甲型、乙型肝炎聯合疫苗及其制備方法技術

本發明專利技術公開一種甲型、乙型肝炎聯合疫苗，包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原為甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化的甲型肝炎病毒抗原，其含量為630～660EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量為重組釀酒酵母發酵表達并純化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量為15～30μg/ml。本發明專利技術可減少頻繁的接種次數和漏種的機會，提高接種成功率，降低接種成本，為控制這兩種肝炎的感染和流行提供了更為有效的途徑，且具有良好的安全性、免疫原性和穩定性。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及肝炎疫苗領域，尤其涉及一種。
技術介紹
病毒性肝炎是由多種肝炎病毒引起的以肝臟損害為主的全身性急性或持續性傳染病，在世界各地均有發病流行。在肝炎患者中30-50%屬于甲型肝炎(簡稱甲肝)。甲肝是一種自限性疾病，但極易引起爆發流行，與當地社會、經濟狀況和衛生水平密切相關。全世界每年報道甲肝病例約140萬，事實上，這個數值可能還要高 出3-10倍；而乙型肝炎(簡稱乙肝)已有超過1/3的世界人口被感染。乙肝是乙肝病毒引起的疾病，在世界各國均有流行，我國屬高流行區。WHO估計全世界約有36億乙肝攜帶者，每年約有100萬死于與之有關的慢性復雜性疾病和急性爆發死亡。盡管甲肝和乙肝的傳播途徑不一樣，但大量報道，住院的肝炎患者有相當一部分同時感染甲肝和乙肝。由于甲肝和乙肝疫苗的使用，這兩種肝炎的感染和流行得到了有效的控制。然而，隨著國家擴大免疫計劃，疫苗種類越來越多，免疫次數不斷增多，免疫程序復雜，免疫成本也不斷提高，也增加了漏種的機會。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種甲型、乙型肝炎聯合疫苗，該疫苗可減少頻繁的接種次數和漏種的機會，提高接種成功率，降低接種成本，為控制這兩種肝炎的感染和流行提供了更為有效的途徑，且具有良好的安全性、免疫原性和穩定性。本專利技術進一步所要解決的技術問題是提供一種甲型、乙型肝炎聯合疫苗的制備方法，該方法穩定可行，制備的聯合疫苗具有良好的安全性、免疫原性和穩定性。為解決上述技術問題，本專利技術采用如下技術方案—種甲型、乙型肝炎聯合疫苗，包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原為甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化的甲型肝炎病毒抗原，其含量為630 660EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量為重組釀酒酵母發酵表達并純化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量為15 30 μ g/ml。優選地，還包括有免疫鋁佐劑，其含量為O. 35 O. 62mg/ml。優選地，所述甲型肝炎病毒抗原含量為640EU/ml。優選地，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量為20yg/ml。 優選地，所述的甲型肝炎病毒毒株為自分離的SH株。優選地，所述的重組釀酒酵母菌種為美國默克公司以DNA重組技術構建的表達HBsAg的重組釀酒酵母。相應地，本專利技術還公開了一種甲型、乙型肝炎聯合疫苗的制備方法，該方法包括以下步驟甲型肝炎病毒抗原制備步驟，將甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化，得到甲型肝炎病毒抗原；乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制備步驟，將重組釀酒酵母發酵表達并純化，乙型肝炎病毒表面抗原蛋白；混合步驟，將所述甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白混合，調節pH值至6. O 7. O之間，制成甲型、乙型肝炎聯合疫苗。優選地，所述甲型肝炎病毒抗原制備步驟具體包括甲肝病毒原液制備步驟，將甲型肝炎病毒毒株SH與人胚肺二倍體細胞混合吸附后接種至細胞工廠，于34-35°C下培養，至病毒增殖高峰期后，用胰酶消化含甲肝病毒的細胞，收獲細胞病毒液，經超聲破碎，氯仿抽提，超濾膜超濾，去除細胞雜蛋白，再經凝膠層析純化，按抗原含量用磷酸鹽緩沖液稀釋至抗原含量不低于3200EU/ml后，過濾除菌，甲醛滅 活，即得甲肝病毒原液；甲型肝炎病毒抗原鋁吸附產物制備步驟，將滅活后的甲肝病毒原液加入硫酸鉀鋁溶液吸附18-24小時后，用無菌生理鹽水洗滌，去上清液后，用生理鹽水稀釋至抗原含量不低于3200EU/ml，制成甲肝病毒抗原鋁吸附產物；優選地，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制備步驟具體包括乙肝病毒表面抗原蛋白原液制備步驟，將美國默克公司以DNA重組技術構建的表達HBsAg的重組釀酒酵母工作種子批菌種經錐形瓶、種子罐、生產罐進行發酵培養，收獲酵母菌，經高壓勻漿器破碎酵母菌，濾膜過濾除去酵母菌碎片，以硅膠吸附法粗提HBsAg，疏水色譜法純化HBsAg，用硫氰酸鹽處理，按蛋白濃度用磷酸鹽緩沖液稀釋至抗原蛋白濃度為600-800EU/ml，除菌過濾后即為原液；原液中加入終濃度為100 μ g/ml甲醒，在34_38°C保溫72_96小時滅活，滅活后蛋白質和鋁劑按I μ g蛋白質加入3. 86mg的比例混合，置2-8°C吸附沉降18-24小時，用無菌生理鹽水洗滌,去上清液后再恢復至原體積,制成HBsAg吸附產物；優選地，所述混合步驟具體包括將甲肝病毒抗原鋁吸附產物與HBsAg吸附產物等比例混合后，用O. lmol/L的HCl調節PH值至6. O 7. O之間，制成甲型、乙型肝炎聯合疫苗，其中含甲肝病毒抗原640EU/ml，HBsAg 為 20 μ g/ml。本專利技術的有益效果是本專利技術的實施例通過將以甲型肝炎病毒毒株SH株經人胚肺二倍體細胞培養得到的甲型肝炎病毒抗原和以重組釀酒酵母發酵表達的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白混合，制成甲型、乙型肝炎聯合疫苗，從而減少了頻繁的接種次數和漏種的機會，提高了接種成功率，降低了接種成本，為控制這兩種肝炎的感染和流行提供了更為有效的途徑，且具有良好的安全性、免疫原性和穩定性。具體實施例方式下面詳細描述本專利技術提供的甲型、乙型肝炎聯合疫苗的實施例。實施例1本實施例主要包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原為甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化的甲型肝炎病毒抗原，其含量為630 660EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量為重組釀酒酵母發酵表達并純化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量為15 30 μ g/ml。另外，本實施例還可包括有免疫鋁佐劑，免疫鋁佐劑的含量為O. 35 O. 62mg/ml。實施例2本實施例主要包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原為甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化的甲型肝炎病毒抗原，其含量為640EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量為重組釀酒酵母發酵表達并純化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量為20 μ g/ml，免疫鋁佐劑的含量為O. 35 O. 62mg/ml。 具體實現時，本實施例采用的甲型肝炎病毒毒株SH株，為本公司新分離的產毒量高、培養周期短、人胚肺二倍體細胞適應良好的毒株，可有效提高病毒產率，且安全性更好；采用細胞-病毒混合吸附技術以大大提高了病毒產量，縮短病毒培養周期，以及細胞工廠培養細胞技術，有效利用空間，節省廠房面積，提高疫苗生產能力。本實施例采用的菌種為美國默克公司以DNA重組技術構建的表達HBsAg的重組釀酒酵母。重組乙型肝炎疫苗的整套生產工藝為深圳康泰生物制品股份有限公司從國際著名制藥公司默克(默沙東)公司引進，自1994年投產以來，累計銷售2億多人份，安全性和有效性得到了極高的評價，這為甲型、乙型肝炎聯合疫苗的研制提供了有力的技術支持與可靠的單價疫苗保障供應。下面詳細描述本專利技術提供的甲型、乙型肝炎聯合疫苗的實施例。實施例3本實施例主要包括以下步驟甲型肝炎病毒抗原制備步驟，將甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化，得到甲型肝炎病毒抗原；乙型肝炎病毒表面抗原蛋白制備步驟，將重組釀酒酵母發酵表達并純化，乙型肝炎病毒表面抗原蛋白；混合步驟，將所述甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白混合，調節pH值至6. O本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種甲型、乙型肝炎聯合疫苗，其特征在于：包括有甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其中，所述甲型肝炎病毒抗原為甲型肝炎病毒經人胚肺二倍體細胞培養收獲并純化的甲型肝炎病毒抗原，其含量為630～660EU/ml，所述乙型肝炎病毒表面抗原蛋白含量為重組釀酒酵母發酵表達并純化的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白，其含量為15～30μg/ml。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃秋香，張現臣，魏文進，曾瀅，甘建輝，李思勤，劉雨，王春雨，鐘漢斌，孟紅彥，黎武軍，
申請(專利權)人：深圳康泰生物制品股份有限公司，
類型：發明
國別省市：