本發明專利技術涉及一種H1N1型豬流感病毒疫苗株，其分類命名為豬甲型流感病毒A/Swine/Nanjing/50/2011(H1N1)，微生物保藏號為：CCTCCNO:V201218。本發明專利技術進行了H1N1豬流感病毒毒株的分離鑒定、全基因序列測定，并用H1N1豬流感病毒毒株制成預防豬流感的滅活疫苗。本發明專利技術毒株制備的H1N1豬流感病毒滅活疫苗對同源強毒攻毒的豬可以提供很好的保護，具有良好的免疫原性，不論單苗或聯苗，均可有效預防H1N1型豬流感。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及動物病毒學領域，具體涉及一種HlNl型豬流感病毒疫苗株及其在制備預防或治療豬流感藥物中的應用。
技術介紹
豬流感病毒(Swin e influenza Virus, SIV)屬于正粘病毒科A型流感病毒,可引起豬急性、熱性、群發性和高度接觸性呼吸道疾病，表現為突發高熱，精神沉郁，食欲廢絕，呼吸困難，陣發性咳嗽等癥狀。雖然單一的豬流感病死亡率不高，病豬可迅速康復，但其多與其它疫病，如藍耳病、傳染性胸膜肺炎、豬鏈球菌病等并發或繼發感染，使病情復雜化、嚴重化，導致豬死亡率急劇上升，造成嚴重的經濟損失。另外，豬體可充當人流感和禽流感病毒的“混合器”，是造成流感大流行的潛在因素，因此，及時抑制豬流感病毒的傳播具有重要的公共衛生意義。近年來，國內關于發生豬流感的消息時有報道，2001年7月以來，我國浙江、山東、江蘇、安徽、湖北等省市發生了豬的“無名高熱病”，最終證實了此次病原含有豬流感病毒(SIV)和豬繁殖和呼吸綜合征病毒(PRRSV)，此次豬流感的流行范圍廣，損失嚴重。2002年6-10月，安徽省大部分地區暴發了豬流感，全省發病豬達300萬頭，直接損失達億元。2009年3月起始于墨西哥的HlNl亞型流感疫情，再次證實豬流感病毒在人類流感研究和控制中具有重要地位。現有技術中的豬流感病毒疫苗株的免疫原性和反應原性不能滿足要求，采用現有疫苗株制備的疫苗產生的抗體水平不高，抗體持續期不長，不能有效抵抗目前流行的毒株的攻毒。
技術實現思路
本專利技術目的是提供一種HlNl型豬流感病毒疫苗株，該疫苗株具有良好的免疫原性和反應原性，采用該毒株制備的疫苗免疫后能夠產生較高水平的抗體，抗體持續期長，并且能夠抵抗同源毒株的攻毒。本專利技術提供一種HlNl型豬流感病毒疫苗株，該疫苗株的分類命名為豬甲型流感病毒 A/Swine/Nanjing/50/2011 (HlNl)，微生物保藏號為CCTCC N0:V201218, 保藏時間2012年6月6日 保藏單位名稱中國典型培養物保藏中心CCTCC 保藏編號CCTCC NO V201218 保藏單位地址中國武漢大學。本專利技術目的之二是提供上述HlNl型豬流感病毒疫苗株在制備預防或治療豬流感藥物中的應用，將上述疫苗株應用于預防或治療HlNl型豬流感。本專利技術目的之三是提供一種預防豬流感的疫苗組合物。所述預防豬流感的疫苗組合物由所述HlNl型豬流感病毒疫苗株和藥學上可接受的載體或輔料組成。本HlNl型豬流感病毒A/Swine/Nanjing/50/2011株具有很好的免疫原性和反應原性。采用該毒株制備的疫苗免疫后能夠產生較高水平的抗體，抗體持續期長，并且能夠抵抗同源毒株的攻毒。本毒株制備的HlNl豬流感病毒滅活疫苗對同源強毒攻毒的豬可以提供很好的保護，具有良好的免疫原性，不論單苗或聯苗，均可有效預防HlNl型豬流感。附圖說明圖I為HA基因的系統進化樹； 圖2為NA基因的系統進化樹； 圖3為PB2基因的系統進化樹； 圖4為PBl基因的系統進化樹； 圖5為PA基因的系統進化樹； 圖6為NP基因的系統進化樹； 圖7為M基因的系統進化樹； 圖8為NS基因的系統進化樹； 圖9為免疫動物在HlNl亞型強毒攻擊后動物體溫變化曲線； 圖10為疫苗免疫動物后血凝抑制抗體效價增長曲線。具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本專利技術，本專利技術的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本專利技術的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本專利技術的精神和范圍下可以對本專利技術技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本專利技術的保護范圍。實施例I豬甲型流感病毒A/Swine/Nanjing/50/2011 (HlNl)株的分離純化和鑒定 I.病毒的分尚與雞胚尿囊液的收獲 取感染豬的肺臟組織加入適量的滅菌生理鹽水研磨成勻漿，反復凍融3次，8000轉/分鐘離心10分鐘，棄去上層脂肪，吸取中間液體。在中間液體中加入終濃度為1000單位/ml的青霉素和1000單位/ml的鏈霉素4°C處理I小時，然后8000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液。將上清液經尿囊腔接種9-11日齡的SPF雞胚，O. 2ml/枚，置孵化器中培養72小時。每天觀察兩次，去除24小時內的污染胚，收取其余雞胚的尿囊液。2.有限稀釋法純化 將步驟I收獲的雞胚尿囊液以10倍比梯度依次稀釋成KT1 10_9系列濃度，取各稀釋度的尿囊液分別通過尿囊腔接種9-11日齡的SPF雞胚。接種后雞胚的培養方法、尿囊液收獲方法同步驟I。收獲尿囊液通過雞紅細胞凝集(HA)試驗檢測是否含有SIV。取含有SIV的最高稀釋度的雞胚尿囊液接種SPF雞胚后收獲的尿囊液，按照有限稀釋法連續傳代3次進行純化，最終獲得純化的病毒。雞紅細胞凝集價的測定(HA)試驗(參考常規微量法進行)取潔凈的“V”型96孔反應板，每孔加入25 μ I生理鹽水，吸取25 μ I待檢雞胚尿囊液于第I孔內，充分混勻后吸25 μ I于第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，棄去25μ 1，第12孔作為生理鹽水對照孔。然后每孔加入1%雞紅細胞懸液25ul，在微量振蕩器上搖勻，室溫靜置20min后觀察結果。3.病毒的鑒定(I)雞胚半數感染量(EID5tl)的測定 取步驟2得到的純化病毒接種SPF雞胚后獲得的尿囊液，分別用滅菌生理鹽水作10_3 10_8的10倍比稀釋，每個稀釋度接種SPF雞胚5枚，O. Iml/胚；同時設空白對照胚3枚，每枚雞胚接種生理鹽水O. 1ml。接種后，置35 37 °C孵育96h，收集尿囊液，死胚及時置4°C冰箱保存。逐枚測定對O. 5%雞紅細胞的凝集價，有效價者判為感染，無效價者判為陰性。最后按照Reed-Muench法計算病毒的EID5tl =高于50%感染病毒稀釋度的對數+ (高于50%感染百分數-50)/(高于50%感染百分數-低于50%感染百分數)。結果顯示純化病毒在SPF雞胚中生長良好，對O. 5%的雞紅血球具有血凝性，經5次傳代培養，血凝效價最終穩定在8 log 2，72h內不引起雞胚死亡。EID50測定結果見表I，通過計算得到病毒的EID5tl為10_6 32/0. 1ml。權利要求1.一種HlNl型豬流感病毒疫苗株，其分類命名為豬甲型流感病毒A/Swine/Nanjing/50/2011 (HlNl)，微生物保藏號為CCTCC N0:V201218。2.—種權利要求I所述HlNl型豬流感病毒疫苗株在制備預防或治療豬流感藥物中的應用。3.一種預防豬流感的疫苗組合物，其特征在于該疫苗組合物由權利要求I所述HlNl型豬流感病毒疫苗株和藥學上可接受的載體或輔料組成。全文摘要本專利技術涉及一種H1N1型豬流感病毒疫苗株，其分類命名為豬甲型流感病毒A/Swine/Nanjing/50/2011(H1N1)，微生物保藏號為CCTCCNO:V201218。本專利技術進行了H1N1豬流感病毒毒株的分離鑒定、全基因序列測定，并用H1N1豬流感病毒毒株制成預防豬流感的滅活疫苗。本專利技術毒株制備的H1N1豬流感病毒滅活疫苗對同源強毒攻毒的豬可以提供很好的保護，具有良好的免疫原性，不論單苗或聯苗，均可有效預防H1N1型豬流感。文檔編號A6本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種H1N1型豬流感病毒疫苗株，其分類命名為：豬甲型流感病毒A/Swine/Nanjing/50/2011(H1N1)？，微生物保藏號為：CCTCC？NO:V201218。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：白昀，馮志新，邵國青，劉茂軍，白方方，熊祺琰，王海燕，王占偉，甘源，劉冬霞，
申請(專利權)人：江蘇省農業科學院，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。