在本發明專利技術公開的再生牙齒單元的制造方法中，再生牙胚在體內培養時，不會因空間或壓力而限制牙齒的形狀，并且能夠控制牙齒的伸長。即使在牙齒的缺損部位較大的情況下，所述方法也能夠進行再生牙齒的移植。本發明專利技術公開的一種方法包含在哺乳動物體內，在間隔構件內配置再生牙胚并培養的步驟。其中所述間隔構件具有能夠防止所述哺乳動物體內的組織對所述再生牙胚施加過多壓力、以及防止再生牙胚的伸長超過最大容許值的構造。而且，所述間隔構件具有能夠使置于其內部的再生牙胚與間隔構件外部連通的構造。另外，公開的另一種方法包含在哺乳動物體內，在間隔構件內配置并培養多個再生牙胚的步驟。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及可控制其大小及形狀的等。
技術介紹
牙齒是ー種具有最外層為牙釉質，內層為牙本質的硬組織，并于其內側有產生牙本質的成牙質細胞，中心部為牙髓的器官。牙齒常會因齲齒或牙周病而缺損，而牙齒的有無大大影響外觀及品嘗食物的味道，因此為了保持健康或高質量的生活，目前正逐漸重視牙齒的再生技術。牙齒是由胚胎期發育過程的誘導而形成，且是以多種細胞株為基礎而構造的功能単位。因此，牙齒并非由成年人體內產生細胞株的干細胞如造血干細胞或間葉干細胞等干細胞的干細胞系統所發育，僅以目前再生醫療使用的干細胞移植(干細胞移植療法)，無法 再生牙齒。此外還研究了，通過鑒定出在牙齒發育過程中具有特定表達的基因，從而人為誘導牙胚的牙齒再生法，但僅通過特定基因，并無法完全地誘導牙齒的再生。因此近年來開始研究用自牙胚分離得到的組織或細胞，再構建牙胚，將其培養后獲得由牙齒與牙周組織所構成的再生牙齒單元，通過移植該再生牙齒單元至口腔內而獲得再生牙齒的方法。迄今為止，本專利技術的專利技術人發現通過使用間葉細胞和上皮細胞，其中這些細胞中至少ー種細胞是來自牙胚的細胞，然后將實質上由間葉細胞形成的第I細胞團塊與實質上由上皮細胞形成的第二細胞團塊以緊密接觸的方式，放置于由膠原蛋白凝膠等所形成的支持載體的內部，然后于支持載體的內部培養第I和第2細胞團塊，可產生能有效誘導細胞分化和具有特定的細胞配置及方向性的再生牙胚或再生牙齒單元(例如參照專利文獻I)。另外還發現，利用口腔內上皮細胞或其初代培養細胞作為上皮細胞時(例如參照專利文獻2)，利用來自羊膜的細胞作為間葉細胞時(例如參照專利文獻3)，以及將全能干細胞經分化誘導后的細胞利用為間葉細胞時(例如參照專利文獻4)，均可同樣獲得具有特定的細胞配置和取向的再生牙胚或再生牙齒單元。進ー步研究表明，制作再生牙胚時，通過調整再生牙胚所含牙釉結的數目，可控制形成的再生牙齒的數目(例如參照專利文獻5)。由于牙齒因部位或個人差異其大小或形狀均有所不同，因此在制作再生牙胚或再生牙齒單元時，控制其大小或形狀十分重要。特別是再生適合缺損牙齒部位的牙齒時，若制作出的牙齒不具有與缺損牙齒相同的大小及形狀，則將無法發揮其必要的功能。作為制作具有期望大小或形狀的再生牙齒的方法，有人提出將含有形成牙乳頭與牙本質的來自牙髓的間葉細胞，及有助于形成牙釉質的上皮細胞的牙胚細胞混合物，接種于通過固化由聚甘醇酸-聚醋酸共聚物等形成的生物可降解性的聚合物而形成的結構架上，再移植至動物體內的形成牙齒的方法。在該方法中，曾嘗試使用一定形狀的結構架，控制牙齒的形狀。然而，由于再生牙齒來自由上皮細胞層與間葉細胞層所形成的牙胚，而牙胚的發育伴隨著在上皮細胞層與間葉細胞層間所產生的長時間的上皮/間葉相互作用，而使用結構架無法獲得充分的細胞間的相互作用，因此也有不希望使用結構架的意見(例如參照非專利文獻I)。另外由于牙齒的形成速度比結構架的分解速度快，可以預料形成的牙齒可能會將結構架卷入，因此細胞配置及牙齒形狀的再現性必然不高。另ー方面，制作再生牙齒單元時，亦可使用將再生牙胚移植至動物體內進行培養的方法。在體內進行培養時，由于可接受來自動物細胞的各種細胞激素的作用以及來自周圍的營養供給，移植物易形成組織學上正常的組織，亦可加速牙齒及牙周組織的培養。體內移植，例如可以為目前廣泛使用的腎被膜下移植。然而將再生牙胚于例如腎被膜下等體內培養時，有時會因被膜壓カ及移植空間而限制再生牙齒的大小或形狀。具體而言，再生牙胚受到來自側面的壓力，牙齒咬合面的形狀容易被破壞。另外在生物體內培養也難以控制牙齒的伸長。特別是再生牙齒長成超過所需的長度時，無法直接將其移植至頜骨上。將再生牙胚在動物體內培養的方法中，由于幾乎沒有機械性的刺激，無法充分使 牙周膜產生及發育。牙周膜具有維系牙根與牙槽骨的功能，以及減緩來自牙齒的壓力、感覺牙齒咬合等功能，因此為使再生牙齒具有與原有的牙齒相同的功能，牙周膜是ー個的重要因素。先前技術文獻專利文獻專利文獻I :國際公開第2006 129672號手冊專利文獻2 :特開2008-29756號公報專利文獻3 :特開2008-206500號公報專利文獻4 :特開2008-200033號公報專利文獻5 :特開2008-29757號公報非專利文獻非專利文獻I =Hu et al. Tissue Engineering Volume 12，Number 8，2006，2069-207
技術實現思路
本專利技術的目的是解決于體內培養再生牙胚時所伴隨的問題。具體而言，其目的在于提供一種即使在體內培養再生牙胚，也不會因壓カ及空間而限制牙齒形狀，同時可控制牙齒伸長的方法。另一目的在于提供一種可于牙根周圍形成充分的牙周膜的方法。另外，本專利技術的目的還在于提供一種即使牙齒缺損部位較大時，亦可移植再生牙齒的方法。為解決上述問題，本專利技術的專利技術人經過反復研究發現在動物的體內培養再生牙胚時，通過將再生牙胚配置于間隔構件內，可防止來自所述生物體組織的壓カ所造成的變形，另外也可控制牙齒長度不會伸長到超過需要的長度。另外本專利技術的專利技術人發現，在動物的體內培養再生牙胚時，通過自該動物的外部給予機械性的刺激，可使牙周膜在牙根周圍充分生長發育。本專利技術的專利技術人進ー步發現，在動物體內培養再生牙胚時，通過將多個分別単獨制備的再生牙胚并排培養，可獲得包含多個再生牙胚或再生牙齒的再生牙齒單元，且可無需經過分離等步驟而直接將牙齒移植至較大的牙齒缺損部位。亦即本專利技術涉及ー種在哺乳動物的體內培養再生牙胚的，其包含下述步驟準備間隔構件；將在所述間隔構件內的所述再生牙胚配置于所述哺乳動物的體內；在所述哺乳動物體內培養所述再生牙胚； 其中，所述間隔構件具有可防止所述再生牙胚的伸長超過最大容許值的構造，且具有可使置于其內部的再生牙胚能夠與間隔構件外部連通的構造。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的一個實施方案中，所述哺乳動物為非人類的哺乳動物。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的一個實施方案中，所述間隔構件進一歩具有能夠防止所述哺乳動物的體內組織對所述再生牙胚施加過多壓カ的構造。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的一個實施方案中，其特征在干，將所述再生牙胚置于所述間隔構件內并配置于所述哺乳動物體內的步驟，是能夠使再生牙胚的未來為咬合面的部位配置在所述間隔構件的內壁附近，井面向所述間隔構件內壁，且使未來為根尖的部位配置為朝向所述間隔構件的所述內壁的相反方向的更大空間伸長的步驟。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的一個實施方案中，將所述再生牙胚置于所述間隔構件內并配置于所述哺乳動物體內進行培養的步驟，是以填滿所述間隔構件內部的支持載體來支持所述再生牙胚的方式進行配置。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的一個實施方案中，所述再生牙胚的培養及維持，是通過實質上由間葉細胞構成的第I細胞集合體，與實質上由上皮細胞構成的第2細胞集合體在支持載體內緊密接觸配置而進行的，其中間葉細胞與上皮細胞至少一方需是來自牙胚。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的另ー個實施方案中，在培養所述再生牙胚時，進ー步還包含自所述哺乳動物的外部給予機械性的刺激的步驟。在本專利技術的再生牙齒單元制造方法的另ー個實施方案中，所述機械性的刺激是大約20000Hz到大約40000Hz的振動。在本專利技術的再本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：辻孝，中尾一久，大島正充，
申請(專利權)人：株式會社器官再生工學，
類型：
國別省市：
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