本發明專利技術公開了miR-296-3p在制備腫瘤發生或轉移診斷試劑盒中的應用。研究發現，miR-296-3p通過作用于其靶基因CDH1，使其轉錄受抑制或降解，使E-鈣粘蛋白表達下降，從而促進前列腺癌細胞遷移侵襲。過表達miR-296-3p后，E-鈣粘蛋白的表達水平降低，腫瘤細胞間的粘附減弱，遷移侵襲能力增強。因此，檢測miRNA-296-3p和E-鈣粘蛋白的表達，可以對前列腺癌轉移進行診斷和病理分級，對其轉移和預后做出評價。圍繞miR-296-3p靶向E-鈣粘蛋白的特點可以設計腫瘤轉移干預策略，提出了anti-miR-296-3p在制備抑制前列腺癌侵襲轉移藥物中的應用。本發明專利技術在醫學和生物制藥領域有重大實際意義和巨大的潛在應用價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫學材料
，本專利技術公開了一種小分子非編碼RNA的用途，尤其涉及一種小分子非編碼RNA即miR-296-3p在制備腫瘤發生或轉移診斷試劑盒中的應用。
技術介紹
前列腺癌（prostate?cancer,Pca）是發生于男性前列腺組織中的惡性腫瘤，發病隨年齡而增長，其發病隱匿，生長緩慢，病因復雜，給臨床的早期診斷帶來很大的障礙。前列腺癌容易發生淋巴結轉移和骨轉移，是引起前列腺癌患者死亡的主要原因，也一直是基礎和臨床研究的熱點。前列腺癌的常用治療手段主要有內分泌治療、手術治療，化療和放療。比較新的免疫治療和基因治療也有巨大應用潛力。近年來不斷有文獻報道microRNA在腫瘤診斷和治療中的重要作用，前列腺癌特異性miRNA的發現為其診斷和治療打開了一個全新的局面。microRNA是一類內源性小分子非編碼RNAs，結構高度保守，具有表達時序性和組織特異性，通過與靶基因3’非編碼區(3’UTR)互補序列特異性結合，導致翻譯抑制或者mRNA降解，從而調節基因表達[1]。microRNA在惡性腫瘤中表達譜各異并發揮著重要的調控作用，隨著大規模、高通量miRNA檢測技術的推廣應用，發現新的miRNA不僅為腫瘤的診斷和預后提供了頗具價值的標準，同時也為尋找新的腫瘤生物治療靶標奠定基礎[2]。研究發現前列腺癌組織中存在miRNA表達譜差異，它們的表達水平和腫瘤細胞的分化程度密切相關，而常規的mRNA標志物不具備此特點。Kati?PP，Minja?JP等[3]檢測了前列腺組織和細胞中319種miRNA的表達譜，發現位于染色體缺失區域的miRNA低表達，而位于擴增區的miRNA高表達，它們通過靶向一些腫瘤相關基因如RAS、BCL2等最終影響前列腺腫瘤細胞或正常細胞的生長分化。Annika?Schaefer，Monika?Jung等[4]采用微陣列技術和實時熒光定量PCR分析了155例前列腺癌病人組織中miRNA的表達譜，結合臨床病例數據，通過ROC分析發現了可以作為診斷標志物的miR-205；而在Kaplan-Meier分析和Cox比例風險回歸分析之后，發現了可以作為預后診斷標志物的miR-96。首次報道與臨床前列腺癌療效和轉移相關的單個miRNA是miR-221[5]。Martin?Spahn，Susanne?Kneitz等在分析了不同類型的臨床標本之后發現：98%的前列腺癌組織中都伴隨有miR-221的特征性表達下調。根據Gleason評分或腫瘤分期和復發率，miR-221表達的進行性降低和高危腫瘤以及不良預后密切相關。而且miR-221的表達下調是前列腺癌特異性的，屬于轉移過程中的頻發事件。進一步的研究表明其可能的作用機制與c-kit致癌基因有關。基于前列腺癌中miR表達譜差異的一系列研究為后續的功能分析提供了豐富的證據，也為臨床診斷和預后評價以及尋找新的高危前列腺癌治療靶標開辟思路。P69和M12屬于前列腺癌同源細胞系，P69來源于SV40T永生化的人非致瘤性前列腺上皮細胞[6]。隨后通過裸鼠皮下成瘤實驗和在體篩選，得到了具有局部侵襲和遠端轉移能力的M12細胞。二者的遺傳背景一致，但是致瘤能力和轉移潛能差異很大，是研究前列腺癌轉移機制的理想模型。有關miR-296的研究報道還比較少，Thomas等報道miR-296能夠直接調控HGS?mRNA有效促進腫瘤血管發生[7]；miR-296能夠下調p21WAF1表達，改變p53-p21WAF1通路從而促進腫瘤發生[8]。現有的文獻所報道的miR-296多為miR-296-5p，對miR-296-3p的研究目前僅有6篇報道[9-14]，其中一篇主要針對膠質細胞瘤的藥物抵抗性[9]，其他研究主要集中在miR-296-3p與其它miRNA共同調節某個或某些基因的表達[10]，鮮有miR-296-3p對于腫瘤生長轉移相關功能的研究。我們的研究聚焦在miR-296-3p對于前列腺癌發生與轉移，對于腫瘤發生和轉移的治療具有重大意義。我們以非轉移性前列腺癌細胞系P69和高轉移性前列腺癌細胞系M12兩個細胞系為主要研究模型進行研究。參考文獻1.Esquela-Kerscher?A,Slack?FJ.Oncomirs-microRNAs?with?a?role?in?cancer[J].Nat?Rev?Cancer,2006,6(4):259-269。2.Lu?J,Getz?G.Microrna?expression?profiles?classify?human?cancers[J].Nature,2005,435:834-838。3.Porkka?KP，Pfeiffer?MJ,Waltering?KK,et?al.Microrna?expression?profilingin?prostate?cancer[J].Cancer?Res,2007,67(13):6130-5。4.Schaefer?A,Jung?M,Mollenkopf?HJ,et?al.Diagnostic?and?prognosticimplications?of?microrna?profiling?in?prostate?carcinoma[J].Int?J?Cancer,2010,126(5):1166-76。5.Spahn?M,Kneitz?S,Scholz?CJ,et?al.Expression?of?microrna-221?isprogressively?reduced?in?aggressive?prostate?cancer?and?metastasis?and?predictsclinical?recurrence[J].Int?J?Cancer,2010,127(2):394-403。6.Bae?VL,Jackson-Cook?CK,Maygarden?SJ,et?al.Metastatic?sublines?of?ansv40?large?t?antigen?immortalized?human?prostate?epithelial?cell?line[J].Prostate,1998,34(4):275-82。7.ThomasWu¨rdinger,BakhosA.Tannous，OkaySaydam,et?al.miR-296regulates?growth?factor?receptor?overexpressionin?angiogenic?endothelial?cells[J].Cancer?Cell;20本文檔來自技高網...
【技術保護點】
miR？296？3p在制備前列腺癌發生或轉移診斷試劑盒中的應用。
【技術特征摘要】
1.miR-296-3p在制備前列腺癌發生或轉移診斷試劑盒中的應用。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：余健秀，閆潔，黃建，王艷麗，
申請(專利權)人：上海交通大學醫學院，
類型：發明
國別省市：
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