本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)，具體涉及內(nèi)科醫(yī)學(xué)和/或心臟病學(xué)。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)測(cè)量存在于患者的樣品中的miRNA，提供用于給樣品分型及鑒別和/或治療患有心血管疾病或處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的患者的手段和方法。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)還提供用于鑒別新的心血管疾病治療的手段和方法。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專(zhuān)利技術(shù)】本發(fā) 明涉及醫(yī)學(xué)，具體涉及內(nèi)科醫(yī)學(xué)和/或心臟病學(xué)。心血管疾病技術(shù)上包括影響心血管系統(tǒng)的任何疾病。然而，其通常用于指與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的那些疾病。在美國(guó)和大多數(shù)的歐洲國(guó)家中，心血管疾病是死亡和殘疾的第一起因。檢測(cè)到心臟問(wèn)題的時(shí)候，潛在的起因(動(dòng)脈粥樣硬化)通常是相當(dāng)晚期了，已經(jīng)進(jìn)展了數(shù)十年。因此，不斷增強(qiáng)的重點(diǎn)在于通過(guò)改進(jìn)風(fēng)險(xiǎn)因素諸如健康飲食、運(yùn)動(dòng)和避免吸煙來(lái)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。冠心病(或冠狀動(dòng)脈疾病(CAD))是指冠狀循環(huán)不能為心肌和周?chē)M織提供充足的循環(huán)。CAD是復(fù)雜的疾病，其被認(rèn)為是由很多遺傳因素、環(huán)境因素及這些因素中的相互作用引起的。事實(shí)上，已經(jīng)鑒定了 CAD的很多風(fēng)險(xiǎn)因素，包括吸煙、高齡、男性性別、糖尿病、高收縮壓、心絞痛的個(gè)人史、高脂肪飲食、傳染原(infectious agent)、肥胖、增加的血楽；總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇、增加的血漿甘油三酯及降低的血漿高密度脂蛋白(HDL)膽固醇。然而，家族史是CAD最重要的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素之一，且孿生子研究還表明遺傳因素有助于CAD的發(fā)展。CAD的高死亡率、遲發(fā)性及家族中的擬表型造成的復(fù)雜化也在這個(gè)重要疾病的遺傳解剖中呈現(xiàn)出大的挑戰(zhàn)。CAD的主要起因由緩慢發(fā)展的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和急性血栓性閉塞事件組成,導(dǎo)致了缺血性的并發(fā)癥。由于CAD代表了人的發(fā)病率和死亡率的主要起因，存在對(duì)創(chuàng)新的診斷策略和治療策略的需要。目前，很難準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)受試者在將來(lái)是否會(huì)發(fā)展成CAD。現(xiàn)在，這是通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算器來(lái)完成的，其并非非常準(zhǔn)確。而且，本領(lǐng)域已知的風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算器不能預(yù)測(cè)受試者是否已經(jīng)緩慢地發(fā)展成斑塊形成，或是否處于急性閉塞性事件的風(fēng)險(xiǎn)中。一些臨床測(cè)試可用來(lái)評(píng)估個(gè)體是否患有心血管疾病，比如冠狀動(dòng)脈或外周動(dòng)脈的變窄。例如，心電圖、壓力測(cè)試(運(yùn)動(dòng)心電圖)、超聲心動(dòng)圖、驗(yàn)血(用于測(cè)試某些脂肪、膽固醇、糖和蛋白質(zhì)的反常水平)被用于診斷的目的。然而，這些測(cè)試中沒(méi)有一個(gè)能可靠地預(yù)測(cè)個(gè)體患心血管疾病諸如冠狀或外周動(dòng)脈疾病的風(fēng)險(xiǎn)。因此,存在對(duì)新的生物標(biāo)志物(biomarker)的需要，所述生物標(biāo)志物能夠更可靠地預(yù)測(cè)心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供用于給處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的樣品分型及用于鑒別和/或治療患有心血管疾病或處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的手段和方法。本專(zhuān)利技術(shù)的又一目的是提供用于鑒別在心血管疾病治療中有用的藥物及用于監(jiān)測(cè)這樣的治療的方法。本專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)測(cè)量存在于所述患者的樣品中的miRNA，提供用于給樣品分型及鑒別和/或治療患有心血管疾病或處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的患者的手段和方法。本專(zhuān)利技術(shù)還提供用于鑒別新的心血管疾病治療的手段和方法。本專(zhuān)利技術(shù)首次顯示出miRNA在血小板中的表達(dá)水平的改變與心血管疾病相關(guān)。很多人尋找心血管疾病的遺傳生物標(biāo)志物，但是從未有人用血小板來(lái)完成。例如，已經(jīng)顯示，循環(huán)的miRNA是對(duì)于AMI的診斷有用的生物標(biāo)志物2_4。據(jù)報(bào)道，心肌損傷后，miR-1和miR-208兩者在血漿中是升高的。然而，可能的是，這些miRNA是自受損的心肌細(xì)胞釋放到血流中，例如因?yàn)樵诔鲈旱腁MI患者中，miR-1的水平恢復(fù)正常。與在心血管疾病的急性期中考察循環(huán)的miRNA的這些研究相反，本專(zhuān)利技術(shù)人是在心血管疾病的穩(wěn)定期中考察存在于血小板中的miRNA，其中釋放自例如受損的心肌細(xì)胞的miRNA不再起作用。而且，由本專(zhuān)利技術(shù)人所發(fā)現(xiàn)的miRNA在之前的研究中并未被發(fā)現(xiàn)，因?yàn)樵诒緦?zhuān)利技術(shù)之前，尋找與心血管疾病相關(guān)的miRNA的其它人并未尋求miRNA在血小板純化樣品(例如，富含血小板的血漿)中的水平。相反是在急性心血管疾病過(guò)程中測(cè)定例如血漿樣品中的miRNA水平。然而，在急性心血管疾病的過(guò)程中，幾種miRNA在全血或血漿樣品中是被上調(diào)和/或下調(diào)的(即，異常調(diào)節(jié)的)。這些異常調(diào)節(jié)的miRNA包括釋放自受損的心臟細(xì)胞的miRNA，而且包括例如釋放自對(duì)心臟損傷起作用的活化白細(xì)胞的miRNA。同時(shí)，通常伴隨急性心血管疾病的缺血性損傷已經(jīng)對(duì)血或血漿中的幾種miRNA的表達(dá)水平產(chǎn)生影響。之前的任何研究沒(méi)有鑒別在本專(zhuān)利技術(shù)中被鑒別為心血管疾病的預(yù)測(cè)性風(fēng)險(xiǎn)因素的miRNA，因?yàn)檫@些miRNA沒(méi)有以允許通過(guò)由專(zhuān)利技術(shù)人所使用的篩選法(微陣列)來(lái)測(cè)定CAD患者和健康對(duì)照之間的I. 5-2倍的差異的高水平存在于心血管疾病的急性期的全血中微陣列，這種篩選方法是測(cè)試大量的總miRNA所需要的。 通過(guò)使用在血小板方面相對(duì)純的樣品即富含血小板的血漿樣品，專(zhuān)利技術(shù)人能夠鑒別存在于血小板中且在處于風(fēng)險(xiǎn)中但還未患有急性心血管疾病的受試者中被異常調(diào)節(jié)的miRNA。這些miRNA充當(dāng)處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的生物標(biāo)志物，且因此可以用作預(yù)測(cè)性的生物標(biāo)志物。miRNA是通過(guò)抑制mRNA的翻譯或促進(jìn)mRNA的降解來(lái)抑制蛋白質(zhì)合成的小的核酸分子。繼成為正常發(fā)育和生理學(xué)的重要調(diào)節(jié)器之后，已經(jīng)將miRNA的異常調(diào)節(jié)的表達(dá)與許多人類(lèi)疾病相關(guān)聯(lián)。結(jié)果，認(rèn)為人的miRNA作為生物標(biāo)志物是非常有用的。最近，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了微RNA通路在無(wú)核血小板中的存在1O現(xiàn)在，本專(zhuān)利技術(shù)提供這樣的見(jiàn)解血小板miRNA的表達(dá)特征(expression profile)在確定受試者是否患有心血管疾病或是否處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中是有用的。例如，本專(zhuān)利技術(shù)表明，在與健康對(duì)照的血小板相比時(shí)，特定的miRNA在患有CAD的患者的血小板中被差異表達(dá)。在第一個(gè)實(shí)施方式中，本專(zhuān)利技術(shù)提供用于測(cè)定受試者是否處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的方法，該方法包括用所述受試者的樣品來(lái)測(cè)定至少一種miRNA的(相對(duì))表達(dá)水平，所述 miRNA 選自由 miR-545 :9. I、miR-624* 和 miR-454*、hsaiiR-340*、hsa-miR-615-5p、hsa-miR-451、hsa-miR-1280及這些miRNA中的任一個(gè)的同源物和直系同源物(orthologue)組成的組，且將所述至少一種miRNA的表達(dá)水平與參考值進(jìn)行比較，其中所述比較的結(jié)果指示所述個(gè)體是否患有心血管疾病或處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中。優(yōu)選地，所述方法為體外方法。所述參考值優(yōu)選地是通過(guò)使用參考樣品來(lái)測(cè)定所述至少一種miRNA的表達(dá)水平而得到的，參考樣品優(yōu)選地來(lái)自未患有心血管疾病或未處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述miRNA選自由hsa-miR-340*、miR-624*、miR-454及這些miRNA中的任一個(gè)的同源物和直系同源物組成的組。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述miRNA為hsa-miR-340*或hsa-miR-340*的同源物或直系同源物。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述miRNA為miR-624*或miR-624*的同源物或直系同源物。沒(méi)有必要同時(shí)測(cè)定參考值和測(cè)試值兩者。例如，可能的是，優(yōu)選地使用來(lái)自未患有心血管疾病或未處于患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的樣品來(lái)測(cè)定參考值且反復(fù)使用所述參考值以測(cè)定測(cè)試樣品中的所述至少一種miRNA的相對(duì)表達(dá)是否是患心血管疾病的個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)的指示。可能的是，將已經(jīng)表明是患心血管疾病的低風(fēng)險(xiǎn)的指示的表達(dá)水平用作參考值，例如來(lái)自健康個(gè)體的許多樣品中的miRNA的平均水平。另一方面，還可能能夠的是，將已經(jīng)表明是心血管疾病或患心血管疾病的高風(fēng)險(xiǎn)的指示表達(dá)水本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專(zhuān)利技術(shù)】...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：E·E·J·M·克里莫斯，莎拉·約翰娜·平托希茨馬，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：阿姆斯特丹大學(xué)學(xué)術(shù)醫(yī)學(xué)中心，
類(lèi)型：
國(guó)別省市：
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