本發(fā)明專利技術(shù)公開一種具有物理、生物雙重靶向作用的肝癌治療新制劑，為乳化-溶劑揮發(fā)法制備的多烯紫杉醇靶向納米粒，采用單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸、多烯紫杉醇和半乳糖化膽固醇溶于二氯甲烷形成有機相；吸取有機相，緩緩注入到聚乙烯醇水溶液中，超聲乳化，獲得的乳化液倒入另一聚乙烯醇水溶液中，攪拌去除二氯甲烷，經(jīng)聚碳酸酯膜過濾，真空冷凍干燥，60Co輻照滅菌后保存?zhèn)溆谩Ｋ频玫亩嘞┳仙即及邢蚣{米粒的平均粒徑為209.3nm，多元分散系數(shù)為0.40；多烯紫杉醇靶向納米粒的載藥率為3.79%。本發(fā)明專利技術(shù)的載多烯紫杉醇高分子納米粒，粒徑約200nm；體內(nèi)抗腫瘤實驗得出，多烯紫杉醇靶向納米粒聯(lián)合超聲輻照進行治療效果最佳，抑瘤率達74.2%。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種采用現(xiàn)代藥劑學(xué)技術(shù)制備的肝癌靶向治療新制劑。超聲波輻照產(chǎn)生的生物效應(yīng)使腫瘤血流量增多，血管通透性加大，進而使多烯紫杉醇納米粒大量聚集在腫瘤局部，并通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑進入腫瘤細胞內(nèi)，從物理學(xué)、生物學(xué)雙重途徑發(fā)揮肝癌革巴向治療作用。
技術(shù)介紹
肝癌全球發(fā)病率已超過62. 6萬/年，其中55%的病例發(fā)生在中國。目前肝癌的治療手段主要有外科手術(shù)切除和局部介入治療，各種技術(shù)尤其是腫瘤局部消融技術(shù)發(fā)展迅猛并廣泛應(yīng)用于臨床。但研究結(jié)果表明，肝癌患者的5年生存率并沒有明顯提高。因此，探索更為有效的肝癌治療方法對延長患者的生命，提高生活質(zhì)量具有極為重要的意義。·多烯紫杉醇是一種半合成抗腫瘤藥物，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于如乳腺癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、胃癌和頭頸部腫瘤等多種惡性腫瘤的化療。體內(nèi)外研究表明，多烯紫杉醇具有較強的抗肝細胞癌作用。但由于多烯紫杉醇難溶于水，目前臨床上使用制劑多采用吐溫增溶，容易引起過敏反應(yīng)。此外，系統(tǒng)化療引起的骨髓抑制、神經(jīng)、心臟及肝腎毒性等不良反應(yīng)較明顯。因此，改變多烯紫杉醇劑型，提高其水溶性與腫瘤靶向性，對提高其抗腫瘤療效、降低毒副作用具有重要意義。腫瘤靶向治療是現(xiàn)代腫瘤治療研究的重點與熱點之一，其利用特異性載體，將藥物或其他殺傷腫瘤細胞的活性成分選擇性地運送到腫瘤靶部位，具有高效、低毒的抗腫瘤優(yōu)勢。肝癌細胞表面存在去唾液酸糖蛋白受體，可特異性識別末端帶有半乳糖殘基的糖蛋白并與之結(jié)合，再通過細胞內(nèi)吞作用，主動轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤作用。去唾液酸糖蛋白受體已經(jīng)成為肝癌靶向治療研究的重要靶點之一。 單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸是一種兩嵌段聚合物，常用于制備各種載藥納米粒。疏水性的聚乳酸羥基乙酸位于納米粒的核心，包裹各種難溶性抗腫瘤藥物。親水性的聚乙二醇分布在納米粒表面，明顯改善了納米粒的親水性和表面穩(wěn)定性，并可顯著減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對納米粒的攝取清除作用，使納米粒具有長循環(huán)的效果。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種具有物理、生物雙重靶向作用的肝癌治療新制劑以及在制備烯紫杉醇靶向納米粒聯(lián)合超聲輻照治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)的目的是這樣實現(xiàn)的，所述的一種具有物理、生物雙重靶向作用的肝癌治療新制劑，為乳化-溶劑揮發(fā)法制備的多烯紫杉醇靶向納米粒，采用單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸、多烯紫杉醇和半乳糖化膽固醇溶于二氯甲烷形成有機相；吸取有機相，緩緩注入到聚乙烯醇水溶液中，超聲乳化，獲得的乳化液倒入另一聚乙烯醇水溶液中，攪拌去除二氯甲烷，經(jīng)聚碳酸酯膜過濾，真空冷凍干燥，6tlCo輻照滅菌后獲得多烯紫杉醇靶向納米粒。所制得的多烯紫杉醇靶向納米粒的平均粒徑為209. 3nm,多元分散系數(shù)為O. 40 ；多烯紫杉醇靶向納米粒的載藥率為3. 79%。本專利技術(shù)所述的一種具有物理、生物雙重靶向作用的肝癌治療新制劑的制備方法，步驟為精密稱取IOOmg單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸輕基乙酸、5mg多烯紫杉醇、15mg半乳糖化膽固醇Gal-C4-Chol，溶于I ml 二氯甲烷，60°C渦旋震蕩，使其充分溶解，為有機相；用注射器吸取有機相，緩緩注入到3ml 5 % (體積分數(shù))聚乙烯醇水溶液中，超聲乳化，50 W,工作30 sec，間歇5 sec，乳化5次，乳化液倒入到8ml I % (體積分數(shù))聚乙烯醇溶液，磁力攪拌去除二氯甲烷，聚碳酸酯膜過濾，真空冷凍干燥，6°Co輻照滅菌后4°C保存。本專利技術(shù)所述的一種具有物理、生物雙重靶向作用的肝癌治療新制劑在制備烯紫杉醇靶向納米粒聯(lián)合超聲輻照治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)的優(yōu)點為超聲波在生物體內(nèi)傳播時，可產(chǎn)生熱效應(yīng)、空化效應(yīng)、機械效應(yīng)等，進而使組織血流量增多，血管通透性加大。正常組織血管內(nèi)皮間隙多小于lOOnm，粒徑大于IOOnm的顆粒難以通過血管內(nèi)皮到達組織間隙。本專利技術(shù)采用乳化溶劑揮發(fā)法制備靶向 肝癌的載多烯紫杉醇高分子納米粒，粒徑約200nm，靜脈注射后難以進入正常組織間隙，再通過超聲波輻照提高腫瘤局部血流量，擴張腫瘤血管通透性，使納米粒大量聚集在腫瘤局部，并且通過去唾液酸糖蛋白受體進入肝癌細胞內(nèi)，發(fā)揮高效、低毒的肝癌靶向治療效果。體內(nèi)抗腫瘤實驗得出，多烯紫杉醇靶向納米粒聯(lián)合超聲輻照進行治療效果最佳，抑瘤率達74. 2%，明顯高于其它各組，二者聯(lián)合具有協(xié)同抗腫瘤作用。附圖說明圖I為多烯紫杉醇靶向納米粒的掃描電鏡圖。圖2為多烯紫杉醇靶向納米粒在磷酸鹽緩沖液中釋放圖，6h釋放了 11. 3%，3天累積釋放了 78. 1%。具體實施例方式I、多烯紫杉醇靶向納米粒的制備 采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備多烯紫杉醇靶向納米粒。精密稱取IOOmg單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸輕基乙酸、5mg多烯紫杉醇、15mg半乳糖化膽固醇Gal-C4_Chol,溶于I ml 二氯甲烷，渦旋震蕩，使其充分溶解，為有機相；用注射器吸取有機相，緩緩注入3ml 5 % (體積分數(shù))聚乙烯醇水溶液中，超聲乳化，50 W，工作30 sec，間歇5 sec，乳化5次，乳化液倒入8ml I % (體積分數(shù))聚乙烯醇溶液，磁力攪拌去除二氯甲烷，聚碳酸酯膜過濾，真空冷凍干燥，6°Co輻照滅菌后4°C保存?zhèn)溆谩?、多烯紫杉醇靶向納米粒的表征 配制多烯紫杉醇靶向納米粒水溶液，充分超聲分散后，滴于覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，干燥后用離子鍍膜儀濺金，在掃描電子顯微鏡下觀察可見納米粒分散良好，呈類球形(見圖I)。激光粒徑儀測得多烯紫杉醇靶向納米粒的平均粒徑為209. 3nm，多元分散系數(shù)為O. 40。采用高效液相色譜檢測多烯紫杉醇靶向納米粒的載藥率。流動相甲醇/水=75/25(體積比)，流速1. Oml/min,柱溫30°C，檢測波長227nm。精密稱取多烯紫杉醇靶向納米粒IOmg于5ml離心管中，加入O. 5ml 二氯甲燒,充分溶解后加入2. 5ml甲醇,潤旋IOmin,5000rpm離心lOmin，取上清液20μ1進樣，測得載藥率為3. 79%。3、多烯紫杉醇靶向納米粒的體外釋放 以O(shè). 02 mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 7. 2)制備多烯紫杉醇靶向納米粒溶液(含O. 02 %(體積分數(shù))NaN3、0. I % (體積分數(shù))吐溫80)，于37°C，80rpm恒溫搖床震蕩進行體外釋放，定時取樣，5000rpm超濾離心10分鐘，濾液行高效液相色譜測定多烯紫杉醇含量。結(jié)果多烯紫杉醇靶向納米粒在磷酸鹽緩沖液中平穩(wěn)釋放，6h釋放了 11. 3%，3天累積釋放了 78. 1%(圖 2)。4、多烯紫杉醇靶向納米粒的急性毒性試驗 取昆明種小鼠80只，體質(zhì)量為18 22 g，雌雄各半，隨機分為10組，每組8只，分別經(jīng)鼠尾靜脈注射多烯紫杉醇靶向納米粒溶液(多烯紫杉醇劑量分別為80、120、180、270、405mg/kg)和多帕菲注射液(多烯紫杉醇劑量分別為15、23、34、51、76 mg/kg)。給藥后常規(guī)飼養(yǎng)2周，記錄小鼠的外觀、活動和死亡情況等。改良寇氏法測得多帕菲注射液小鼠半數(shù)致死量為47. 3mg/kg,而多烯紫杉醇祀向納米粒的小鼠半數(shù)致死量升高到219. 5mg/kg。5、超聲輻照對腫瘤血流灌注的影響 體外培養(yǎng)人肝癌細胞H印G2，大量擴增后用生理鹽水調(diào)整細胞密度約I X 107/ml，每只裸鼠右腋下注射O. 2 ml細胞本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種具有物理、生物雙重靶向作用的肝癌治療新制劑，為乳化？溶劑揮發(fā)法制備的多烯紫杉醇靶向納米粒，采用單甲氧基聚乙二醇？聚乳酸羥基乙酸、多烯紫杉醇和半乳糖化膽固醇溶于二氯甲烷形成有機相；吸取有機相，緩緩注入到聚乙烯醇水溶液中，超聲乳化，獲得的乳化液倒入另一聚乙烯醇水溶液中，攪拌去除二氯甲烷，經(jīng)聚碳酸酯膜過濾，真空冷凍干燥，60Co輻照滅菌后獲得多烯紫杉醇靶向納米粒。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳志奎，林禮務(wù)，薛恩生，
申請(專利權(quán))人：福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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