整合素αVβ8中和抗體制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及用于降低個體中TGFβ激活的αvβ8拮抗劑、抗-αvβ8抗體或免疫結(jié)合物。還提供了組合物，其包含αvβ8拮抗劑、抗-αvβ8抗體或免疫結(jié)合物中的一種，使用所述組合物的方法以及相關(guān)內(nèi)容。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】整合素α νβ 8中和抗體相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2010年2月18日提交的第61/305，749號美國臨時申請以及2010年12月30日提交的第61/428，814號美國臨時申請的優(yōu)先權(quán)，上述申請的公開內(nèi)容以其整體并入本文作為參考。對于在聯(lián)邦政府資助的研究和開發(fā)下完成的專利技術(shù)的權(quán)益聲明在國立衛(wèi)生研究院授予的批準(zhǔn)號HL63993、NS-44155、U01AI075443下，通過政府的支持完成本專利技術(shù)。政府具有本專利技術(shù)的某些權(quán)利。專利技術(shù)背景 多功能細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)在無脊椎動物和脊椎動物物種的發(fā)育和成年生活期間的免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)中起到重要作用。在哺乳動物中，這些功能通過三種異構(gòu)體，即TGF-β 1、2和3來介導(dǎo)，所述三種異構(gòu)體各自被廣泛地表達(dá)。所有三種異構(gòu)體與相同的細(xì)胞表面受體(TGFBR2和ALK5)相互作用，并通過相同的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，所述通路包括規(guī)范的(即SMAD)或非規(guī)范的(即MAPK、JUN、PI3K、PP2A、Rho、PAR6)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)器。已經(jīng)非常集中地研究了規(guī)范TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，借此通過細(xì)胞質(zhì)SMAD-2/3的磷酸化、與SMAD-4的復(fù)合物形成、SMAD-2/3/4復(fù)合物的核轉(zhuǎn)運(yùn)以及與位于纖維發(fā)生反應(yīng)所涉及的許多基因的啟動子區(qū)域的SMAD反應(yīng)元件結(jié)合，從TGF-β受體裝置傳播TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。然而，盡管具有相似的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)伙伴，但每一異構(gòu)體提供單獨(dú)的生物功能，可能歸因于與TGF-β受體的結(jié)合親和力、激活機(jī)制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)強(qiáng)度或持續(xù)時間、或者空間和/或時間分布的差異。TGF-β異構(gòu)體、受體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)介體以及靶向所有TGF-β異構(gòu)體的功能阻斷劑的敲除和條件缺失模型已經(jīng)揭露了 T細(xì)胞、心臟、肺、血管和腭部發(fā)育中的TGF-β的重要作用。例如，在TGF-β I中存在缺陷的小鼠由于卵黃囊血管形成而在子宮內(nèi)死亡，或者出生并存活為成年壽命，但出現(xiàn)嚴(yán)重的多器官自身免疫。TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)介體的基因缺失已表現(xiàn)出在早期模式形成(patterning)和中胚層形成中Smad2的重要作用，并且缺少Smad3的小鼠是有生命力并可育的，但表現(xiàn)出肢體畸形、免疫調(diào)節(jié)異常、結(jié)腸炎、結(jié)腸癌和齒槽肥大。在成年組織中，TGF-β通路被認(rèn)為調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞的動態(tài)相互作用以保持對環(huán)境脅迫的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。由TGF-β介導(dǎo)的正常內(nèi)穩(wěn)通路在對長期重復(fù)損傷的反應(yīng)中受到擾亂。對于損傷，TGF-β變?yōu)橹饕拇倮w維化細(xì)胞因子，通過抑制上皮增殖和遷移并且促進(jìn)細(xì)胞死亡來延遲上皮創(chuàng)傷康復(fù)，以及通過誘導(dǎo)纖維原細(xì)胞補(bǔ)充、纖維原細(xì)胞收縮和細(xì)胞外基質(zhì)沉積來擴(kuò)張間質(zhì)室。實(shí)際上，腺病毒重組TGF-β I向嚙齒動物肺部的氣管內(nèi)轉(zhuǎn)移顯著增加了氣道周圍和肺間質(zhì)中的纖維原細(xì)胞積聚以及I型和III型膠原的表達(dá)，并且中和抗-TGF-β抗體能阻斷實(shí)驗(yàn)性博來霉素或輻射誘導(dǎo)的肺纖維化。TGF-β通路的增加的活性還涉及纖維化肺病、腎小球硬化癥和心血管再狹窄。大多數(shù)TGF-β介導(dǎo)的病理學(xué)變化可能歸因于TGF-β I異構(gòu)體。由具有在TGF-β I自身或其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)器中廣泛的或細(xì)胞類型特異性的增強(qiáng)或缺陷的遺傳病癥來說明人類的TGF-β I功能的復(fù)雜性。增加TGF-β通路活性的突變導(dǎo)致骨代謝(即，Camurati-Engelmann疾病)和結(jié)締組織(即，Marfan綜合征)以及主動脈瘤(即Loeys-Dietz綜合征)的缺陷,而導(dǎo)致TGF-β通路的降低活性的突變與癌癥發(fā)生和預(yù)后相關(guān)。然而，TGF-β作為癌癥的腫瘤抑制劑的作用并非明確的，因?yàn)門GF-β也能通過其在免疫抑制、細(xì)胞侵襲、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化或血管生成中的作用而增強(qiáng)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。盡管TGF- β的多種重要功能，但單一劑量或短期給藥泛-TGF- β中和抗體已被報(bào)道在抑制器官纖維化或?qū)嶒?yàn)性癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的劑量下完全耐受，并且未報(bào)道在成年小鼠和大鼠中的副作用。該治療已表明在抑制實(shí)驗(yàn)性纖維化中的治療效能。由于這些有希望的結(jié)果，對于轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌、黑素瘤、局灶性節(jié)段性腎小球硬化和特發(fā)性肺纖維化，已經(jīng)進(jìn)行或者正在進(jìn)行使用中和泛-TGF-β抗體的單劑量Ι/II期臨床試驗(yàn)(Genzyme Corporation, genzymeclinicalresearch. com,最近的訪問于 2009 年 8 月 27 號)。TGF- β 通路對最小化全身作用的仔細(xì)靶向是高度期望的目標(biāo)。專利技術(shù)簡述本專利技術(shù)涉及通過向有需要的個體給予整合素ανβ 8的拮抗劑而降低個體、例如 人類或非人類中TGFP激活的方法，由此降低個體中的TGFP激活。在一些實(shí)施方案中，拮抗劑降低TGFii激活(例如，切割潛態(tài)TGFii由此釋放成熟的活性TGFii肽的蛋白酶募集)，但未顯著抑制α V β 8對TGF β的粘附(例如，在細(xì)胞表面上表達(dá)的α V β 8對與細(xì)胞基質(zhì)相關(guān)的潛態(tài)TGF β的粘附)。在一些實(shí)施方案中，拮抗劑為抗體。因此，本專利技術(shù)提供了分離的抗體，其抑制活性的成熟TGF β肽的釋放(TGF β激活)，但未顯著抑制TGFii對在ανβ8表達(dá)細(xì)胞上的ανβ8的粘附。在一些實(shí)施方案中，抗體特異結(jié)合至ανβ8，例如特異結(jié)合至β8。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合至在SEQ ID NO: 11內(nèi)的β 8上的表位。在一些實(shí)施方案中，表位包括至少一個選自以下的氨基酸人類β8的氨基酸1125、R128、R175、F179和F180。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合至少一個選自以下的氨基酸:人類β8的氨基酸R79、185、S95、Ρ100、1108、Ρ109、R128、Η140和F179。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合至少一個選自以下的氨基酸人類0 8的氨基酸174、呢8、1107、1110、1125、1 175和？180。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合人類β 8，而非小鼠β8。在一些實(shí)施方案中，抗體降低TGFii激活，但未顯著抑制ανβ 8-介導(dǎo)的細(xì)胞對TGFii的粘附。在一些實(shí)施方案中，抗體與具有輕鏈可變區(qū)域和重鏈可變區(qū)域的抗體競爭與ανβ 8的結(jié)合，其中所述輕鏈可變區(qū)域包括SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的三個輕鏈CDR，所述重鏈可變區(qū)域包括SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10的三個重鏈CDR。在一些實(shí)施方案中，抗體具有輕鏈可變區(qū)域和重鏈可變區(qū)域，其中所述輕鏈可變區(qū)域包括SEQ ID NO:5, SEQ ID N0:6和SEQ ID NO:7的三個輕鏈CDR，所述重鏈可變區(qū)域包括SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10的三個重鏈CDR。例如，在一些實(shí)施方案中，抗體具有SEQ ID N0:3或4的輕鏈可變區(qū)域和SEQ ID NO: I或2的重鏈可變區(qū)域。本專利技術(shù)的抗體的具體實(shí)例包括具有SEQ ID NO: 3輕鏈可變區(qū)域和SEQ ID NO: I重鏈可變區(qū)域的抗體，并且抗體具有SEQ ID NO:4輕鏈可變區(qū)域和SEQ ID N0:2重鏈可變區(qū)域。抗體能具有多種同種型，例如1861、1862、1862&、1863或1864。能使用單克隆或多克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為人類、人源或嵌合抗體。本專利技術(shù)還提供了適于編本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：斯蒂芬·尼什穆拉，樓建龍，喬迪·林恩·巴榮，詹姆士·D·馬可斯，
申請(專利權(quán))人：加利福尼亞大學(xué)董事會，
類型：
國別省市：