本發明專利技術提供可以特異性且準確地測定穩定化血纖蛋白分解產物(D二聚體)的抗體、以及使用該抗體的D二聚體的測定方法和測定試劑。上述抗體與穩定化血纖蛋白的纖溶酶分解產物D二聚體特異性反應，但不與血纖蛋白原及其分解產物片段X、片段Y、片段D1和片段E3、和使DD/E單體解離得到的片段DD以及片段E1和片段E2反應。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及用于準確測定穩定化血纖蛋白(特別是人穩定化血纖蛋白)的纖溶酶分解產物(D 二聚體)的新的單克隆抗體以及使用該單克隆抗體的免疫學分析方法。本說明書中的術語“分析”包括判定分析對象物質是否存在的“檢測”和對分析對象物質的量或活性進行定量或半定量確定的“測定”。
技術介紹
穩定化血纖蛋白的各種蛋白酶分解產物作為臨床診斷方法中的診斷標記物有用。例如如圖I所示，穩定化血纖蛋白(交聯血纖蛋白(cross-linked fibrin))的纖溶酶分解產物(作為別稱，例如可總稱為“D 二聚體”、“D- D 二聚體”、“DD/E復合物”、“XDP”)、S卩，基本單元DD/E單體及其聚合物(DD/E聚合物，例如DXD/YY、YXY/DXXD、DXXY/YXXD)作為彌散性血管內凝血綜合征(DIC)的診斷標記物而被廣泛使用。 另外，各種蛋白酶也可以分解存在于血液中的血纖蛋白原，例如，通過纖溶酶生成包含D 二聚體的構成要素一D結構域、E結構域的片段X、片段Y、片段D1、片段E3等血纖蛋白原分解產物(可總稱為FgDP)。因此，血栓形成患者的血液中可混合存在由于蛋白酶使穩定化血纖蛋白分解而生成的D 二聚體、和由于蛋白酶使血纖蛋白原分解而生成的血纖蛋白原分解產物(FgDP)。可將此兩者總稱為FDP (以上參照圖I)。另外，以往認為血栓形成患者血漿中的D 二聚體是分子量約23萬的DD/E組分為主成分，但近年來實際了解到DXD/YY組分、YXY/DXXD組分、DXXY/YXXD組分等的更高分子量的多聚體為主成分(參照非專利文獻I)。近年來，因血栓形成和/或栓塞死亡的基礎疾病顯示增加傾向，用于檢測血栓形成的臨床檢查日益進步。最初是將使用血纖蛋白原(Fbg)的多克隆抗體來測定血清中血纖蛋白/血纖蛋白原分解產物的FDP測定用于診斷，但在進行脫血纖蛋白原處理時，該操作仍不足夠，所以存在顯示假高值的問題。后來，為了解決該問題，人們尋求與FDP的測定平行、不與血纖蛋白原反應、而只測定作為DD/E復合物的穩定化血纖蛋白分解產物(D 二聚體)的D 二聚體試劑。例如，D 二聚體的測定方法已知有將識別D 二聚體的單克隆抗體固定于膠乳顆粒、塑料板等固相上，基于與D 二聚體結合的抗原抗體反應的方法，即膠乳凝集法或ELISA法等(專利文獻I)。但是，在基于抗原抗體反應的方法中，目前所使用的與固相結合的單克隆抗體與D二聚體具有反應性，同時對于與D 二聚體具有類似結構的片段X和/或片段Y和/或片段Dl和/或片段E3也可能具有反應性。如果使用上述單克隆抗體，則與固相結合的單克隆抗體在測定時也與D 二聚體以外的片段結合，可能無法準確測定。另外，人們也公開了用于解決上述問題的以下的方法。但是，以下試劑中所使用的單克隆抗體仍不能說是D 二聚體特異性的。例如專利文獻2中報道了一種D 二聚體測定試齊U，該D 二聚體測定試劑與DD/E組分的多聚體和DD/E組分的單體反應，但不與X組分、Y組分、D組分、E組分反應，并且對于DD/E組分的四聚體的反應性至少具有10%的對于DD/E組分的反應性。但是專利文獻2中具體給出的DD-M1653(保藏號FERM P-19687號)在專利文獻3中已經明確是與DD/E組分的多聚體和DD/E組分的單體以及X組分和Y組分反應，但不與D組分和E組分反應，仍不能說是D 二聚體特異性的。專利文獻2中并未顯示可特異性且準確地測定檢樣中的D 二聚體。專利文獻3公開即使使用上述對D 二聚體反應特異性較低的單克隆抗體，通過將含有對D 二聚體具有反應性的單克隆抗體的液狀試劑、與固定有對D 二聚體具有反應性的單克隆抗體的載體或含有該載體的溶液組合而成的D 二聚體測定用試劑盒，可更為準確地測定實際的D 二聚體的量，但仍無法簡便、特異性且準確地測定檢樣中的D 二聚體。近年來，由于醫學的進步、治療和治療藥物的進步，例如對血栓形成患者等的治療使用了溶栓劑，如上所述，以被認為在生理環境下不會發生的狀態發生纖溶 ，這樣就無法忽視含有片段D的血纖蛋白原分解產物的存在。因此，專利文獻4中公開在檢樣中存在片段D時，片段D會干擾膠乳凝集反應，使原本的凝集受到抑制，為了避免獲得比原本的值更低的值的結果，是預先人為地使過量的片段D共存，以不受來自檢樣的不確定的片段D的影響，由此可以準確測定D 二聚體。但是，只通過I種抗體的反應特異性并不能特異性且準確地測定檢樣中的D 二聚體。如上所述，人們需求穩定化血纖蛋白分解產物(D 二聚體)特異性的D 二聚體試齊U，但是，使用I種單克隆抗體、可特異性且準確地測定D 二聚體的抗體或含有該抗體的試劑尚未見報道。并且，目前的主流是使用血漿檢樣測定FDP、D 二聚體，但也偶有FDP和D 二聚體顯示假高值的問題。非專利文獻2中顯示，由于采集患者血漿時的操作技術使得凝固、纖溶亢進，可能顯示FDP、D 二聚體為偽高值。現有技術文獻 專利文獻 專利文獻I :日本特開昭63-79900號公報 專利文獻2 :日本特開2006-105633公報 專利文獻3 :日本特開2006-234676公報 專利文獻4 :日本特開2001-21557公報 非專利文獻 非專利文獻 I :Charles ff. Francis, Victor J. Marder 和 Grant H. Barlow;Plasmic Degradation of Crossl inked Fibrin: CHARACTERIZATION OF NEWMACR0M0LECULAR SOLUBLE COMPLEXES AND A MODEL OF THEIR STRUCTURE (交聯血纖蛋白的降解新的大分子可溶性復合物及其結構模型的表征).J. Clin. Invest. (1980)66(5) : 1033 1043. 非專利文獻2 :高田章美、前川芳明、山本慶和、松尾收二 ；血漿検體&用^ 測定L· tzF D P杉J t/ D夕M ^ —偽高値O原因(使用血漿檢樣測定的FDP及D 二聚體假高值的原因)· JJCLA. (2005) 30(5) :721-726。
技術實現思路
本專利技術鑒于上述問題而完成，其目的在于通過使用至少I種不受存在于檢樣中的血纖蛋白原及其分解產物一片段X、片段Y、片段Dl和片段E3的影響、且不與使DD/E單體解離而成的片段DD、以及片段El和片段E2反應的抗體，提供可特異性且準確地測定穩定化血纖蛋白分解產物(D 二聚體)的方法和測定試劑。本專利技術人針對上述現狀進行了深入的研究，結果發現通過使用至少I種不與存在于檢樣中的血纖蛋白原及其分解產物一片段X、片段Y、片段Dl和片段E3、和使DD/E單體解離而成的片段DD、以及片段El和片段E2反應的抗體，則不會與D 二聚體以外的分子反應，不會顯示比實際的D二聚體值低的值或假高值。根據該認識，本專利技術完成了特異性且準確地測定穩定化血纖蛋白分解產物(D 二聚體)的方法以及測定試劑。因此，本專利技術涉及 抗D 二聚體抗體，其特征在于與穩定化血纖蛋白的纖溶酶分解產物D 二聚體特異性反應，但不與血纖蛋白原及其纖溶酶分解產物片段X、片段Y、片段Dl和片段E3、和使DD/E單體解離而成的片段DD以及片段El和片段E本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：長濱裕，野崎順子，櫻井錠治，
申請(專利權)人：三菱化學美迪恩斯株式會社，
類型：
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。