本發明專利技術公開了與‘儀寧小麥’抗小麥黃花葉病毒主效QTL?QYm.nau-2D.1的分子標記方法，屬于生物技術領域。首先公開了與QTL?QYm.nau-2D.1緊密連鎖的分子標記2EST730，同時公開了該標記的引物2EST730F/2EST730R。在含有QTL?QYm.nau-2D.1的材料中，標記引物2EST730F/2EST730R擴增出約600bp的產物與QYm.nau-2D.1緊密連鎖，遺傳距離為0.3cM。本發明專利技術公開的與QYm.nau-2D.1緊密連鎖分子標記，可用于小麥抗黃花葉病分子標記輔助選擇育種。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物
，公開了 ‘儀寧小麥’抗小麥黃花葉病毒主效QTL的分子標記及其應用。
技術介紹
普通小麥(Triticum aestivum L)有21對染色體,每對包含兩條一樣的染色體，這 21 條染色體分別為 1A、1B、1D、2A、2B、2D、3A、3B、3D、4A、4B、4D、5A、5B、5D、6A、6B、6D、7A、7B、7D，普通小麥通常用AABBDD表示(圖I)。每條染色體又包含長臂和短臂，分別用L和S表示，比如2D染色體包括長臂2DL和短臂2DS。小麥作為世界性的重要糧食作物，在農業生產中具有舉足輕重的地位，但由真菌一禾谷多黏菌(Polymyxa graminis)(見參考文獻Inouye T(1969)Viral pathogenofthe wheat yellow mosaic disease. Nogaku Kenkyu53 :61-68)介導的小麥黃花葉病毒(Wheat yellow mosaic bymovirus, WYMV)引起的小麥黃花葉病(Wheat yellow mosaic,WYM)對小麥的生長發育及產量造成了嚴重危害，正日益成為危害我國和日本等亞洲國家小麥生產的最嚴重的病害之一(見參考文獻1、陶家鳳，秦家忠，肖際亨，沈言章，趙福臻，李天眷，謝貽遠，何代富，饒有后，黃顯華(1980)四川土傳小麥黃色花葉病的研究.植物病理學報10 5-25 ;2、于善謙，陳仲宜，徐來升，張若平，王鳴岐，羅瑞梧(1986)發生在我國的小麥黃花葉病毒病.植物保護學報13 =217-219 ;3、李大偉，韓成貴，邢怡明，田兆豐，于嘉林，蔡祝南，劉儀(1997)中國小麥黃花葉病毒(WYMV)分布的RT-PCR鑒定.植物病理學報27 303-307)。將抗性主效QTL/基因引入小麥栽培品種，培育和推廣抗病毒品種是目前生產上防治小麥黃花葉病最經濟有效的方法。普通小麥品種‘儀寧小麥’(公知公用，見參考文獻侯慶樹(1993)抗梭條花葉病小麥新品種一儀寧小麥.江蘇科技短訊9 (4) :7-10)具有耐旱、耐寒、耐肥、抗倒等性狀優良，抗病性較好，綜合性狀優良。南京農業大學細胞遺傳所對‘儀寧小麥’抗黃花葉病進行了鑒定，結果表明‘儀寧小麥’對小麥黃花葉病表現出高抗，‘鎮9523’表現高感。為了進一步研究‘儀寧小麥’對小麥黃花葉病的抗性遺傳機制和定位抗性QTL，南京農業大學細胞遺傳所以高抗小麥黃花葉病的‘儀寧小麥’作母本、高感小麥抗黃花葉病的‘鎮9523’(審定品種)作父本、構建了 F2:8重組自交系群體(Recombinant inbred line, RIL),并開展了利用該RIL群體進行抗性QTL定位以及與主效QTL緊密連鎖分子標記的篩選工作，以及進一步利用“RIL11 - 14X鎮9523”次級F2分離群體進行抗病主效QTL QYm. nau_2D. I精細定位的研究。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供來自普通小麥品種‘儀寧小麥’的抗小麥黃花葉病主效QTLQYm. nau-2D. I緊密連鎖分子標記2EST730。本專利技術的另一目的是提供該分子標記的引物對。本專利技術的又一目的是提供該分子標記的應用。本專利技術的目的可通過如下技術方案實現‘儀寧小麥’中抗小麥黃花葉病主效QTL QYm. nau_2D. I的分子標記2EST730，該分子標記2EST730的上游引物2EST730F序列如SEQ ID NO. I所示，下游引物2EST730R序列如 SEQ ID NO. 2 所示。所述的分子標記2EST730與QYm. nau-2D. I之間的遺傳距離為O. 3cM。所述的分子標記2EST730的引物對，其上游引物2EST730F序列如SEQ ID NO. I所示，下游引物2EST730R序列如SEQ ID NO. 2所示。抗小麥黃花葉病主效QTL QYm. nau_2D. I的分子標記方法，包括以待鑒定材料的DNA作為模板，用權利要求3所述的分子標記2EST730的引物對進行PCR擴增；PCR產物進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，再用銀染法檢測；能擴增出約600bp特異條帶的植株 為含有抗小麥黃花葉病主效QTL QYm. nau-2D. I的植株。所述的抗小麥黃花葉病主效QTL QYm. nau_2D. I的分子標記方法,優選包括如下步驟(I)以待鑒定材料的DNA作為模板，用權利要求3所述的分子標記2EST730的引物對進行PCR擴增；PCR 試劑組成為I μ L DNA 模板(20_100ng)，I. O μ LlO X PCR buffer,0. 8μ LMgCl2(25mmol/L),0. 8μ L dNTP(2. 5mmol/L)，上、下游引物(10ymol/L)各 O. 2μ L，0. 15μ LTaq DNA polymerase(5U/μ L),5. 85 μ L ddH20 ；PCR程序為94°C預變性3分鐘；94°C變性30秒，55°C退火50秒，72°C延伸I分10秒，35個循環；72°C延伸10分鐘；10°C保存；PCR產物檢測PCR產物在丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺質量比39:1的非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，再用銀染法檢測；(2)標記引物鑒定QYm. nau-2D. I的結果為能擴增出約600bp特異條帶的植株為含有QYm. nau_2D. I的植株。所述的分子標記2EST730在分子標記輔助選擇育種中的應用。所述的分子標記2EST730在選育抗小麥黃花葉病小麥品種中的應用。有益效果I、本專利技術中公開的與‘儀寧小麥’中抗小麥黃花葉病主效QTL QYm. nau_2D. I緊密連鎖的分子標記的引物(2EST730F/2EST730R)是基于小麥EST序列設計而成，用來鑒定植株中是否含有QYm. nau-2D. 1，簡單易行、方便快捷、擴增穩定。2、標記引物2EST730F/2EST730R擴增的產物與QYm. nau_2D. I之間的遺傳距離為O. 3cM,與現有技術中公開的分子標記相比，本專利技術分子標記與QYm. nau_2D. I遺傳距尚更近，意味著利用分子標記輔助選擇QYm. nau-2D. I的準確性更高。附圖說明圖I :普通小麥染色體示2 :小麥抗黃花葉病單株抗性鑒定分級標準圖3 :標記引物2EST730F/2EST730R所對應的小麥EST (BE423370)序列及引物序列位置圖4 :利用F2次級群體對QYm. nau_2D. I進行精細定位圖5 :用“儀寧小麥X鎮9523”RIL群體雙親和部分抗、感家系的DNA作為模板，用本專利技術中的標記引物2EST730F/2EST730R進行PCR擴增，結果表明標記引物2EST730F/2EST730R在抗病親本‘儀寧小麥’(泳道I)和抗病家系(泳道3-7，10，11，13，15-17，19-22)中均擴增出約600bp的特異條帶，而在感病的親本和家系中均未擴增出相應的特異條帶。白色箭頭所示為特異條帶。注M. Marker ；1.儀寧小麥；18.鎮9523 ;3_17及19-22為部分抗、感家系；R.純合抗病；S.純合感病圖6 :用“RIL11 — 14X鎮9523”次級F2分離群體雙親和抗、感池及部分抗、感單 株的DNA作本文檔來自技高網...
【技術保護點】
‘儀寧小麥’中抗小麥黃花葉病主效QTL？QYm.nau？2D.1的分子標記2EST730，其特征在于該分子標記2EST730的上游引物2EST730F序列如SEQ？ID？NO.1所示，下游引物2EST730R序列如SEQ？ID？NO.2所示。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王秀娥，郭嬌，吳真真，朱曉彪，王海燕，曹愛忠，肖進，
申請(專利權)人：南京農業大學，
類型：發明
國別省市：
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