作用。本領(lǐng)域一直在嘗試操作TNF家族成員來(lái)產(chǎn)生治療性效果，這可能提供控制疾病的獨(dú)特方法。例如，該家族的一些配體能夠直接誘導(dǎo)許多被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的程序性死亡，如LT、TNF、Fas配體和TRAIL。Fas和可能TNF以及CD30受體的活化能夠在未被轉(zhuǎn)化的具有免疫調(diào)控功能的淋巴細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。誘導(dǎo)編程細(xì)胞死亡的能力是多個(gè)TNF家族成員的重要和被深入研究的特性。Fas介導(dǎo)的凋亡似乎在外周和可能在胸腺中起調(diào)控自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞的作用。此外，TNF和CD30系統(tǒng)與T細(xì)胞和大細(xì)胞退行發(fā)育的淋巴瘤細(xì)胞系的存活相關(guān)。這種細(xì)胞系對(duì)TNF、Fas或LT-β受體信號(hào)響應(yīng)的死亡具有凋亡的特征。TNF家族的配體抗原根據(jù)它們誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的能力被分成三類。首先，TNF、Fas配體和TRAIL能夠有效地在許多細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，其受體最可能具有極好的規(guī)則的死亡結(jié)構(gòu)域。大概DR-3的配體(TRAMP/WSL-1)也屬于這一類。接著是如TWEAK、⑶30配體和LTalb2等配體，其引起僅限于少數(shù)細(xì)胞的較為微弱的死亡信號(hào)。在這些系統(tǒng)中進(jìn)行的研究已經(jīng)證明，存在分開(kāi)的較微弱的死亡信號(hào)機(jī)制。最后，存在不能有效地遞送死亡信號(hào)的成員。可能所有類別的配體都對(duì)一些細(xì)胞類型產(chǎn)生抗增生作用，結(jié)果誘導(dǎo)細(xì)胞分化，如CD40。總之，死亡是由位于TNF受體的胞質(zhì)一側(cè)的死亡結(jié)構(gòu)域集聚后引發(fā)的。這些死亡結(jié)構(gòu)域協(xié)調(diào)各種信號(hào)傳導(dǎo)成分的組裝，引起caspase級(jí)聯(lián)活化。一些受體缺乏規(guī)則的死亡結(jié)構(gòu)域，如LTb受體和CD30，但是能夠誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，盡管較為微弱。相反，通過(guò)其他路徑如CD40發(fā)送信號(hào)是維持細(xì)胞存活所必需的。還需要進(jìn)一步鑒定和表征TNF家族成員的功能，從而便于開(kāi)發(fā)用于TNF家族相關(guān)疾病的新治療方法。TWEAK在篩選雜交到促紅細(xì)胞生成素探針的RNA中被分離。Chicheportiche等， J. Biol. Chem. 272:32401-32410 (1997) 0小鼠和人的肽具有異乎尋常的高度保守性，包括在受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域中具有93%氨基酸同一性。TffEAK被證實(shí)高效地從細(xì)胞中分泌，在許多組織中豐富地被表達(dá)，包括心臟、大腦、胎盤(pán)、肺、肝臟、骨骼肌、腎臟、胰腺、脾臟、淋巴結(jié)、胸腺、闌尾和外周血液淋巴細(xì)胞。一種已知的TWEAK受體是Fnl4，生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)的立即早期反應(yīng)基因，其降低對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)胞附著和減弱血清刺激的生長(zhǎng)和遷移(Me i ghan-Mantha等，J. B i ο I.Chem. 274:33166-33176(1999))。Fnl4已經(jīng)被證明會(huì)被FGF、小牛血清和氟波醇酯(phorbolester)處理誘導(dǎo)，并且在心臟、腎臟、肺、皮膚、骨骼肌、卵巢和胰腺組織中，以及在肝細(xì)胞癌模型和其他癌細(xì)胞系中以相對(duì)高的水平被表達(dá)，在正常肝臟組織中以較低水平被表達(dá)。TffEAK與許多生物學(xué)過(guò)程相關(guān)。例如，用IFN- Y和TWEAK處理的HT29細(xì)胞被證明發(fā)生凋亡；盡管TWEAK誘導(dǎo)凋亡的能力是微弱的，并且僅少數(shù)細(xì)胞類型易感。Chich印ortiche 等，J. Biol. Chem. 272:32401-32410(1997)。相反，TWEAK 已經(jīng)被證明在不依賴VEGF的路徑中誘導(dǎo)血管發(fā)生和內(nèi)皮細(xì)胞增生。Lynch等，J. Biol.Chem. 274:8455-8459 (1999)。星細(xì)胞被TWEAK特異地結(jié)合和刺激。TWEAK能夠滲入發(fā)炎的大腦中來(lái)影響星細(xì)胞的行為。暴露于TWEAK的星細(xì)胞分泌大量IL-6和IL-8，并上調(diào)ICAM-I表達(dá)。Saas 等，GLIA32:102-107 (2000)。TffEAK還與免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)相關(guān)。在用IFN- Y刺激時(shí)，單核細(xì)胞迅速地表達(dá)TWEAK，抗TWEAK的抗體部分地抑制它們對(duì)人鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。抗TWEAK和抗TRAIL的抗體的結(jié)合幾乎完全抑制細(xì)胞毒性。Nakayama等，J. Exp.Med. 192:1373-1379(2000)。相反TWEAK的mRNA在用脂多糖(LPS)處理的小鼠中迅速消失，脂多糖是免疫炎癥反應(yīng)的誘導(dǎo)物。此外，在小鼠模型的自體免疫溶血性貧血和系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，TWEAK的mRNA也減少。這些數(shù)據(jù)表明，下調(diào)TWEAK的表達(dá)是急性和慢性炎癥中的重要事件。Chicheportiche 等，Biochem. Biophys. Res. Comm. 279:162-165 (2000)。當(dāng)前，本領(lǐng)域缺乏對(duì)哪些病癥或疾病與TWEAK表達(dá)和功能相關(guān)的完整了解，包括TffEAK在炎癥和非炎癥病癥中的作用。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)涉及TWEAK對(duì)于促進(jìn)各種病理狀況的嚴(yán)重性和進(jìn)展中的作用，包括多種組織和器官系統(tǒng)的疾病。這種病理狀況包括急性心臟損傷，慢性心力衰竭，非炎癥性充血性心肌病，充血性心力衰竭，肝臟上皮細(xì)胞增生，肝細(xì)胞死亡，肝臟纖維變性，肝細(xì)胞液泡化，其他肝臟損傷，膽管病癥，包括膽管增生，炎癥性腎臟病癥，如多病灶(multifocal)炎癥性、非炎癥性腎臟病癥，如腎小管腎病，腎小管增生，腎小球囊腫，腎小球腎病，Alport綜合癥，腎小管液泡化，腎透明管型(kidney hyaline cast)，腎纖維變性和炎癥性肺病，本專利技術(shù)建立了 TWEAK分子與某些心臟、肝臟、腎臟和肺疾病之間的因果關(guān)系。在本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
TWEAK拮抗劑在制備用于在受試者中治療腎臟病癥的藥物中的用途。

【技術(shù)特征摘要】
...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：琳達(dá)伯克利，阿尼拉賈庫(kù)博夫斯基，蒂莫西鄭，咸庚旼，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：比奧根艾迪克MA公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：