用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的OGP-AcAP5融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸，它涉及一種融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸。解決目前尚無同時有效治療骨質(zhì)疏松和血栓藥品的缺陷。用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的OGP-AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。該融合蛋白核酸的序列如SEQ?ID?NO：1所示。本發(fā)明專利技術(shù)可用于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸。
技術(shù)介紹
老年人骨質(zhì)疏松發(fā)病率較高，全球有2億骨質(zhì)疏松患者，并且女性多于男性。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的標準，美國國家健康和營養(yǎng)調(diào)查(NHANES III，1988 1994年)結(jié)果表明，骨質(zhì)疏松嚴重影響老年人生活質(zhì)量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會出現(xiàn)骨質(zhì)疏松性骨折，一旦患者經(jīng)歷了第一次骨質(zhì)疏松性骨折，繼發(fā)性骨折的危險明顯加大。中國老年人居于世界首位，現(xiàn)有骨質(zhì)疏松癥患者9000萬，占總?cè)丝诘?.I %。隨著社會老齡化的進程，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率呈上升趨勢，預計到2050年將增加到 2.21億，那時全世界一半以上的骨質(zhì)疏松性骨折將發(fā)生在亞洲，絕大部分在中國。有學者對1995 1996年美國骨質(zhì)疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年發(fā)生數(shù)進行調(diào)查顯示，每年發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折150萬次，其中椎體骨折70萬次，腕部骨折20萬次，髖部骨折30萬次，其它骨折30萬次。血栓形成是一種涉及許多彼此相互作用的遺傳和環(huán)境因素的多因素變化的過程。而對于老年人其凝血系統(tǒng)又有其特殊性，老年人纖維蛋白原(FIB)含量、組織型纖溶酶原激活物增加以及纖溶酶原激活物抑制劑復合物的增加都導致老年人的高凝狀態(tài)，所以更容易形成血栓；其中研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)期后的女性的血栓發(fā)生率遠高于男性。對于老年人骨質(zhì)疏松和血栓已成為常見多發(fā)病，且往往同時存在。如果患者服用多種藥物同時治療骨質(zhì)疏松和血栓，容易產(chǎn)生藥物拮抗反應(yīng)；若要錯開服藥時間一方面要靠考慮藥物的半衰期，另一方面還要考慮藥物有效濃度，而且給患者造成不便。目前缺乏一種可以同時有效治療骨質(zhì)疏松和血栓的藥品。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)要解決目前尚無同時有效治療骨質(zhì)疏松和血栓藥品的缺陷，而提供的一種用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸。本專利技術(shù)用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP_AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO 2所示。本專利技術(shù)上述用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP_AcAP5融合蛋白的核酸序列如SEQ IDNO 1所示。本專利技術(shù)用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP_AcAP5融合蛋白含有成骨生長肽(OGP)和犬鉤蟲抗凝血肽(AcAP5)，共94個氨基酸，成骨生長肽和犬鉤蟲抗凝血肽之間用GlyThr相連接。本專利技術(shù)用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-ACAP5融合蛋白可同時治療骨質(zhì)疏松和血栓,適合同時患有這兩種疾病的患者使用。本專利技術(shù)用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白微生物制劑，不產(chǎn)生拮抗反應(yīng)，使用安全。具體實施例方式本專利技術(shù)技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一本實施方式用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP_AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。本實施方式用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP_AcAP5融合蛋白的核酸序列如SEQID NO 1所示，該核酸序列由生物工程公司合成，制成含有融合蛋白的核酸的質(zhì)粒載體pUC(0GP/AcAP5)。將pUC(0GP/AcAP5)載體用BamH I和EcoR I雙酶切出來(酶切反應(yīng)體系如表I所示)，并用BamHI和EcoR I雙酶切pGEX_6P_l (酶切反應(yīng)體系如表2所示);再將本實施方式用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白的DAN片段(0GP/AcAP5)與 經(jīng)過雙酶切的載體PGEX-6P-1的連接(連接反應(yīng)體系如表3所示)。表I ~pUC (OGP/AcAP5)20 μ —IOxMbuffer6μ1BamHI3μ1 —EcoR I3μ1"^含 DNA 酶的 ddH2028μ1表2 載體 pGEX-6P-l20 μ 'IOxM buffer6μ1Bamm3μ1 'EcoR I_3μΙ_"^含 DNA 酶的 ddH2028μ1表3雙酶切的載體pGEX-6P-l3μΙ_] 融合蛋白的DNA片段13μ1 —I 10xT4 DNA 連接酶 buffer2μ1 IΤ4 DNA 連接酶2μ1 ~~融合蛋白的DAN片段與載體pGEX-6P-l 16°C放置連接過夜，得到載體pGEX_0GP/AcAP5 ;然后將載體pGEX-0GP/AcAP5轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21 (DE3)中，選擇陽性重組子命名為大腸桿菌 BL21 (DE3-0GP/AcAP5)。載體pGEX-6P-l上不含有KpnI酶切位點，本實施方式合成的pGEX_0GP/AcAP5均能為Kpn I單酶切開，說明本實施方式用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白基因成功導入質(zhì)粒PGEX-6P-1中。然后將質(zhì)粒pGEX-0GP/AcAP5導入大腸桿菌BL21(DE3)中，選取陽性克隆。隨機挑取陽性克隆大腸桿菌BL21 (DE3-0GP/AcAP5)菌落37 °C過夜培養(yǎng)，提取質(zhì)DNA，用KpnI進行單酶切，并用相應(yīng)的空白質(zhì)粒pGEX_6P_l作為對照，將含有KpnI酶切位點的質(zhì)粒進行基因測序。測序工作委托生物公司進行，大腸桿菌BL21(DE3-0GP/AcAP5)內(nèi)含有 SEQ ID NO 1 所示 DNA。將大腸桿菌BL21 (DE3-0GP/AcAP5)置于LB培養(yǎng)基28°C培養(yǎng)15h，然后采用GST標簽融合蛋白方法進行蛋白的分離純化，本實施方式用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白的純度為98%,融合蛋白表達量為38%。本實施方式融合 蛋白(0GP_AcAP5融合蛋白)治療骨質(zhì)疏松實驗取雌性SD大鼠，無菌條件下摘除雙側(cè)卵巢，陰性對照組切除雙側(cè)一小塊脂肪。5天后取存活健康大鼠32只，隨機分為4組，每組8只，分別口服一下藥物陰性對照組(control):質(zhì)量濃度為O. 5%的CMC-Na溶液，灌胃劑量為5ml/kg ；模型組(model):質(zhì)量濃度為O. 5%的0GP_AcAP5融合蛋白溶液，灌胃劑量為5ml/kg ；(獲得的用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白用無菌水溶解)陽性對照組I :阿侖膦酸鈉(Alen) 5mg/kg。陽性對照組2 :質(zhì)量濃度為O. 5%的OGP蛋白溶液，灌胃劑量為5ml/kg。連續(xù)給藥三個月，處死后各取大鼠股骨頭8只，浸入4%戊二醛中固定，用牙科金剛石鋸將股骨頭矢面鋸開，取其一片，經(jīng)清洗，10%次氯酸鈉浸泡6h，超聲清洗15min，乙醇梯度脫水，乙醚浸泡，干燥，離子濺射鍍膜，SX-40掃描電鏡觀察，加速電壓20kV。觀察骨質(zhì)疏松治療對比實驗結(jié)果，實驗結(jié)果見表4，結(jié)果表明模型組、陽性對照組I和陽性對照組2都具有治療骨質(zhì)疏松的作用，且模型組的效果最好。表4骨小梁寬度的比較和骨面積(X土SD)權(quán)利要求1.用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-ACAP5融合蛋白，其特征在于用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。2.編碼權(quán)利要求I用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的0GP-AcAP5融合蛋白的核酸，其特征在于該核酸的序列如SEQ ID N0:1所示。全文摘要用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的OGP-AcAP5融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸，它涉及一種融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸。解決目前尚無同時有效治療骨質(zhì)疏松和血栓藥品的缺陷。用于治本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的OGP？AcAP5融合蛋白，其特征在于用于治療骨質(zhì)疏松和血栓的OGP？AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ？ID？NO：2所示。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：余瓊，劉祺，
申請(專利權(quán))人：黑龍江大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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