一種豬飼料有效磷仿生評定法制造技術

一種豬飼料有效磷仿生評定法，采用單胃動物仿生消化系統測定飼料磷體外消化率，包括如下步驟：透析袋前處理、胃腸道的模擬消化液以及緩沖液配制、上機操作和有效磷的測定；稱取飼料樣品于裝有透析袋的模擬消化器中，加入緩沖液和模擬消化液，設置消化參數，進行模擬消化過程，消化結束采用鉬藍比色法測定磷的含量。本發明專利技術使用實時動態的消化產物分離技術，通過單胃動物仿生消化系統自動控制體外消化過程，提高測試結果的重演性和精度。

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種豬飼料有效磷仿生評定法，特別是涉及一種在動物體外條件下模擬飼料中磷在豬胃腸道內被消化、吸收后有效磷的測定方法。
技術介紹
磷(Phosphorus)是動植物體內的必需礦物元素，是繼蛋白質和能量之外的第三昂貴的飼料原料(Lei等，2000 ;Novak等，2000 ;Fan等，2001 ;霍啟光，2002)。客觀、準確評定各種飼料原料的生物學效價是動物營養需要量研究、優化飼料配方的基礎，是提高畜禽日糧利用率、降低日糧成本及養殖業節能減排的決策依據。飼料磷生物學效價的評定方法主要有體內法(in vivo)和體外法(in vitro)。體內法耗資、費力、費時,系統誤差和偶然誤差影響因素多，不同時空條件下的測值重演性、可比性差不能滿足研究和生產應用所需。 而體外法具有快速、簡便、費用低等優點，各國營養學家都有諸多研究報道。近年來，飼料磷的體外評定技術在國際上越來越受到關注，從而推動了相關研究的快速發展，其中以Zyla等(1995)和Liu等(1997，1998)所建立的方法應用最為廣泛。然而這些體外法大都以三角瓶、試管、透析管等簡單實驗器材為基礎，由于大量的人工操作引入的系統誤差所得結果可重復性和精度較差。
技術實現思路
本專利技術的技術解決問題克服現有技術的不足，提供一種豬飼料有效磷仿生評定法，提高了試驗結果的重演性和精度。本專利技術的技術解決方案如下一種豬飼料有效磷仿生評定法，包括步驟如下(I)將透析袋剪成23 27cm的小段，在I. 5 2. 5%碳酸氫鈉和ρΗ=8· O的O. 5 I.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉的溶液中將透析袋煮沸lOmin，用蒸餾水徹底清洗透析袋后，再將透析袋放在pH=8. O的0. 5 I. 5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉的溶液中煮沸IOmin ;待溶液冷卻后4°C保存；透析袋使用前用去離子水徹底清洗；(2)制備胃和小腸緩沖液和模擬消化液；(3)將緩沖液放入單胃動物仿生消化系統中，并把處理好的透析袋固定在所述模擬消化器上；(4)準確稱取I 2g粉碎過40目篩的飼料樣品置于裝有透析袋的模擬消化器中；(5)往透析袋中加入模擬胃液；(6)將所述的模擬消化器置于單胃動物仿生消化系統中，設置胃和小腸階段模擬消化的參數，開始進行胃階段模擬消化；(7)胃階段消化結束后，用加酶器在模擬消化器中分別準確地加入碳酸氫鈉及小腸液，在單胃動物仿生消化系統中的繼續完成小腸階段的模擬消化；(8)待豬飼料樣品胃和小腸階段模擬消化結束后，采用鑰藍比色法測定磷的含量。所述步驟(2)中胃緩沖液為pH為2. O的85 90mmol/L氯化鈉和6 8mmol/L氯化鉀溶液。所述步驟(2)中小腸緩沖液為pH為6. 3 6. 6的190 196mmol/L乙酸鈉，97 108mmol/L氯化鈉和14 16mmol/L氯化鉀溶液。所述步驟(2)中模擬胃液為pH 2.0,738 1475 U/mL胃蛋白酶。所述步驟(2)中模擬小腸液為pH 6. 3 6. 6，57 76 U/mL胰蛋白酶、7 10 U/HiL糜蛋白酶、186 264 U/mL淀粉酶。所述步驟(2)中所使用的緩沖液和模擬消化液中消化酶的活性、緩沖液中離子濃度以及PH值均來自于大量動物實驗數據，使體外模擬的條件均有體內數據佐證，從而擺脫了以往體外法選取參數的隨意性。所述步驟(6)中胃階段模擬消化的參數為溫度39°C，緩沖液流速120mL/min，消化時間I 2h。 所述步驟(7)中小腸階段模擬消化的參數為溫度39°C，緩沖液流速120mL/min，消化時間5 16h。上述步驟(6)和(7)中胃和小腸階段模擬消化參數以體外磷消化率最大化為原貝U，通過反復體外試驗論證，得出的最佳測定飼料有效磷的仿生消化參數。本專利技術與現有技術相比的優點在于本專利技術克服了傳統體外消化法在消化過程中無法實現產物實時分離的缺陷，使用實時動態的消化產物分離技術，結合目前體外法測定有效磷的方法，通過單胃動物仿生消化系統中自動控制體外消化過程，基本排除了由于人工操作引入的系統誤差，提高了試驗結果的重演性和精度。附圖說明圖I為本專利技術實現的流程圖；圖2為本專利技術單胃動物仿生消化系統和模擬消化器連接示意圖；其中I.為透析袋，2.為模擬消化器，3.為單胃動物仿生消化系統，4.為胃緩沖液瓶，5.為小腸緩沖液瓶，6.為加酶器，7.為計算機處理系統；圖3為本專利技術中不同飼料原料總磷透過率與無機磷透過率的比較。具體實施例方式如圖I所示，本專利技術具體操作方法可以如下方式實施(I)將透析袋剪成25cm左右的小段，在2%碳酸氫鈉和pH=8. O的lmmol/L乙二胺四乙酸二鈉的溶液中將透析袋煮沸lOmin。用蒸餾水徹底清洗透析袋后，將透析袋放在pH=8. O的lmmol/L乙二胺四乙酸二鈉的溶液中煮沸lOmin。待溶液冷卻后4°C保存。透析袋使用前用去離子水徹底清洗。(2)制備胃和小腸緩沖液和模擬消化液。(21)胃的緩沖液pH為2. O的85mmol/L氯化鈉和6mmol/L氯化鉀溶液。(22)小腸的緩沖液pH為6. 3的190mmol/L乙酸鈉，97mmol/L氯化鈉和14mmol/L氯化鉀溶液。(23)模擬胃液pH 2.0,738 U/mL胃蛋白酶溶液。(24)模擬小腸液pH 6.3,57 U/mL胰蛋白酶、7 U/mL糜蛋白酶、186 U/mL淀粉酶溶液。(3)如圖2所示，將步驟(21)中胃的緩沖液和步驟(22)中小腸的緩沖液分別加入至IJ單胃動物仿生消化系統3中胃緩沖液瓶4和小腸緩沖液瓶5中，把處理好的透析袋I固定在所述模擬消化器2上。(4)準確稱取Ig粉碎過40目篩的飼料樣品置于裝有透析袋I的模擬消化器2中。(5)往透析袋I中加入步驟( 23)的模擬胃液；(6)將所述模擬消化器2置于單胃動物仿生消化系統3中，使用計算機7設置胃和小腸階段模擬消化的參數。胃階段模擬消化的參數為溫度39°C，緩沖液流速120mL/min，消化時間lh。小腸階段模擬消化的參數為溫度39°C，緩沖液流速120mL/min，消化時間5h。并開始進行胃階段模擬消化；(7)胃階段消化結束后，用加酶器6在模擬消化器2中分別準確地加入2mL碳酸氫鈉及步驟(24)的模擬小腸液，在單胃動物仿生消化系統3中的繼續完成小腸階段的模擬消化；(8)待豬飼料樣品胃和小腸階段模擬消化結束后，采用鑰藍比色法測定磷的含量。下面結合具體實施例對本專利技術進一步詳細說明。實施例不同飼料原料總磷透過率與無機磷透過率的比較。準確稱取Ig飼料樣品置于裝有透析袋的模擬消化器中，同時測定飼料水分含量，每種飼料稱取5份樣品。往透析袋中加入20mL胃液(含738 U/mL胃蛋白酶)。將模擬消化器置于單胃動物仿生消化系統中，開始試驗。胃階段消化結束后，用加酶器在每個模擬消化器中分別加入2mL碳酸氫鈉及2mL模擬小腸液，使小腸液中含57U/mL胰蛋白酶、7U/mL糜蛋白酶、186U/mL淀粉酶，在單胃動物仿生消化系統中的繼續完成小腸階段的模擬消化。待樣品消化結束后，采用鑰藍比色法測定消化殘渣有機磷和透析液無機磷的含量。不同飼料原料有機磷透過率與無機磷透過率的比較如圖3所示。不同飼料原料磷的體外消化吸收形式不同，玉米和豆柏的體外無機磷的消化率顯著低于麥麩(p〈0. 05);玉米和豆柏的體本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種豬飼料有效磷仿生評定法，其特征在于實現步驟如下：（1）透析袋的前處理；（2）胃和小腸緩沖液和模擬消化液的制備；（3）將緩沖液放入單胃動物仿生消化系統中，并把處理好的透析袋固定在所述模擬消化器上；（4）準確稱取飼料樣品置于裝有透析袋的模擬消化器中；（5）往透析袋中加入模擬胃液；（6）將所述模擬消化器置于單胃動物仿生消化系統中，設置胃和小腸階段模擬消化的參數，開始進行胃階段模擬消化；（7）胃階段模擬消化結束后，用加酶器在模擬消化器中分別準確地加入碳酸氫鈉及小腸液，在單胃動物仿生消化系統中的繼續完成小腸階段的模擬消化；（8）待飼料樣品進行胃和小腸階段模擬消化結束后，采用鉬藍比色法分別測定磷的含量。

【技術特征摘要】
1.一種豬飼料有效磷仿生評定法，其特征在于實現步驟如下 (1)透析袋的前處理； (2)胃和小腸緩沖液和模擬消化液的制備； (3)將緩沖液放入單胃動物仿生消化系統中，并把處理好的透析袋固定在所述模擬消化器上； (4)準確稱取飼料樣品置于裝有透析袋的模擬消化器中； (5)往透析袋中加入模擬胃液； (6)將所述模擬消化器置于單胃動物仿生消化系統中，設置胃和小腸階段模擬消化的參數，開始進行胃階段模擬消化； (7)胃階段模擬消化結束后，用加酶器在模擬消化器中分別準確地加入碳酸氫鈉及小腸液，在單胃動物仿生消化系統中的繼續完成小腸階段的模擬消化； (8)待飼料樣品進行胃和小腸階段模擬消化結束后，采用鑰藍比色法分別測定磷的含量。2.根據權利要求I所述的一種豬飼料有效磷仿生評定法，其特征在于所述步驟(2)中胃緩沖液為PH為2. O的85 90mmol/L氯化鈉和6 8mmol/L氯化鉀溶液。3.根據權利要求I所述的一種豬飼料有效磷仿生...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張宏福，陳亮，莊曉峰，李東衛，趙峰，
申請(專利權)人：中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，
類型：發明
國別省市：